华中农业大学动物医学院湖北省预防兽医学重点实验室
- 作品数：39 被引量：315H指数：8
- 相关作者：梅仕林喻翠翠周蕾蕾陈辉段晓明更多>>
- 相关机构：长江大学动物科学学院河南科技学院动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划湖北省科技攻关计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 2007年华北地区H3N8亚型马流感病毒的分离与鉴定被引量：13
- 2010年
- 2007年10月,华北地区某赛马场的马同时发生了以发烧、流水样鼻汁或脓性分泌物、咳嗽等临床症状为主的疾病,疑似马流行性感冒。采集患病赛马的鼻腔分泌物,发病期和发病后14d血清,经鸡胚接种法分离病毒,并用鸡红细胞血凝抑制试验(HI)、神经氨酸酶抑制试验(NI)、病毒回归试验、血清学检测和基因序列分析对分离的病毒进行了系统鉴定。结果表明分离的毒株(A/equine/Huabei/1/2007(H3N8)为马源H3N8亚型马流感病毒,基因型属于美洲分支。我们通过动物回归感染试验建立起分离毒株的实验感染模型。
- 蒋桃珍刘月焕林健韩春华潘洁赖平安韦海涛祝俊杰赵景义马志军毕丁仁
- 关键词：马流感病毒H3N8
- 鸡主要呼吸道病的免疫防控
- 2023年
- 鸡呼吸道病是一类严重危害我国养鸡业健康发展的疾病。禽流感、禽传染性支气管炎、鸡滑液支原体感染和鸡传染性鼻炎是影响当前规模化养鸡场经济收益最为主要的呼吸道病。疫苗免疫和生物安全是鸡呼吸道病防控的重要措施。本文介绍了鸡的6种呼吸道病及其流行特点,提出了免疫防控措施,以期为养鸡场解决生产实际问题、提高鸡群呼吸道病的防控水平及降低经济损失提供参考。
- 王纯崔卫涛杨皓周祖涛
- 关键词：禽流感疫苗免疫生物安全
- 鸡毒霉形体HS株TM-1基因的克隆与原核表达
- 2009年
- 郝卫芳石德时张改文李奎张进良田文霞毕丁仁
- 关键词：TM-1基因克隆与原核表达鸡毒霉形体HS株病原性大肠杆菌鸡败血霉形体
- 猪FcRn胞浆尾区的克隆表达及多克隆抗体制备
- 本研究采用RT-PCR方法从猪肝脏总RNA中克隆猪FcRn基因,然后利用PCR技术亚克隆猪FcRn胞浆尾区(FcRn-CT),构建重组原核表达质粒KG-CT和pET32a-CT,分别在大肠杆菌BL21中获得了高效表达,并...
- 崔惠娟洪素梅陈志虎毕丁仁李自力
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 文献传递
- 基于结核菌素与CFP10/ESAT6的牛IFN-γ检测法在牛结核病诊断中的比较研究被引量：8
- 2008年
- 本研究通过比较三种刺激物(牛结核菌素、禽结核菌素和牛型结核菌特异性抗原CFP10/ESAT6对结核菌素皮内变态反应阳性牛的IFN-γ刺激反应,探讨IFN-γ检测法在我国牛结核病诊断中的应用前景。无菌采集22头结核菌素皮内变态反应阳性牛的血液,肝素抗凝。每1mL全血与1mLRPMI1640完全培养基混合均匀,并加入0.1mL(20μg)PHA(阳性对照孔)、0.1mL(20μg PHA)CFP10/ESAT6融合蛋白、0.1mL(2000U)牛结核菌素(PPD/B)、0.1mL(2500U)禽结核菌素(PPD/A)或等量PBS(无刺激阴性对照),37℃培养过夜。次日用夹心ELISA法检测各刺激组0.1mL培养上清的IFN-γ,以OD630表示IFN-γ浓度。结果,特异性抗原CFP10/ESAT6刺激组与牛结核菌素(PPD/B)刺激组的IFN-γ反应具有良好的相关性,相关系数为0.84。但CFP10/ESAT6刺激组IFN-γ浓度与牛和禽PPD的比较反应(以两刺激组IFN-γ浓度差值表示)间无相关性,相关系数为-0.11。分析禽PPD组的IFN-γ反应,发现实验牛中有少数牛对禽PPD有反应。以OD630=0.17为阳性反应切割值,牛PPD检出阳性牛21头,CFP10/ESAT6检出20头,牛和禽PPD比较反应(以OD值差值表示)检出14头,禽PPD阳性反应3头。扣除禽PPD阳性反应牛后,牛和禽PPD比较反应与牛PPD刺激组的相关系数增至0.54。结果表明,牛PPD的IFN-γ释放反应检测灵敏度最高。当出现牛型结核菌与环境分枝杆菌混合感染时,应用牛和禽PPD比较反应检测牛结核的准确度低,混合感染牛被误判为结核阴性牛。而基于CFP10/ESAT6的IFN-γ释放反应不受环境分枝杆菌的影响,检测具有良好的特异性与敏感性。
- 陈颖钰邓铨涛郭爱珍晁彦杰匡有吉匡有吉陈焕春
- 关键词：牛结核牛结核菌素CFP10ESAT6
- 奶牛β-干扰素在大肠杆菌中高效表达和生物活性分析被引量：2
- 2010年
- 提取经植物血凝素诱导培养的中国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛β-干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上。测序结果表明,扩增片段为奶牛β-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达。表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在,表达量约占细菌总蛋白的40%。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛β-干扰素抗病毒活性分别约3.16×105U/mL,7.5×104U/mL。结果表明,重组奶牛β-干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定。本研究为研制和开发重组奶牛β-干扰素类生物制品研发奠定了基础。
- 刘颖刘华兰杨利国陈焕春郭爱珍
- 关键词：奶牛Β-干扰素融合蛋白抗病毒活性
- 鸭疫里默氏杆菌OmpA基因的克隆与表达被引量：4
- 2008年
- 利用本实验室分离、鉴定并保存的鸭疫里默氏杆菌血清1型湖北云梦分离株(RA-YM),根据GenBank上的序列设计了1对引物,用PCR方法扩增了RA-YM株的主要外膜蛋白OmpA基因,并克隆到pMD18-T载体,序列测定结果表明OmpA基因全长1152bp,序列同源性分析表明该基因相当保守,与其他不同RA菌株OmpA基因之间的核苷酸序列同源性为93%～97%。用pGEX-KG构建了原核表达载体pKG-OmpA,在大肠杆菌中进行了高效表达,表达蛋白约占菌体总蛋白的30%,主要为包涵体形式。SDS-PAGE电泳结果显示表达的融合蛋白大小约为68000,Western-blot结果表明该表达蛋白具有抗原性。
- 周祖涛陈芬芬李自力胡思顺孙淑娜吴仁蔚肖运才许青荣毕丁仁
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌克隆原核表达
- 禽流感病毒感染与疫苗免疫鉴别诊断试纸条的研制及应用被引量：5
- 2009年
- 【目的】结合胶体金免疫层析技术建立一种适合养鸡业基层生产人员使用的便捷的快速诊断禽流感病毒感染鸡群的方法。【方法】将含禽流感病毒非结构基因ns1的表达载体KG-NS1转化入BL21(DE3)感受态细胞,筛选阳性克隆进行诱导表达,表达产物用GST亲和层析柱进行纯化和Western-blot分析;以NS1重组蛋白为诊断抗原,抗鸡IgFc的单抗标记的胶体金为示踪物,结合免疫层析技术,组装禽流感病毒NS1抗体的免疫胶体金鉴别诊断试纸条,评价其灵敏度和特异性,并对试验感染和临床采集的血样进行检测。【结果】NS1重组蛋白分子量约为52kD,具有免疫学活性。在25min内用肉眼观察到禽流感病毒感染鸡血清和NS1蛋白免疫鸡血清在试纸条的检测线处出现明显的棕红色,呈明显的阳性反应,而其它病原的血清在试纸条的检测线处不出现任何颜色,呈阴性反应。而且感染鸡群的NS1抗体在感染后3d即可检测到,感染后1～2周为高峰期,维持时间约1周,检测阳性率为80%左右。临床样品的阳性率为9.1%。【结论】试纸条使用方便,操作简单,25min内可以用肉眼判断结果,可区分禽流感疫苗免疫和野毒感染家禽,具有很大的推广应用价值。
- 胡思顺郑兴华蔡开妹彭伏虎张文泽李自力肖运才刘梅毕丁仁
- 关键词：禽流感NS1蛋白胶体金试纸条
- 肠出血性大肠杆菌O157:H7胶体金检测试纸条的研制
- 谢世琦孟宪荣栗绍文王倩潘秀华张超张丽媛
- 关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体胶体金
- 文献传递
- 表达乙脑病毒PrM基因重组伪狂犬病病毒的构建被引量：8
- 2007年
- 本研究以乙型脑炎病毒SA14-14-2疫苗株基因组RNA为模板,采用RT-PCR一步法扩增了PrM基因的全长cDNA(558 bp),用BamHI和EcoRI双酶切PrM基因的扩增产物,回收目的基因后将其克隆至经同样酶切的伪狂犬病病毒通用转移载体pPgG-uni中,获得了转移载体pPgG-PrM,并对其外源片段进行了测序。序列分析结果表明:与已报道的乙型脑炎病毒SA14强毒株和SA14-14-2疫苗株的核苷酸序列比较,PrM基因的同源性为100%。以伪狂犬病病毒Ea株TK-/gG-/LacZ+突变株为载体构建了一株表达乙型脑炎病毒PrM基因的重组伪狂犬病病毒TK-/gG-/PrM+,为进一步开展猪乙型脑炎与伪狂犬病二价基因工程疫苗的研究奠定了基础。
- 李自力陈焕春徐高原方六荣肖少波王祥何启盖
- 关键词：乙型脑炎病毒重组伪狂犬病病毒
