中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生实验室
- 作品数：19 被引量：64H指数：5
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- 抗PRV gC抗体制备及PRV gC表达的分析
- 原核表达PRV gC功能区片段,纯化的重组蛋白His-gCN813制备抗PRV-gC多克隆抗体;PCR克隆PRV gC全长基因,构建gC真核表达质粒,在真核细胞中表达gC基因;制备的抗体分析原核细胞和真核细胞表达的gC蛋...
- 刘庆伟邱亚峰王晓杜郭林刘超沈阳李向东单虎马志永
- 关键词：伪狂犬病病毒WESTERN-BLOT
- 文献传递
- 抗伪狂犬病病毒gC抗体制备及其gC蛋白表达被引量：5
- 2011年
- 用纯化的重组蛋白His-gCN813制备抗PRV-gC抗体,并分析伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gC蛋白在真核细胞的表达情况。本研究以提取的病毒基因组为模板,PCR克隆PRV gC全长基因,构建gC真核表达质粒p3xFLAG-gC,在真核细胞中表达gC基因;纯化蛋白His-gCN813制备的抗体,Western blotting和间接免疫荧光(IFA)检测到p3xFLAG-gC转染真核细胞和PRV感染细胞中的gC蛋白。结果表明本试验成功构建了PRVgC基因真核表达系统,获得了特异性抗PRV gC抗体,重组gC真核表达质粒p3xFLAG-gC转染Vero细胞,表达的重组蛋白gC为72 ku,PRV感染Vero细胞,表达的gC蛋白为55、72和94 ku,主要定位在细胞浆,gC蛋白可以作为PRV感染的指示分子,为下一步研究PRV和宿主相互作用及PRV的复制奠定了基础。
- 刘庆伟邱亚峰王晓杜郭林刘超沈阳李向东单虎马志永
- 关键词：伪狂犬病病毒
- 呋喃它酮代谢物人工抗原及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2013年
- 本文利用对醛基苯甲酸(CPA)与呋喃它酮代谢物(AMOZ)进行衍生化,得到衍生物CPAMOZ,并通过质谱法对其结构进行确证。然后采用混合酸酐法将CPAMOZ与载体蛋白偶联,采用紫外扫描(UV)法对偶联物进行验证。用偶联成功的人工全抗原(CPAMOZ-BSA)免疫BALB/c小鼠,间接ELISA测定小鼠血清抗体效价为1∶8×104,对NPAMOZ的半数抑制量为26.55μg/L,间接竞争ELISA鉴定小鼠血清多克隆抗体,与NPAMOZ、CPAMOZ的交叉反应率分别为100%、44.8%,与AMOZ、对醛基苯甲酸、对硝基苯甲醛以及同类其他三种药物呋喃妥因、呋喃西林、呋喃唑酮等原药及其代谢物以及代谢物衍生物的交叉反应均小于0.01%。结果表明,制备的AMOZ多克隆抗体效价高、特异性强,灵敏度高,为进一步制备AMOZ单克隆抗体和研制快速筛选检测试剂盒奠定了基础。
- 刘迎春蒋蔚陈永军高艺林石金磊王权
- 关键词：人工抗原化学合成
- 建立水产品中己烯雌酚残留ELISA检测方法被引量：7
- 2010年
- 本试验利用己烯雌酚（DES）单克隆抗体,通过优化反应条件,加标回收试验,确定ELISA检测方法相关参数,建立了己烯雌酚残留的酶联免疫吸附（ELISA）检测法。试验结果显示,包被抗原最佳浓度为2μg/mL,DES单克隆抗体最佳稀释倍数为1∶3×10^4;标准曲线呈线性相关,相关系数R2=0.9956,IC50=1.103 ng/mL,最适检测范围为0.125-128 ng/mL,检测敏感度为0.077 ng/g;批内和批间变异分别为6.14%和7.48%;鳝鱼肌肉组织的加标回收率为77.6%-94.6%;特异性试验结果表明,该单抗与己烯雌酚单羧丙基醚交叉反应率为112.7%,与其它水产禁用药物交叉反应率〈0.1%。
- 赵新宇王权闫叶娜
- 关键词：己烯雌酚药物残留酶联免疫吸附法
- 热休克蛋白gp96的免疫作用概述
- 本文概述了热休克蛋白gp96在诱导获得性免疫应答和先天性免疫应答方面的作用及机理,同时,对gp96发挥免疫相关作用的区域进行阐述;另外,对gp96的同源物鸡HSP108的作用进行介绍,并就HSP108在新型鸡马立克氏病病...
- 邱亚峰葛菲菲曹瑞兵周斌沈阳马志永陈溥言
- 关键词：热休克蛋白免疫应答GP96马立克氏病病毒
- 文献传递
- 伪狂犬病病毒Bartha株gC膜外区部分基因的原核表达及纯化被引量：1
- 2009年
- 构建伪狂犬病病毒(PRV)gC膜外区部分基因的重组质粒,原核表达并纯化目的蛋白。根据GenBank已发表的伪狂犬病病毒Bartha(PRV Ba)株gC基因的序列(NC EU719641),设计并合成了1对引物,以PRV Ba株为模板,PCR扩增出PRV gC膜外区部分基因片段;将该基因片段克隆到原核表达载体pET-28a上,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导,获得大小为35 ku的重组蛋白,命名为pET-gCN813。按照His-Bind纯化试剂盒说明书纯化表达产物,获得融合蛋白的纯化产物。
- 刘庆伟邱亚峰王晓杜郭林刘超沈阳李向东单虎马志永
- 关键词：伪狂犬病病毒GC基因原核表达融合蛋白
- 孔雀石绿单克隆抗体的制备及其鉴定被引量：22
- 2007年
- 用人工合成的无色孔雀石绿-兔血清白蛋白(LMG-RSA)作抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术筛选抗无色孔雀石绿的单抗,单抗经纯化后对其特异性和灵敏性进行了鉴定,探讨了建立孔雀石绿的免疫学检测方法。结果显示,经细胞融合和筛选得到了1株分泌抗无色孔雀石绿单克隆抗体的杂交瘤细胞5E9。经鉴定,该杂交瘤细胞的染色体数为98.82±5.6,间接ELISA检测小鼠腹水的抗体效价达1.3×105,该细胞连续培养10代以上,生物学性状稳定,间接竞争ELISA(ciELISA)结果显示,无色孔雀石绿50%抑制的质量浓度为18.5μg/L,除孔雀石绿外,与其他类似结构和相关类型的药物没有交叉反应,表明该单抗用于孔雀石绿的检测有较大的应用价值。
- 龚朋飞王权陈永军
- 关键词：孔雀石绿单克隆抗体
- 抗猪伪狂犬病病毒gH抗体的制备及gH在感染细胞中表达分析
- 2011年
- 为检测伪狂犬病病毒(PRV)在体外细胞中糖蛋白H(gH)的表达情况,本研究构建原核表达重组质粒pET-gHN660,并在大肠杆菌中诱导表达重组蛋白,纯化的gH重组蛋白免疫实验动物制备抗PRVgH抗体,经westernblot和IFA检测到病毒感染细胞中gH蛋白的表达,病毒感染细胞后表达的gH蛋白大小为95ku,定位于细胞浆中,gH蛋白在病毒感染细胞4h可以检出,随PRV的复制gH蛋白表达增加,gH蛋白可以作为PRV复制的指示蛋白。本研究利用制备的抗体分析感染细胞中gH蛋白的表达情况,初步探讨感染细胞中PRV的复制,为PRV和宿主相互作用的研究奠定基础。
- 刘庆伟邱亚峰王晓杜郭林刘超沈阳李向东单虎马志永
- 关键词：伪狂犬病病毒GH基因
- 孔雀石绿间接竞争ELISA检测方法的建立被引量：10
- 2010年
- 采用无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)单克隆抗体建立了水产品中孔雀石绿(Malachite green,MG)残留的间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法。结果表明,LMG-McAb最佳稀释倍数为1∶80 000,包被抗原最佳质量浓度为0.80μg/mL;竞争反应时的LMG理想稀释液为40%乙腈水溶液;标准曲线呈线性相关,相关系数R2=0.9823,最适检测范围1 ng/mL^256 ng/mL,最低检测限为1.29 ng/mL,批内和批间变异系数分别为4.307%和4.566%;鳗鱼肉样的平均添加回收率为90%~110%;该检测方法与隐性结晶紫、孔雀石绿、结晶紫的交叉反应(CR%)分别为40.67%、13.50%和5.89%,与其他抗生素无交叉反应。
- 王权郭德华李健蒋蔚赵新宇
- 关键词：孔雀石绿间接竞争ELISA
- 抗大田软海绵酸单克隆抗体的制备及免疫学特性分析
- 大田软海绵酸是腹泻性贝毒素(DSP)的主要致病因子，其藻源在我国分布范围广，引发的中毒事件最多，危害最大，引起的中毒症状包括腹泻、恶心、呕吐、下腹疼痛等，还是潜在的致癌因子，而我国迄今为止尚没有一种较合适于现场使用的软海...
- 胡乐琴柳俊秀王权何培民
- 关键词：单克隆抗体免疫检测
- 文献传递
