军事医学科学院野战输血研究所病毒安全检测实验室
- 作品数：26 被引量：55H指数：5
- 相关作者：王建国郑霖叶小丽杨妹张兰兰更多>>
- 相关机构：广西大学动物科学技术学院吉林农业大学生命科学学院吉林大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学经济管理更多>>
- ELISPOT技术在人类新发传染病疫苗研究中的应用
- 新发传染病(EID)是指在过去20年中发病率增加或在不久的将来可能增加的人类传染病，包含“回潮”的老传染病和新出现的传染病。本文从原理、具体实验操作、技术优势和在新发传染病疫苗研究中的应用等几方面对ELISPOT技术进行...
- 郑霖马玉媛田克恭章金刚
- 关键词：新发传染病免疫血清学酶联免疫斑点法
- 文献传递
- 蓝舌病毒群特异性RT-PCR检测技术及其应用被引量：2
- 2008年
- 目的:建立一种适于蓝舌病毒(BTV)群特异性基因检测的RT-PCR方法。方法:根据本实验室设计的一对BTVNS1基因通用型检测引物建立BTV群特异性RT-PCR检测技术;对不同血清型BTV及鹿流行性出血热病毒(EHDV)进行检测,验证其特异性;同时,利用该方法检测血清模拟样品及抗病毒血清样品。结果:所设计的检测方法特异性好,与EHDV无交叉反应,可检测至少17个血清型BTV,并能有效检出不同病毒浓度的模拟样品及不同型的血清样品。结论:建立的RT-PCR方法可用于BTV群的特异性通用检测。
- 尹惠琼张燕霞孙宇张兰兰孙卫华杨姝李晓成章金刚
- 关键词：蓝舌病毒BTV
- 反转录病毒载体介导的猪APOBEC3F在猪源细胞PK15中的表达
- 2012年
- 目的：利用反转录病毒载体构建猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白（APOBEC）3F重组质粒,并实现其在猪肾细胞PK15中的表达。方法：用RT-PCR方法扩增五指山猪来源的外周血淋巴细胞APOBEC3F基因,将其定点插入反转录病毒载体pMSCV neo中,同时于插入位点两侧分别添加FLAG和GFP标签,构建重组质粒pMSCV-FLAG-A3F-GFP,并进行酶切、测序鉴定;将鉴定正确的重组质粒与pVSV-G、pGag-Pol共转染包装细胞HEK293T,分别于转染后48~72 h收集细胞的培养上清以获得假型病毒粒子;用该假型病毒感染猪源细胞PK15,通过PCR、Western印迹检测目的基因的整合及表达。结果：PCR扩增到1254 bp的猪APOBEC3F基因,重组质粒pMSCV-FLAG-A3F-GFP经酶切、测序,结果无误;3质粒共转染HEK293T细胞包装出的假型病毒感染PK15细胞后观察到GFP表达;从感染假型病毒的PK15细胞基因组中扩增到1254 bp的猪APOBEC3F基因,Western印迹检测到78.1×103的猪APOBEC3F蛋白的表达。结论：实现了反转录病毒载体介导的猪APOBEC3F在猪源细胞PK15中的整合与表达,为深入研究该分子对猪内源性反转录病毒（PERV）的抑制作用奠定了基础。
- 罗佳张念孙宇吴健敏陆芹章马玉媛章金刚
- 关键词：反转录病毒载体真核表达
- 血液制品病毒灭活/去除技术平台的建立与应用被引量：5
- 2015年
- 目的建立血液制品病毒灭活/去除技术并应用于血液制品的病毒灭活/去除工艺验证。方法建立指示病毒库以及S/D处理法、低pH孵放法、干热法、巴氏消毒法、纳米膜过滤法等血液制品病毒灭活/去除技术,采用细胞病变法测定病毒滴度,Spearman和Karber法计算病毒滴度,病毒滴度降低量(LRV)≥4判为有效,对企业的血液制品样品进行病毒灭活/去除验证。结果 S/D处理法和低pH孵放法可有效灭活有包膜指示病毒,干热法和巴氏消毒法可有效灭活有、无包膜指示病毒,纳米膜过滤法可在一定过滤量范围内去除PPV指示病毒。结论所建立的血液制品病毒灭活/去除技术可用于血液制品的病毒灭活/去除工艺验证,以提高血液制品的病毒安全性。
- 尹惠琼王蕊朱凤宣王建国章金刚
- 关键词：血液制品病毒灭活消毒
- 五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因变异特征研究被引量：2
- 2013年
- 为分析近交系连续3代次五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因(PERV-env)变异特征,本研究采用PCR方法对该基因进行扩增、克隆和序列测定,将其与参考序列比对和遗传进化分析。序列分析显示:PERV-env核苷酸序列与参考序列之间的同源性为98.3%～99.3%,具有明显G→A突变,并且偏好发生于GA、GG。进一步分析表明,在PERV-env序列190 bp和1 875 bp位置均有G→A突变发生。PERV-env基因遗传进化树分析表明,五指山来源的PERV与国外小型猪PERV-A亲缘关系较近,但仍存在差异。本实验将有助于PERV分子特性的研究,为进一步开展异种移植中PERV的安全性评价奠定基础。
- 张念马玉媛向思龙贾俊婷吴健敏章金刚
- 关键词：近交系五指山小型猪猪内源性反转录病毒囊膜基因
- 蓝舌病病毒新型金纳米探针检测技术
- 对传统生物条形码检测技术进行改进，建立用于蓝舌病病毒VP7快速、灵敏检测的新型金纳米探针检测技术。利用金纳米颗粒标记抗VP7多克隆抗体、单链条形码DNA制成金纳米探针。利用磁颗粒标记抗VP7单克隆抗体制成磁颗粒探针。金纳...
- 尹惠琼贾茗娴杨妹靖培培王蕊章金刚
- 关键词：蓝舌病病毒实时定量PCR
- 利用生物条形码技术对蓝舌病毒VP7蛋白进行微量检测被引量：7
- 2008年
- 目的:建立高灵敏检测蓝舌病毒VP7蛋白的生物条形码检测方法。方法:制备VP7蛋白的多抗及特异DNA链标记的金纳米颗粒探针(NP)和VP7蛋白单抗标记的磁性微球探针(MMP),形成MMP-VP7蛋白-NP三明治复合物后,再利用去杂交将NP探针上标记的DNA链释放出来,通过PCR或芯片检测方法鉴定释放的DNA链,确定VP7蛋白的存在。结果:建立了蓝舌病毒VP7蛋白的生物条形码检测体系,检测灵敏度可达10fg/mL,为常规ELISA检测的106倍。结论:为发展高灵敏度的蓝舌病毒生物条形码检测试剂盒鉴定了基础。
- 张立营张红杨姝吕茂民尹惠琼张改平李德雪章金刚
- 关键词：蓝舌病毒VP7蛋白
- 嗜人性猪内源性反转录病毒感染性克隆感染人胚肾细胞HEK293后Stathmin蛋白差异表达分析
- 2010年
- 目的 分析嗜人性猪内源性反转录病毒（porcine endogenous retroviruses,PERV）感染的人源细胞中Stathmin蛋白的差异表达情况,探索嗜人性PERV感染人源细胞后可能产生的效应机制.方法 嗜人性PERV感染性克隆感染HEK293细胞,采用PCR、实时定量RT-PCR、免疫荧光分析确认PERV感染,利用实时定量RT-PCR和免疫印迹法分析Stathmin蛋白表达差异.结果 嗜人性PERV感染性克隆成功感染HEK293细胞,实时定量RT-PCR和免疫印迹法检测结果表明,PERV感染后Stathmin蛋白与对照相比表达上调.结论 嗜人性PERV感染HEK293细胞后Stathmin表达上调,该研究结果为深入研究嗜人性PERV与人源细胞的相互作用及PERV感染后的分子效应等提供了线索,也提示了PERV感染后可能会对细胞的生长、生理功能等造成影响,甚至存在潜在的致病性.对探索嗜人性PERV感染人源细胞后可能产生的效应以及猪→人异种移植的病毒安全性评价也具有重要意义.
- 颜奇坡马玉媛吕茂民叶小丽郑霖吴健敏田克恭章金刚
- 关键词：猪内源性反转录病毒HEK293细胞STATHMIN
- 猪IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的TaqMan实时定量RT-PCR检测体系的建立被引量：2
- 2011年
- 为了解猪体内细胞免疫应答机制,本研究建立猪细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的TaqMan实时定量RT-PCR检测体系。以五指山小型猪cDNA为模板,扩增IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的基因保守区,构建相应的重组质粒,并将其作为标准品构建标准曲线。结果显示,各标准曲线的相关系数r值均大于0.990,扩增效率为90%～105%;该检测方法的敏感性较高,IL-4检测下限为1copies/μL,IL-2、IL-10及IFN-γ检测下限达为102copies/μL;重复性较好,批内重复试验与批间重复试验变异系数均小于5%。本研究为病毒感染后猪体内免疫应答等研究提供方法。
- 马玉媛郭逸颜奇坡叶小丽张启模郑霖田克恭章金刚
- 关键词：实时定量RT-PCR
- 生物技术产品的病毒安全性被引量：7
- 2007年
- 生物医药技术的迅猛发展引起了医药行业的重大革命,生物医药已经成为最为活跃、发展最快的产业之一,上市和正在研发的产品不断增加,"重磅炸弹"级生物产品不断出现.纵观世界各国政府和行业主管部门,大多均将生物技术和生物医药作为经济发展中的重点支持行业和高新技术发展中的支柱产业,其发展空间和发展前景倍受金融巨头的关注[1-3].……
- 章金刚
- 关键词：病毒安全性动物源生化制品生物技术产品
