杭州大学生命科学学院免疫工程实验室
- 作品数：6 被引量：22H指数：2
- 相关机构：浙江大学生物科学与技术系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人γ干扰素/β肿瘤坏死因子融合蛋白原核细胞高效表达研究被引量：2
- 1998年
- 利用ＤＮＡ重组技术，在构建人γ干扰素突变体（ｈＩＦＮγ１３４Ｘ１３）表达质粒，取得高效表达的基础上，再将人β肿瘤坏死因子（ｈＴＮＦβ１４３，Ｎ端缺失２３ａａ）的ＤＮＡ片段亚克隆到该质粒外源编码序列的３′端，构建成人γ干扰素／β肿瘤坏死因子融合蛋白（ｈγＴＮＦβ）的重组基因表达质粒，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）。含有ｈγＴＮＦβ重组基因的阳性菌经温度（４２℃）诱导，在λＰＲＰＬ启动子的控制下，高效表达了ｈγＴＮＦβ。ＳＤＳＰＡＧＥ结果显示，在理论分子量３０ｋＤ处出现特异的目的蛋白表达带，表达量约占全菌蛋白的１８％。表达产物主要以不溶性的包涵体（ＩＢｓ）形式存在，通过分离纯化ＩＢｓ产物及复性处理，表达产物的抗病毒比活性与细胞毒比活性分别达到５０～５８×１０７ｕ／ｍｇｐ和４２～４９×１０７ｕ／ｍｇｐ。
- 周晴马志章冯根生冯根生张惟杰陈常庆
- 关键词：融合蛋白TNF干扰素原核细胞
- TNF的生物学功能与受体的信号传导被引量：7
- 1995年
- 本文综述了今年来TNF发挥其多效生物学活性的分结构基础、TNF与受体结合后所出现的一系列跨膜反映现象及其信号传导机理的研究进展。目前,对这一领域的研究尚处于起始阶段,已发现TNF可激发多种激酶的活化以及由此产生的级联反映,继而活化NF-κB以调节靶基因的转录,使靶细胞进入不同的反映状态,这些研究将为TNF的临床应用提供理论依据。
- 应红宇丁仁瑞
- 关键词：TNF信号传导受体结合级联反应NF-KB生物学功能
- 细胞信号转导JAK-STAT途径的研究进展被引量：1
- 1998年
- 细胞信号转导JAK-STAT途径是当前分子生物学研究领域的主题之一。对其深入研究,将为揭示细胞因子对免疫功能的调节、血细胞生成以及神经和胚胎发育中所发挥的既特异又具多效性的生物学功能,提供了分子生物学机理。本文以IFNγ为例,阐述了JAK-STAT途径的信号转导机制,并对T细胞和神经细胞在相关细胞因子作用下,通过不同的JAK-STAT途径出现的生理效应及由抗原(抗sIg Fab)所引发的BCR偶联发现的迟发型JAK-STAT途径作了介绍。
- 邱莲女马志章
- 关键词：细胞信号转导JAK-STAT
- 人His6-IFNγ/TNFβ(His6γ-TNFNβ)融合蛋白(包涵体)的分离、纯化与复性研究
- 1998年
- 应用pET28(含T_7lac启动子和His6-tag)质粒,将人γTNFβ融合基因与之组建成pETγLT表达质粒,并转化于E.coliBL21(DE3).本文对pETγLT/ BL21(DE3)工程菌的His6-γTNFβ重组产物进行了诱导表达,分离纯化的研究.结果表明,该工程菌用LB培养基在37℃扩增至OD_(590)为0.5左右,加IPTG(终浓度为1mmol/L)诱导5小时,此时His6-γTNFβ的表达量可占菌体总蛋白的45%.重组产物绝大多数以IBs形式存在于菌体中.工程菌经反复超声破碎、高速离心,得IBs粗制品后,再经含2mol/L脲的缓冲液洗涤可得到相对纯净的IBs.然后用7mol/L脲变性溶解IBs,离心取上清,进行Ni^(2+)-Sepharose 6B柱一步法亲和层析,可得到电泳纯度为95%的His6-γTNFβ,经稀释复性和用凝血酶切去His6-tag的产物,其细胞毒活性为(1.2～2.0)×10~7U/mgp,抗病毒活性为(6.0～6.6)×10~6U/map.
- 余建法周晴马志章丁鸣徐建芬丁仁瑞
- 关键词：融合蛋白分离纯化
- 重组细胞因子融合蛋白的研究进展
- 1998年
- 应用基因工程实验技术,将细胞因子蛋白分子重组成一种融合蛋白分子.这种新型的融合蛋白分子,可发挥超越其单因子的生物学活性和/或具有便于分离纯化、检测等特性.因此它不仅在理论上有着崭新的内涵值得深入探讨,而且在应用上也具有潜在的广阔前景.本文对此领域的研究进展作一综述.
- 周晴马志章
- 关键词：基因重组融合基因融合蛋白细胞因子
- 融合表达载体的研究进展被引量：12
- 1998年
- 丁鸣余建法丁仁瑞
- 关键词：融合表达载体PA系统
