中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室
- 作品数：146 被引量：306H指数：8
- 相关作者：王海震陈莉朱立新赵爽孙丽更多>>
- 相关机构：第二军医大学长征医院复旦大学医学院吉林大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学理学更多>>
- 富含嘌呤的寡核苷酸自身高聚物的研究
- 我们在进行TFO抑制PDGF表达研究中,发现5′GGAGA GGGAG AGAGG GAAGA GGAAA3′寡脱氧核苷酸在三链形成的缓冲液中(40mM Tris-Cl,6mM MgCl,10mM spermidine,...
- 刘静金由辛王德宝
- 文献传递
- 抗小鼠 Caspase—12小干扰 RNA 对肝细胞凋亡的抑制作用
- 2005年
- 目的 观察抗小鼠 Caspase-12小干扰 RNA(siRNA)对小鼠原代肝细胞凋亡的抑制作用。方 法 原位二步灌流法分离并培养 Balb/c 小鼠原代肝细胞，化学合成制备三种抗 Caspase-12不同位点(130， 214，521)的 siRNA，脂质体包裹转染小鼠原代肝细胞。毒胡萝卜素4μmol/L 诱导肝细胞凋亡。逆转录聚 合酶链反应、western blot 检测抑制效果；四甲基偶氮唑盐法检测对细胞凋亡的影响。结果 在浓度为 100 nmol/L 时，siRNA(130)对小鼠原代肝细胞 Caspase-12 mRNA 的抑制率为0，siRNA(214)为52．08%， siRNA(521)为30．73%(t=4．30，P＜0．05)；在浓度为200 nmol/L 时，三种 siRNA 的抑制率分别为88．07%、 86．22%，89．41%。200 nmol/L 的 siRNA(214)对凋亡细胞 procaspase-12的抑制率为51．43%(t=4．30， P＜0．01)；MTT 比色实验发现，凋亡细胞活力增高48．76%(t=2．23，P＜0．01)。结论 抗 Caspase-12 siRNA 对小鼠原代肝细胞凋亡有一定的抑制作用。
- 刘海防谢青姜山李光明周霞秋史毅俞红金由辛
- 关键词：肝细胞小鼠CASPASE-12小干扰RNA
- 基于核酶技术的人线粒体色氨酸tRNA的高效转录及其活性鉴定
- 2009年
- 利用T7RNA聚合酶(T7 RNA polymerase,T7 RNAP)的体外转录方法因其简便、高效而在RNA制备中得到广泛应用,但该法由于T7RNAP的启动子跨越转录起始位点而会导致转录产物多出附加序列;如果去掉T7启动子的转录起始位点,则会严重降低T7RNAP的转录活性。本实验很好地消除了以上弊端,将T7RNAP的高效转录系统与核酶高度专一的自剪切技术相结合,成功构建了一种不影响转录效率的体外转录方法,而且转录后核酶能够在设计的特定位点进行自剪切并释放出目的RNA,得到了活性达113.6pmol/μg的人线粒体色氨酸tRNA(HmtRNATrp(UCA))。该方法转录效率高、重复性好,适合RNA的大量精确制备。
- 巩菊芳曹诣斌陈祥龙齐育平杨小强金晓玲
- 关键词：体外转录核酶
- 用siRNA沉默人血红素加氧酶-1基因降低胆红素水平
- 2007年
- 拟通过RNA干扰技术特异下调人血红素加氧酶-1（human heme oxygenase-1，hHO-1）基因的表达，减少hHO-1的产量从而降低胆红素的产生，探讨在胆红素产生前就阻断其产生，为临床早期防治新生儿高胆红素血症及胆红素中毒性脑病探索一种新的有效手段。针对hHO-1基因设计并化学合成三对小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）。采用脂质体转染法将siRNA转染入人肝脏细胞株HL-7702；荧光显微镜检测siRNA转染细胞的效率；转染siRNA1-2天后经RT—PCR和Western印迹方法检测hHO-1表达水平和蛋白质量；并采用HO-1诱导剂血红素诱导或hHO—1表达质粒转染细胞以上调hHO—1表达，检测siRNA干扰后hHO-1产量和酶活性。结果显示：设计的三对siRNA能不同程度的特异下调hHO-1表达，筛选获得抑制效果最佳的siRNA-3。siRNA-3抑制hHO—1呈现浓度与时间依赖性。与非特异对照siRNA及未处理组比较，血红素诱导和hHO-1表达质粒转染均能上调HL-7702细胞内hHO-1表达，提高hHO-1产量，但转染siRNA-3后hHO-1表达明显抑制，同时hHO-1活性随着基因表达下调而下降。实验表明设计合成的siRNA-3抑制效果明显。siRNA-3通过降解hHO—1，减少hHO-1产量，降低酶活性，最终减少胆红素产生，从而使RNA干扰技术成为降低新生儿高胆红素血症和胆红素中毒性脑病发生的一种候选方法。
- 李春娥金由辛史毅须丽清钟文伟申庆祥李云珠俞善昌夏振炜
- 关键词：血红素加氧酶酶活力胆红素高胆红素血症
- 纳米技术与生物学实验的微型化
- 2006年
- 纳米技术是近年来发展迅速的新技术,有着几乎无限的潜力。一方面生物分子的尺度是纳米与亚纳米级的,纳米技术可以从生物科学学到许多生物分子作用的奥秘;另一方面,纳米技术为生物学的研究提供新材料、新方法,使生物学研究可以多快好省地进行。本文简单介绍几种利用纳米技术开展生物学研究的思路与方法。
- 林其谁
- 关键词：核磁共振生物反应器
- 甲醇固定导致绿色荧光蛋白的荧光消失被引量：8
- 2007年
- 发现用甲醇固定转染了绿色荧光蛋白(GFP)基因的细胞会导致GFP的荧光消失,而当用聚甲醛固定时,GFP的荧光就没有失去。因此建议避免用甲醇对有GFP表达的细胞进行免疫组化前的固定。
- 李荣芳袁慧刘定干
- 关键词：甲醇绿色荧光蛋白
- 生物学中的数学建模被引量：4
- 2002年
- 生物学与其它学科的交叉是近年来学术界讨论的一个重要话题 .系统科学这一类横断科学从其产生之初就具有其鲜明的一般性和普适性 ,尤其适合对生命这一开放的、有序的、复杂的系统进行研究和探讨 .近年来 ,这方面的发展非常迅速 ,生物学研究的新思路、新方法层出不穷 ,这无疑为广大研究人员带来崭新的研究工具和更优化的解决方案 .本文从生物建模的角度对这方面最新的研究进展进行总结、归纳 ,以求集思广益、触类旁通 .
- 赵邦杰张志让赵晟
- 关键词：生物学数学建模
- Crystal structures of S6K1 provide insights into the regulation mechanism of S6K1 by the hydrophobic motif
- The activity of the ribosome protein subunit 6 kinase 1 (S6K1) is stimulated by phosphorylation of Thr389 in t...
- 王建船钟琛王放瞿芳芳丁建平
- PDGF-B链基因的三链形成寡核苷酸对大鼠脑胶质瘤生长及细胞周期的影响
- 2004年
- 目的 :观察血小板衍生长因子 (platelet- derived growth factor,PDGF) B链基因的三链形成寡核苷酸 (triplex form ingoligonucleotide,TFO)对大鼠胶质瘤细胞生长及细胞周期的影响。方法 :所有 SD大鼠 (36只 ,体质量 2 2 0～ 2 5 0 g)均在右尾状核区微量灌注 1× 10 6个 C6 胶质瘤细胞 ,其中实验 组和 组 (n=12 )在细胞接种后的第 8天开始分别原位注射 TFO1.5mg/ 2 0 μl和 3.0 m g/ 2 0 μl的生理盐水 ,以后每隔 72 h注射相同剂量的 TFO,共注射 3次。对照组 (n=12 )在相同时间原位注射 2 0 μl生理盐水。实验 3周时处死所有的大鼠 ,观察肿瘤的生长情况 ,标本做常规 H- E染色。流式细胞仪检测肿瘤 PDGF- B、PCNA的表达及细胞周期。结果 :实验 组、 组的成瘤抑制率分别为 6 6 .1%、91.8% ,两者相比有显著差异 (P<0 .0 1)。TFO对胶质瘤细胞 PDGF- B、PCNA表达有明显的抑制作用 (P<0 .0 1) ;TFO能明显降低胶质瘤细胞 G2 - M期和 S期 (DNA合成期 )的百分率 ,阻止细胞由静止期 (G0 - G1 期 )进入 DNA合成期 (S期 ,P<0 .0 1)。以上作用均存在浓度依赖性。结论 :原位应用TFO能抑制 PDGF- B表达 ,阻碍细胞进入 S期 ,使胶质瘤细胞增殖降低 ,达到抗胶质瘤生长的作用。
- 李维方周定标余新光金由辛
- 关键词：胶质瘤血小板源生长因子三链形成寡核苷酸细胞增殖细胞周期
- 人线粒体tRNA修饰碱基与遗传性脑肌病被引量：2
- 2006年
- 人的多种遗传疾病与线粒体tRNA基因突变有关,这些突变导致疾病发生的分子机理是当前研究的热点.通过研究线粒体tRNA分子上的碱基修饰情况,人们发现了一类特殊的带有牛磺酸衍生物基团的修饰,这类修饰主要位于线粒体tRNALys和线粒体tRNALeu(UUR)反密码子第一位摆动(wobble)位点的碱基上.最近的研究表明,位于这两种线粒体tRNA基因上的多种突变与遗传性脑肌病相关,包括A8344G,A3243G,T3271C等等,它们可以导致tRNA上相应摆动位点的碱基修饰缺失.无论是在体外培养的带有相应突变的细胞内,还是在来源于脑肌病病人的组织中,科学家都发现了相同的线粒体tRNA碱基修饰缺陷.通过分子手术证实,此类碱基修饰对于维持这两种tRNA的反密码子与mRNA上相应密码子的相互识别至关重要,缺失了这种修饰的tRNA将无法识别一些对应的密码子.通过进一步的实验,人们还鉴定出负责催化此类碱基修饰的酶.这些研究不但揭示了线粒体遗传性脑肌病相关突变的致病机理,也将为研究基因治疗提供可能的新手段.
- 郝睿王恩多
- 关键词：脑肌病分子机理
