郑州大学基础医学院分子细胞生物学研究中心
- 作品数：50 被引量：109H指数：7
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- 金银花对大鼠体内和体外RBL细胞的抗氧化保护作用及其机制被引量：12
- 2009年
- 目的:从细胞和分子水平探讨金银花(HS)对机体内外的抗氧化作用及其机制,为金银花的临床应用提供理论依据。方法:体外培养的人肝RBL细胞与0.25g·L-1的金银花共培养前或后加H2O2(氧化剂),应用MTT和TUNEL实验检测细胞生存率和凋亡率,免疫组织化学/免疫印迹检测NF-κB、HSP-70、Bcl-2、Bax及Caspase-3表达水平,检测细胞内抗氧化酶体系的水平。建立金银花大、小剂量灌胃的大鼠动物模型,检测血浆抗氧化酶体系的总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱苷肽(GSH)、丙二醛(MDA)的水平。结果:金银花对RBL细胞的抗氧化和抗凋亡作用中,前保护(先加金银花,后加H2O2)高于后保护(先加H2O2,后加金银花)的效应;下调NF-κB和HSP-70的表达和Bcl-2/Bax比值,且前保护组凋亡率低于后保护组;同时也上调细胞内抗氧化酶体系的水平。金银花灌胃1～2h后,大鼠血浆中T-AOC、GSH-Px、GSH、SOD含量较灌胃前显著增高(P<0.05),而MDA含量明显减低(P<0.05)。结论:金银花可通过上调体内抗氧化酶体系并下调NF-kB信号传导途径呈现抗氧化、抗凋亡的保护作用。
- 宫璀璀郑乃刚吴景兰赖泽仁何培霞
- 关键词：金银花过氧化氢
- 不同质量浓度胰蛋白酶和EDTA细胞消化分离液对人表皮细胞生长的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨人表皮生物工程的适宜条件。方法:以NIH-3T3细胞作为滋养层,以热溶素分离表皮与真皮,将表皮应用4组不同质量浓度的胰蛋白酶(T)和EDTA(E)的消化液(A组:0.5g/LT加0.2g/LE,B组:2.5g/LT加0.2g/LE,C组:0.5g/LT加1g/LE,D组:2.5g/LT加1g/LE)消化为单个细胞。表皮细胞接种于含8种成分的DMEM-F12的完全培养液中。记录接种表皮细胞的克隆形成率、扩增倍数以及融合时间。结果:接种表皮细胞的克隆形成率和扩增倍数分别是:A组为(10.00±0.09)%和(500.00±9.63)倍,B组为(7.00±0.12)%和(350.00±6.16)倍,C组为(17.00±0.18)%和(850.00±8.83)倍,D组为(14.00±0.19)%和(700.00±9.55)倍,4组间差异均有统计学意义(P<0.05)。接种表皮细胞的融合时间:A组为第(10.00±0.82)天,B组为第(10.00±0.82)天,C组为第(11.50±1.29)天,D组为第(12.00±2.45)天。4组的接种表皮细胞克隆形成率与融合时间无关。结论:同一质量浓度的EDTA作用下,0.5g/L胰蛋白酶组比2.5g/L胰蛋白酶组更有利于表皮细胞克隆的形成和融合。
- 杨小静李红文郑乃刚王一菱吴景兰
- 关键词：克隆形成率
- 金银花抗氧化作用的分子学机理研究被引量：11
- 2008年
- 目的探讨金银花抗氧化作用分子学机理。方法采用过氧化氢(H2O2)作用于人正常RBL肝细胞,制作氧化应激损伤的细胞模型。将培养的细胞分为四个实验组:正常对照组(C),H2O2损伤组(H2),金银花前保护组(Jb),金银花后保护组(Ja)。采用TUNEL和DNALadder法,检测各组细胞凋亡情况。应用免疫组化和Westernblot观察各组细胞的HSP-70、NF-kB、Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达及免疫反应活性。应用MTT实验检测RBL细胞的生存率。结果Jb组的细胞凋亡率明显低于H2和Ja组,Bcl-2表达增高,HSP-70、NF-kB、Bax和Caspase-3的表达降低。结论金银花对RBL细胞氧化应激损伤具有一定保护作用,且前保护作用效果好于后保护作用,其保护作用机理可能是通过抑制HSP-70和NF-kB的表达,阻抑NF-kB信号传导途径并提高细胞内抗氧化防御酶系水平。
- 孟明利宫璀璀郑玉霞郑乃刚李璇刘力源何培霞韩玉春吴景兰
- 关键词：金银花H2O2抗氧化损伤
- 网滤和免疫实验技术分离人表皮干细胞群体的比较
- 2007年
- 目的:比较网滤法和免疫实验技术分离人表皮干细胞群体(SCP)的效果,并鉴定SCP的生物学特性。方法:对消化分离的人表皮单细胞悬液进行不同目数(240目、300目、350目)筛网过滤和ELISA及琼脂糖-4B(Sepharose-4B)柱层析的免疫实验技术分离SCP;以形态学、P63-免疫反应性(IR)/K19-IR生物标志和生物学特性进行SCP鉴定。结果:经300目/350目筛网过滤可分离出约50%的P63-IR细胞群体,应用2项免疫实验技术皆可分离出约90%的P63-IR/K19-IR的细胞群体;应用ELISA法分离出表皮细胞的接种数虽然低于仅经240目筛网过滤法,但表皮细胞融合时间却提前了5d(P均<0.05);而且融合后分化的表皮切片呈现复层,一些基层细胞呈现P63-IR阳性反应。结论:筛网过滤法分离效率虽较低,但操作简单;免疫实验技术分离效率较高,ELISA技术操作较方便,而Sepharose-4B柱层析技术较复杂。
- 王黎李红文吴景兰王一菱郑乃刚
- 关键词：生物学鉴定生物标志表皮
- IP-10前炎症因子和纳米脂质体槲皮素对角质形成细胞的效应
- 2013年
- 目的探讨IP-10及干扰素-γ（IFN-1）在银屑病发病中的机制，对比纳米脂质体槲皮素（nQ）及地塞米松（Dex）对银屑病样角质形成细胞的效应。方法将培养的HaCaT细胞分为①nQ组（40、50、60μmol／L）、②Dex组（10^-7、10^-6、10^-5moL／L）、③IFN-1组（50、100、150U／ml）、④IP-10组（20、30、40ng／μl）以及⑤不加药的对照组（C）。应用MTT实验确定各药物对HaCaT细胞的生长率（GR）及生长抑制率（GSR）。应用IP-10和c-myc的DNA／RNA斑点原位杂交技术对比检测各组RNA及DNA的杂交信号。结果各组的GR／GSR均呈剂量依赖性，nQ组的GSR高于Dex组，差异有统计学意义（P〈0．01）。原位杂交结果显示：IFN-1及IP-10的杂交信号增强，nQ及Dex的杂交信号减低，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论IFN-1及IP-10促进角质形成细胞的生长，nQ及Dex抑制其生长，nQ的作用且优于Dex。
- 余斌李红文吴景兰
- 关键词：IP-10MTTHACAT细胞
- 8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞DNApolβ基因及相关基因表达的影响被引量：9
- 2003年
- 目的 :探讨 8 Br cAMP及槲皮素等分化诱导剂对Eca 10 9细胞DNApolβ基因及相关基因表达的影响。 方法 :将培养的Eca 10 9细胞分为 3组 :①加 8 Br cAMP组 (Br组 ) ;②加槲皮素组 (Q组 ) ;③不加任何药物对照组 (C组 )。同时培养 4 8h ,将野生型DNApolβ的cDNA ,EGFRcDNA ,野生型 (wt)p5 3cDNA及c myccDNA分别制备了生物素 /地高辛标记的探针进行原位杂交和RNA斑点印迹阵列。另进行POLB ,XRCC1,VEGF及PCNA的免疫组化染色及免疫斑点印迹阵列。结果 :Br组和Q组的DNApolβ ,EGFR ,c myc基因表达下调而wtp5 3基因表达上调。POLB ,XRCC1,PCNA及VEGF免疫斑点印迹减弱。 8 Br cAMP及槲皮素显著下调Eca 10 9细胞的DNApolβ基因表达及相关癌基因表达 ,同时上调抑癌基因的表达。作为POLB的异二聚体XRCC1及恶性细胞生物标志的PCNA及VEGF表达下调。结论 :分化诱导剂下调Eca 10 9细胞DNApolβ基因表达 ,提示Eca 10 9细胞的polβ基因是高表达的 ;功能调整后的polβ通过相关基因表达的改变尤其是wtp5
- 李士坤郑乃刚吴景兰白经修董子明
- 关键词：DNA聚合酶ΒECA-109细胞8-BR-CAMP槲皮素食管鳞状上皮癌
- mdr1基因在多药耐药相关的几种人胃癌细胞系的表达被引量：7
- 2006年
- 目的探讨mdr1在多药耐药相关的几种人胃癌细胞系中的转录、翻译、P-gp功能变动趋势。方法培养SGC7901/VCR(人胃癌多药耐药细胞亚系)、SGC7901和BGC823(人胃腺癌细胞系)于RPMI1640,用RT-PCR和原位杂交检测mdr1mRNA的表达,用免疫印迹和免疫组化检测P-gp的表达,用流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积。结果半定量RT-PCR显示,SGC7901/VCRmdr1和β-actin吸收峰面积之比为5.63,SGC7901为0.61,BGC823为0.85。杂交信号呈紫蓝色颗粒,分布于胞质。免疫印迹显示SGC7901/VCRP-gp的表达最强,SGC7901最弱。P-gp阳性呈棕黄色颗粒,位于细胞膜上。SGC7901中,少数细胞P-gp表达极强。SGC7901/VCR平均光密度为(1.8310±0.8401),SGC7901为(0.3590±0.2512),BGC823为(0.6260±0.4996)(P<0.05)。SGC7901/VCR阿霉素特异荧光强度为(6.59±50.30),SGC7901为(35.88±14.55),BGC823为(27.44±7.06)(P<0.001)。结论在多药耐药相关的人胃癌细胞系SGC7901/VCR、SGC7901和BGC823中,mdr1基因均表达,P-gp具有药物外排功能,SGC7901/VCR的mdr1表达最强,SGC7901最弱,BGC823居中。
- 高福莲蔡新华马开颜乐晓萍张钦宪
- 关键词：多药耐药基因1P-糖蛋白
- 8-Br-cAMP对Hela细胞wtp53,mtp53,c-myc和iNOS基因表达的影响被引量：1
- 2003年
- 目的 :探讨 8 Br cAMP对Hela细胞癌基因和抑癌基因等表达的影响。方法 :将培养的Hela细胞分为 3组 :① 8 Br cAMP组 (Br组 ) :加至 8 Br cAMP终浓度为 2× 10 -5mol/L ;②阳性对照组 (60 Co组 ) :给予60 Co照射量 4Gy ,72 0s;③阴性对照组 (C组 ) :仅加含体积分数为 10 %胎牛血清的DMEM培养液。各组细胞均培养 4 8h后 ,将 1× 10 7ml-1细胞悬液滴加至预先处理过的硝酸纤维素膜和载玻片上。应用原位杂交和完整细胞原位斑点印迹技术分别检测 3组Hela细胞中野生型p5 3(wtp5 3)、突变型p5 3(mtp5 3)、c myc和iNOS基因的表达。结果 :8 Br cAMP组与阳性对照组相比 ,差异无统计学意义 ,P >0 .0 5 ;与阴性对照组相比 ,上调wtp5 3和iNOS基因的表达 ,同时下调mtp5 3和cmyc基因的表达 ,P <0 .0 1。结论 :结果提示 8 Br
- 宫璀璀任伟宏吴景兰王文丽刘影
- 关键词：8-BR-CAMPHELA细胞
- 8-Br-cAMP对Eca-109细胞c-myc,wtp53,iNOS基因和EGFR表达的影响被引量：1
- 2003年
- 目的 :探讨 8 Br cAMP对Eca 10 9细胞c myc、wtp5 3、iNOS基因和EGFR表达的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分为 2组 :①实验组 :加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 10 -5mol/L ,培养 2 4h ;②对照组 :不加 8 Br cAMP ,培养 2 4h。对 2组的细胞涂片和硝酸纤维素膜 (NCM)标本进行c myc、wtp5 3、iNOS基因和EGFR表达检测 ,并对扫描数值进行统计学处理。结果 :原位杂交及免疫组化反应信号皆定位于Eca 10 9细胞的胞质 ,扫描数值显示 :①c mycmRNA :实验组为 3.38± 0 .99,对照组为 5 .18± 1.39;②wtp5 3mRNA :实验组为 2 .74± 0 .83,对照组为 0 .38±0 .2 7;③iNOSmRNA :实验组为 4 .5 2± 0 .74 ,对照组为 2 .6 3± 0 .13;④EGFR IR :实验组为 2 .37± 1.0 5 ,对照组为 4 .38±0 .4 8。以上实验组与对照组比较差异有统计学意义 (P均 <0 .0 5 )。结论 :c myc、wtp5 3和NO均可参与 8 Br
- 王红梅宫璀璀吴景兰王一菱
- 关键词：C-MYC基因INOS基因8-BR-CAMPECA-109细胞
- 8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞凋亡中P38和Caspase-3表达的影响被引量：10
- 2003年
- 目的 :探讨 8 Br cAMP和槲皮素对Eca 10 9细胞凋亡中P38、Caspase 3表达的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分为 3组 :①对照组 :只加DMEM(Sigma)培养液 (含体积分数 10 %胎牛血清 )培养 4 8h。②Br组 :终浓度为 2× 10 -5mol/L 8 Br cAMP的培养液培养 4 8h。③Q组 :终浓度为 4 3μmol/L槲皮素的培养液培养 4 8h。对以上 3组细胞以TUNEL法染色计数细胞凋亡率。以免疫组化方法观察 3组细胞的P38MAPK IR和Caspase 3 IR反应性。结果 :Br组及Q组细胞凋亡率高于对照组 ;Br组及Q组细胞的P38MAPK IR高于对照组 ;Br组及Q组细胞的Caspase 3 IR亦高于对照组。P38MAPK IR与Caspase 3 IR呈正相关。P均 <0 .0 5。结论 :P38MAPK及Caspase 3参与了 8 Br cAMP及槲皮素诱导的Eca 10
- 王红梅郑乃刚吴景兰王一菱宫璀璀
- 关键词：P38细胞凋亡ECA-109细胞8-BR-CAMP槲皮素
