湖南师范大学生命科学学院生物化学与分子生物学系
- 作品数：16 被引量：69H指数：6
- 相关机构：湖南农业大学植物保护学院植物病理学系湖南农业大学植物保护学院厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金福建省重大科技项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程文化科学更多>>
- 苎麻基因组微卫星的分离与鉴定(英文)被引量：13
- 2007年
- 以苎麻[Boehmeria nivea（L．）Gaud．]栽培品种芦竹青为材料，经Mse Ⅰ酶切并与相应接头连接，然后与生物素标记的探针（CT）15杂交，再用链亲和素包被磁珠（Dynabeads M-280）捕捉杂交产物，以21碱基接头寡核苷酸为引物经PCR扩增获得了双链目的片段，回收300—1000bp DNA片段，然后克隆到pMD18-T载体上，转化至DH5α中，这样就构建了苎麻富含（GA）n微卫星的部分基因组文库。随机挑取36个克隆，以锚定简单重复序列为引物对其进行PCR筛选。测序分析了22个阳性克隆，每个克隆都含有微卫星DNA，阳性克隆率为61．1％，微卫星种类以与探针互补的（GA／CT）n为主，占83．3％，同时还存在（TG／AC）n和三碱基、六碱基为单元构成的苎麻微卫星，如（GAC）n、（ACG）n、（TCT）n、（TCG）n、（GAA）n、（CCGACG）n、（GAGAAA）n等。最后以18个微卫星位点设计了18对苎麻微卫星特异引物。GMCT重复单元的长度从7到40范围内变化，平均为19．2，显示了它们将产生良好多态性，为一种强有力的遗传标记。苎麻微卫星DNA标记可广泛应用于苎麻基因型鉴定，基因和QTL分析，分子标记辅助育种，系谱分析等。
- 蒋彦波揭雨成周建林邢虎成佘玮
- 关键词：微卫星磁珠基因组文库
- 用酵母双杂交筛选与AP-2α相互作用的因子被引量：5
- 2003年
- AP 2α是重要的转录因子家族AP 2的成员之一.为了研究AP 2α在体内的转录调控方式及与其直接相互作用的蛋白因子,用AP 2α作为饵蛋白通过酵母双杂交系统筛选HeLa细胞的cDNA文库.筛选得到的一个阳性克隆中,经鉴定含有人TESTIN基因cDNA片段自5876bp起始的完整3′端序列.将此TESTIN片段引入GST基因融合系统成功的进行了表达.得到大小约45kD的GST TESTIN融合蛋白,用于多克隆抗体的制备.用Western blot检测TES TIN和AP 2α在HeLa细胞中的表达和定位.结果表明:TESTIN的表达主要在细胞质中,细胞核内也有少量表达;而AP 2α表达主要集中于细胞核内.它们的相互作用可能与AP 2α在细胞内分布及其调控基因转录的方式有关.
- 钟英丽刘云海胡翔肖顺勇张健
- 关键词：酵母双杂交CDNA文库转录调控
- 利用飞行时间质谱进行蛋白质和多肽C端序列测定被引量：6
- 2001年
- 用羧肽酶Y水解蛋白质和多肽 ,结合飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)测定酶解后缩短肽的质量 ,根据相邻两肽峰的质量差别读出蛋白质和多肽的C端序列 ,在pmol水平下测定了人促肾上腺皮质激素片段以及人血管紧张肽片段 ,其中人促肾上腺皮质激素片段测到了C端
- 陈平梁宋平
- 关键词：飞行时间质谱多肽生理活性
- 基因研究140年大事年表被引量：6
- 2001年
- 王身立
- 关键词：基因研究遗传学染色体基因工程
- 动物肽类神经毒素基因工程研究进展被引量：5
- 2001年
- 介绍了克隆动物肽类神经毒素cDNA和基因组基因克隆的方法 ,以及毒素cDNA结构和毒素蛋白前体的翻译后加工过程 .概述了毒素蛋白基因组基因的结构及其mRNA前体的加工过程 .综述了在毒素蛋白的基因工程方面已取得的进展 。
- 聂东宋梁宋平李敏
- 关键词：CDNA基因克隆基因工程
- 化学合成虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅱ基因的克隆
- 2000年
- 报道了全化学合成虎纹捕鸟蛛毒素 Ⅱ (HWTX Ⅱ )基因 ,在克隆载体pBluescript中的克隆 .但HWTX Ⅱ基因在表达载体pGEX KT中几乎无表达 .根据以前成功地表达全化学合成虎纹捕鸟蛛毒素 Ⅰ (HWTX Ⅰ )基因的实验结果 ,对在同一表达系统所构建的HWTX Ⅰ与HWTX Ⅱ基因的表达产物进行比较 ,认为HWTX Ⅰ与HWTX Ⅱ在原核表达系统的表达行为上的差异有助于我们进一步探讨HWTX
- 徐辉明陈嘉勤梁宋平李敏
- 关键词：蜘蛛化学合成克隆
- 转录因子AP-2α的功能与调控的研究及其与人类疾病的关联
- 转录因子AP-2α是一个组织特异性的转录因子。在脊椎动物的发育过程中,AP-2α的表达在时空上受到严格的控制。在神经管未关闭前,AP-2α的表达主要集中在神经脊。之后AP-2α的表达逐步出现在肢体、面部、鳃弓、背根神经节...
- 张健
- 文献传递
- 高产超氧化物歧化酶芽孢杆菌C328菌株产酶培养基的研究被引量：1
- 2003年
- 研究了芽孢杆菌(Bacilluscereus)C328SOD(Superoxidedismutase)生产菌株在发酵培养过程中培养基种类、碳氮比以及补充碳氮源对产酶的影响.结果表明,C328菌株发酵产酶率与培养基种类、复配碳氮比有密切关系.培养基浓度为10%时,对菌株生长及产酶有明显的促进作用,超过13%则抑制SOD酶产生.筛选出最佳产酶发酵农副产品培养基和优化配比组合产酶培养基.
- 丁学知高必达
- 关键词：超氧化物歧化酶培养基产酶发酵
- SARS冠状病毒核衣壳蛋白在酵母中的表达与活性检测被引量：1
- 2005年
- 用PCR扩增SARS冠状病毒N蛋白全长cDNA,克隆到酵母表达载体pPIC3·5K,构建pPIC3·5K_SCoVN酵母表达质粒。表达质粒线性化后电转化到毕赤酵母GS115中,经G418_RDB,MM/MD平板与PCR扩增筛选获得His+Mut+重组菌株。比较研究了不同的培养基、溶解氧以及甲醇浓度对菌株生长与重组蛋白表达的影响。结果表明:FBS培养基最适宜重组菌的生长与表达,溶氧对菌体的生长与表达有显著的影响,甲醇诱导最佳终浓度为1%(V/V),SDS_PAGE分析重组蛋白的表达量,发现重组N蛋白表达量占细胞总蛋白的6%,每升培养基可以生产410mg重组N蛋白,生物量达45OD600。Westernblotting结果表明,重组N蛋白对鼠源单克隆抗体以及SARS病人恢复期血清具有较强的特异性反应。对摇瓶培养条件进行了发酵罐放大实验,结果生物量达到348OD600,表达量达到2·5g/L,分别为摇瓶表达的7·7倍和6·1倍,为SARS早期血清学诊断研究以及为N蛋白在病毒复制以及致病机理的研究奠定了一定的基础。
- 刘如石邱义兰杨坤宇张智洪梁良张军夏宁邵
- 关键词：严重急性呼吸综合症核衣壳蛋白毕赤酵母真核表达
- 虎纹捕鸟蛛毒素IV突变体K27A-HWTX-IV的合成和复性及其生物学活性研究被引量：1
- 2003年
- 用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽合成的方法在固相多肽合成仪上合成了用丙氨酸代替虎纹捕鸟蛛毒素 IV的第27位的赖氨酸的突变体K27A HWTX IV,通过反相HPLC对不同条件下突变体的氧化复性结果进行监测,摸索出其最佳氧化复性条件为:0.1mol LTris HCl,pH8.0,GSH1mmol LGSSG0.1mmol L的复性缓冲液,样品浓度为0.1mg mL.复性产物经HPLC纯化并用基质辅助激光解吸飞行时间质谱法进行鉴定,相对分子质量为4050.63Da.生物学活性实验小鼠离体膈神经 膈肌标本测活实验表明:10μg mL天然HWTX IV阻断小鼠离体膈神经 膈肌接头传递时间为16min,10μg mL复性后的突变体阻断小鼠离体膈神经 膈肌接头传递时间为120min,残基的替换导致突变体生物学活性比天然毒素少,证明了第27位的赖氨酸为虎纹捕鸟蛛毒素 IV活性相关的残基.
- 陈再冉王贤纯梁宋平
- 关键词：突变体氧化复性生物学活性肽类毒素
