江苏大学基础医学与医学技术学院免疫学与免疫检验学系
- 作品数：49 被引量：298H指数：7
- 相关作者：徐芸芸史烨黄莉莉王海生崔大伟更多>>
- 相关机构：杭州师范大学基础医学部北京大学基础医学院北京大学基础医学院免疫学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省教育厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程军事更多>>
- hFOXP3-Δ E251的克隆及在大肠杆菌中的表达
- 2010年
- 目的:构建和表达带HIV-TAT穿膜序列(Protein transduction domain,PTD)的人FOXP3突变体PTD-hFOXP3-Δ E251,为研究人FOXP3的功能奠定基础。方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法,从人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)总RNA中扩增得到人FOXP3(hFOXP3)的cDNA,然后再利用重叠PCR技术扩增获得hFOXP3-ΔE251基因实变体片段。将该重组突变体插入表达载体pET28a-PTD中,构建表达质粒pET28a-PTD-hFOXP3-ΔE251,然后转化感受态细菌E.coli Rosetta(DE3),最终采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β -D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达。结果:SDS-PAGE电泳分析发现,经0.5mM IPTG诱导8h后,可高效表达重组的融合蛋白,表达产物以包涵体形式存在。结论:成功制备了带穿膜序列的人FOXP3ΔE251突变体融合蛋白,为更好地研究人FOXP3的功能与特性奠定了实验基础。
- 蔺昕许逊宗扬勇邵启祥
- 关键词：基因克隆大肠杆菌
- 老年支气管哮喘患者血浆中IL-9检测及临床意义被引量：1
- 2010年
- 目的 检测老年支气管哮喘患者血浆中IL-9的水平,探讨IL-9在支气管哮喘发生发展中的意义.方法 收集老年支气管哮喘患者和健康对照外周血标本.采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆中IL-9和总IgE浓度.结果 老年支气管哮喘急性发作期患者血浆IL-9水平显著高于健康对照组（P〈0.05）,而临床缓解组与健康对照组差异无统计学显著性意义（P〉0.05）.老年支气管哮喘急性发作期患者血浆IL-9水平与总IgE浓度呈正相关.结论 老年支气管哮喘患者血浆中IL-9水平升高,与疾病的发生发展关系密切.
- 徐庆雷王洪建胡礼仪马斌仝佳陈建国
- 关键词：支气管哮喘白介素-9酶联免疫吸附试验
- 真核表达质粒pDisplay-hGITRaa_(1-165)构建及其在COS-7细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建含有人GITR胞外段的真核表达质粒pDisplay-hGITRaa1-165,并检测其在真核细胞内的表达。方法:将带有信号肽的GITR基因片段克隆至真核表达载体pDisplay,经酶切鉴定及测序分析,脂质体介导法转染COS-7细胞,通过蛋白质印迹法检测其在COS-7细胞内的表达水平。结果:所构建的真核表达质粒pDisplay-hGI-TRaa1-165转染COS-7细胞后,在其培养上清中检测到目的蛋白的表达。结论:成功表达pDisplay-hGITRaa1-165蛋白,为GITR的生物学功能研究奠定了基础。
- 陈君王胜军仝佳王海生马斌唐莉胡正军鲍俊峰史烨许化溪
- 关键词：GITRCOS-7细胞真核表达
- MicroRNA-34a检测方法的建立及其在类风湿性关节炎中的应用被引量：1
- 2010年
- 目的采用自行设计的颈环结构引物，建立外周血检测microRNA-34a（miR-34a）的检测方法，并初步应用于类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）患者外周血单个核细胞（peripheral blood monocytes，PBMCs）样品的检测。方法用TRlzol提取外周血单个核细胞的总RNA，以颈环结构的RT引物逆转录出相应的cDNA，然后以miR-34a的PCR引物进行PCR检测，电泳观察结果。结果建立的颈环RT—PCR能正确检测miR-34a。在RA患者外周血中检测到miR-34a的表达，其中初发者栓出率较高（2／6），复发者检出率为（1／9）；而健康志愿者外周血和治疗好转者未见表达。结论成功建立检测miR-34a的方法，miR-34a检测可能对RA的诊断有一定意义，但尚需进一步深入研究。
- 陈晓旦刘秀雯吴琳成静阴晴李晶吴忠钱晖许文荣邵启祥
- 关键词：MIR-34A逆转录聚合酶链反应类风湿性关节炎
- 糖尿病肾病患者Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2)活性增强参与代谢综合征多组分聚集状态形成被引量：7
- 2017年
- 目的探讨终末期2型糖尿病肾病(DN)患者Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2)活性及其与代谢综合征(MS)多组分聚集状态的关系。方法募集维持性血透治疗超过3个月病情稳定的DN患者30例、单纯2型糖尿病(T2D)患者30例和健康对照30例。Ficoll-泛影葡胺密度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),实时荧光定量PCR检测ILC2相关的视黄酸受体相关孤核受体α(RORα)、白细胞介素17受体B(IL17RB)、IL-33受体T1/ST2、IL-5、IL-13的mRNA水平;流式细胞术检测PBMC中ILC2的百分比;ELISA检测血浆IL-5、IL-13水平;计算3组受试对象MS发生率、组分个数;Pearson法分析各组分与ILC2相关因子的相关性。结果单纯T2D和DN患者的腰围、空腹血糖、收缩压、舒张压、甘油三酯及MS组分数均升高,MS发生率分别为46.67%和86.67%。DN患者ILC2的比例增加,ILC2相关转录因子RORα及膜受体T1/ST2的mRNA表达水平均升高,且与IL-5和IL-13的表达水平呈正相关。此外,DN患者PBMC的IL-13 mRNA水平与收缩压、血浆总胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇水平呈正相关,ILC2膜受体T1/ST2与低密度脂蛋白-胆固醇水平也呈正相关。结论维持性血透治疗的DN患者比单纯T2D患者存在更明显的MS多组分聚集现象,ILC2活性增强可能通过对血压及脂质代谢的影响参与糖尿病肾病患者MS状态的形成。
- 路萍徐芸芸苏兆亮许化溪
- 关键词：糖尿病肾病血液透析代谢综合征
- 大肠埃希菌表达的含PTD穿膜序列的融合蛋白3种复性方法比较被引量：3
- 2008年
- 目的:探索融合蛋白PTD-NFATminiDBD-eGFP纯化以及复性的条件,以提高其复性效率,为后续融合蛋白生物学功能的研究做准备。方法:表达、提取并纯化包涵体形式的融合蛋白PTD-NFATminiDBD-eGFP,分别用稀释复性、透析复性、柱上复性的方法,对融合蛋白进行复性,分析不同方法的特点及包涵体复性率,采用流式细胞术检测融合蛋白的穿膜活性。结果:3种复性方法得到的融合蛋白复性率依次为:柱上复性得率最高,其次是透析复性,稀释复性得率最低。柱上复性后蛋白的穿膜效率最高,相对较低的是稀释复性,而未复性的融合蛋白穿膜效率极低。结论:3种复性方法均能对PTD穿膜蛋白复性,但以柱上复性最佳。
- 彭鑫申卫红茹松伟宗扬勇夏圣王胜军许化溪邵启祥
- 关键词：蛋白转导域复性包涵体
- 皮肌炎患者外周血CD4^+ T细胞中TGF-β1 mRNA表达及意义被引量：4
- 2008年
- 目的:检测活动期皮肌炎(dermatomyositis,DM)患者外周血CD4+T细胞中转化生长因子β1(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)以及血清磷酸肌酸激酶(CK)含量。初步探讨CD4+T细胞TGF-β1在皮肌炎发病机制中的作用。方法:收集12例活动期皮肌炎患者和12例健康对照者外周血,采用免疫磁珠分离法获得CD4+T细胞,通过RT-PCR方法检测出各组TGF-β1表达水平。观察CD4+T细胞中TGF-β1表达与CK含量的相关性。结果:活动期皮肌炎患者外周血CD4+T细胞中TGF-β1相对表达量为0.751±0.107,显著高于健康对照0.438±0.170?P<0.05?。CD4+T细胞TGF-β1表达量与CK含量呈中度正相关?r=0.67,P<0.05?。结论:活动性皮肌炎患者外周血CD4+T细胞中TGF-β1 mRNA表达显著升高,可能与皮肌炎疾病发生有关。
- 吴蔚王胜军李遇梅李雅贞许化溪
- 关键词：皮肌炎CD4^+T细胞TGF-Β1
- PTD-mLumin-HMGB1 A原核蛋白的表达、纯化及初步鉴定
- 2012年
- 目的:构建含有蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)和荧光蛋白mLumin的人HMGB1 A盒原核表达载体,表达并纯化PTD-mLumin-HMGB1 A融合蛋白。方法:利用基因重组技术构建pET28a-PTD-mLumin-HMGB1 A融合蛋白原核表达载体,并在大肠埃希菌Rosette(DE3)中表达融合蛋白,经Ni2+分离柱纯化PTD-mLumin-HMGB1 A融合蛋白,激光共聚焦显微镜观察其穿膜能力。结果:成功构建了PTD-mLumin-HMGB1 A原核表达载体,并表达和纯化了PTD-mLumin-HMGB1 A融合蛋白,该融合蛋白能高效地穿过细胞膜进入细胞内。结论:成功地表达和纯化了PTD-mLumin-HMGB1 A融合蛋白,此融合蛋白具有良好的穿膜能力,为更好地研究HMGB1 A的细胞内定位和体内定位提供了重要的依据。
- 高升刘月芳田伊卿吉滢曾子涵殷丝雨邵启祥
- 关键词：蛋白转导结构域高迁移率族蛋白1融合蛋白
- 发展医学教育坚持以学生为主体被引量：7
- 2012年
- 科学发展观的本质和核心是“以人为本”；在医学教学中“以人为本”就是以学生为主体、学生积极自主学习实践、独立分析思考并能有所创新。《国家中长期教育改革和发展规划纲要（2010-2020年）》（纲要）也明确提出教育的工作方针：优先发展，育人为本，改革创新，促进公平，提高质量。
- 苏兆亮马瑞夏海平许化溪
- 关键词：育人为本医学教育个性化学习
- 人GITR基因的克隆和序列分析被引量：4
- 2007年
- 目的:克隆人GITR基因全长编码区的cDNA,同时对其序列进行分析。方法:采用RT-PCR方法,从正常人外周血单个核细胞获得GITR基因的cDNA,克隆至pGEM-T载体,选择阳性克隆并进行序列测定。结果:扩增得到的人GITR基因编码区cDNA的全长726 bp,编码241个氨基酸残基,与GeneBank注册的序列完全一致。结论:获得人类GITR基因的克隆,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 仝佳王胜军毛朝明杨云良陈君杨敏
- 关键词：CDNA克隆RT-PCR调节性T细胞
