川北医学院基础医学院免疫学与分子生物学研究所
- 作品数：56 被引量：130H指数：6
- 相关作者：张仁刚张洁关望张大容李雪婷更多>>
- 相关机构：四川大学华西基础医学与法医学院中国科学院兰州化学物理研究所兰州大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省应用基础研究计划项目四川省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 针对HBs基因的shRNA表达载体的构建及鉴定
- 2009年
- 目的以PGenesil-1(Pg)为载体构建针对乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因的shRNA表达载体PGenesil-1-HBs(Pgs)。方法设计、合成针对HBs区的三对DNA序列,分别插入PGenesil-1中,并对重组质粒进行限制性内切酶谱和DNA序列测定分析。结果3个不同的重组shRNA表达载体经限制性酶识别和DNA序列测定完全正确。结论成功构建了3个针对HBs基因的shRNA表达载体。
- 杨尚君唐恩洁张大容
- 关键词：乙型肝炎病毒RNA干扰乙型肝炎病毒表面抗原
- 重组杜氏利什曼原虫Pxn1、TryP、假定蛋白CAJ07026和GDPMP蛋白刺激BALB/c小鼠的免疫应答状态被引量：3
- 2017年
- 目的观察重组杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)过氧化物还原酶1(peroxidoxin-1,Pxn1)、锥虫氧化还原过氧化物酶(tryparedoxin peroxidase,Try P)、假定蛋白CAJ07026(hypothetical protein CAJ07026.1,Hyp07026)和甘露糖-1-磷酸胍氨酸转移酶(GDP-mannose pyrophosphorylase,GDPMP)蛋白刺激BALB/c小鼠免疫应答状况。方法逆转录PCR(RT-PCR)分别扩增杜氏利什曼原虫Pxn1、Try P、Hyp07026和GDPMP编码基因,克隆入质粒p QE30,构建重组质粒p QE30-Pxn1、p QE30-Try P、p QE30-Hyp07026和p QE30-GDPMP,转化至大肠埃希菌,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。采用NTA-Ni盐凝胶层析柱,自然条件方式纯化重组蛋白rPxn1和rTry P,变性条件方式纯化重组蛋白rHyp07026和rGDPMP。25只BALB/c小鼠随机均分成5组,即rPxn1、rTry P、rHyp07026、rGDPMP免疫组及PBS对照组,免疫组小鼠分别以相应重组蛋白进行免疫,第1周免疫组小鼠皮下注射100μg相应的重组蛋白,隔周以50μg相应的重组蛋白加强免疫3次,对照组小鼠注射等量PBS。第3次加强免疫后1周,将各组小鼠脱颈处死,制备单个脾细胞,提取抗原刺激后小鼠脾细胞总RNA,用q RT-PCR微阵列检测抗原刺激后小鼠脾细胞内反映免疫应答的细胞因子转录水平表达谱。结果Pxn1、Try P、Hyp07026和GDPMP编码基因经PCR扩增,其产物大小分别为570、610、1 040和1 200 bp;经测序证实,与Gen Bank中的相关序列一致。重组质粒p QE30-Pxn1、p QE30-Try P、p QE30-Hyp07026和p QE30-GDPMP经IPTG诱导后均可在大肠埃希菌内高效表达,rGDPMP、rPXNT1、rTXNT和rHyp07026蛋白相对分子质量(Mr)分别为45 000、22 000、23 000和38 000。rGDPMP、rPXNT1、rTXNT和rHyp07026免疫小鼠的脾细胞内84个细胞因子基因的m RNA表达中,与PBS对照小鼠脾细胞比较,高水平表达的IL-1f6分别是对照组的96.22、271.54、108.51和250.15倍,IL-17f分别是对照组的105.54、35.71、53.38和53.57倍,IL-10分别是对照组的21.68、27.51、24.45�
- 敬保迁谢勇恩胡为民杨健王朝莉冯莉
- 关键词：杜氏利什曼原虫
- 基因组免疫系统被引量：6
- 2005年
- 随着对RNAi现象及其功能的深入研究 ,揭示dsRNA/siRNA具靶向降解特异性mRNA、抑制相应基因表达作用 ,有抵抗病毒和转座子入侵基因组的重要功能 ,故被称为“基因组免疫系统”。本文综述了该系统的发现、功能、作用机制和应用前景。
- 唐恩洁杨健朱道银
- 关键词：基因组免疫系统RNAISIRNADSRNA
- 胱抑素B在肿瘤中的表达特征
- 胱抑素B为溶酶体半胱氨酸蛋白酶内源性抑制物，抑制高活性的半胱氨酸蛋白酶所致细胞外基质的降解和基底膜的破坏，与阻止肿瘤的侵袭和转移有关。先前我们以消减抑制杂交技术从食道癌和癌旁正常组织中筛选差异表达基因时，发现食道癌组织中...
- 任碧轩冯莉谢勇恩王朝莉李丽敬保迁
- 猪苓多糖对脐血造血干细胞体外扩增及干细胞移植后免疫重建的调节效应被引量：14
- 2008年
- 目的:人脐血造血干细胞得以移植于小鼠体内,其理论基础是放射线照射使小鼠骨髓枯竭,龛位腾出,为移植的脐血造血干细胞提供空间,而猪苓多糖是从中药猪苓中提取的多糖成分,具有免疫调节抗肿瘤作用,也是一种非T细胞促有丝分裂素,对放射线照射有一定的防护作用。观察猪苓多糖对脐血造血干细胞体外扩增及干细胞移植后免疫重建效应。方法:实验于2004-06/2006-05在兰州大学基础医学院免疫研究所完成。①实验材料:清洁级BALB/c小鼠由兰州生物制品研究所提供,8周龄,体质量约20g,雌雄各半,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。脐血样本由兰泰医院妇产科提供,产妇及家属对实验知情同意,并经医院伦理委员会批准。猪苓多糖由兰州大学第一医院提供。②实验方法:应用20,17.5,12.5,7.5mg/L猪苓多糖体外扩增培养脐血造血干细胞,并测定细胞增殖率及CD34+细胞数。将BALB/c小鼠分为正常对照组:尾静脉、腹腔注射等量生理盐水;照射空白组:3.5Gy经^(60)Coγ放射线照射联合尾静脉、腹腔注射等量生理盐水;照射药物组:3.5Gy经^(60)Coγ放射线照射联合尾静脉注射等量生理盐水、腹腔注射猪苓多糖;照射移植组(n=15):3.5Gy经^(60)Coγ放射线照射联合脐血造血干细胞移植、腹腔注射等量生理盐水;照射移植药物组:3.5Gy经^(60)Coγ放射线照射联合脐血造血干细胞移植、腹腔注射猪苓多糖。③实验评估:观察小鼠生存状况及血常规变化,流式细胞仪测定CD3、CD4、CD8、CD19水平。结果:57只小鼠均进入结果分析。①12.5mg/L猪苓多糖增殖效率最为显著(P<0.01),流式细胞仪测定显示CD34+细胞数扩增了6.33倍。移植药物组小鼠死亡率最低,死亡高峰集中在照射移植后7~14d左右。②移植药物组小鼠血象恢复正常,并且时间明显短于其他实验组(P<0.05)。③细胞及体液免疫恢复情况,移植药物组小鼠各项
- 潘万龙李淑萍唐恩洁赵粉琴罗慧英尹少甫
- 关键词：猪苓多糖脐血造血干细胞体外扩增免疫重建
- 早期糖尿病大鼠视网膜蛋白质表达变化的初步研究被引量：3
- 2007年
- 目的观察2个月病程大鼠视网膜组织蛋白质变化情况;建立并优化视网膜蛋白质组分析所需要的双向凝胶电泳(2-DE)技术,提高其分辨率及重复性。方法提取视网膜蛋白质进行2-DE,对影响2-DE结果的各种因素进行调整、优化。用PDQUest7.3.2软件分析凝胶图谱以获得差异表达的蛋白点。结果成功获得了视网膜组织的2-DE图谱。比较后得到36个表达差异有统计学意义(P<0.05)的蛋白质点,包括上调5个,下调23个,消失8个。结论2个月病程糖尿病大鼠视网膜已经有蛋白质表达的差异。已建立的视网膜蛋白质2-DE技术将为进一步开展视网膜疾病的蛋白质组学研究奠定基础。
- 刘尚清张艳艳羊惠君谢贤镛胡为民袁爱花
- 关键词：糖尿病视网膜蛋白质表达双向凝胶电泳
- 川北地区胃癌差异表达基因的筛选被引量：1
- 2013年
- 目的比较胃癌组织和癌旁正常黏膜组织之间基因表达差异,筛选胃癌特有的差异表达基因片段,为揭示胃癌的病因提供实验室依据。方法运用抑制消减杂交技术(SSH),构建胃低分化腺癌组织cDNA消减文库,采用RT-PCR技术对5例不同阶段胃癌患者的癌组织及癌旁正常黏膜组织相应基因进行筛选。结果成功构建胃低分化腺癌cDNA消减文库,获得5个特异性序列标签(NBPF1、FAM48A、RXFP2、ACTB和QDPR),通过RT-PCR技术进行筛选,获得RXFP2基因的mRNA在所取标本中的差异表达。结论筛选得到胃癌特异性表达基因RXFP2,对了解胃癌发生发展的病因学基础和指导临床治疗具有重要意义。
- 王朝莉敬保迁李丽冯莉
- 关键词：胃癌SSHRT-PCR特异基因
- 人生存素基因的克隆、表达与抗血清制备被引量：1
- 2008年
- 目的克隆表达重组人生存素,制备其抗血清并检测其免疫识别活性。方法用RT-PCR方法从培养的人白血病细胞株HL-60中克隆人生存素cDNA,克隆到原核表达载体pET32a(+),重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,目的蛋白经Ni-NTA树脂亲和纯化后免疫小鼠制备抗血清,ELISA检测抗血清的效价,Western blot和免疫细胞化学法鉴定抗血清的特异性。结果所克隆生存素cDNA序列与Genbank中序列完全一致,将其读码框插入原核表达载体pET32a(+)诱导表达后,SDS-PAGE电泳分析证实重组蛋白为分子量约37KD的融合蛋白,表达量占总菌体的30%,纯化后融合蛋白的纯度为95%,所制备的鼠抗血清的效价达1:1600,Western blotting证实其有较好的特异性,可以检测肿瘤细胞生存素的表达。结论我们已克隆并表达了人生存素基因,所制备的抗人生存素血清可用于相关肿瘤检测。
- 杨健张仁刚敬保迁
- 关键词：生存素抗血清融合蛋白
- 钙粒蛋白A在肿瘤中表达的初步研究
- 钙粒蛋白A属钙结合蛋白，通过对钙离子的调节参与体内多种生物学活动，与肿瘤细胞的增生和分化有关。先前我们以消减抑制杂交技术从食道癌和癌旁正常组织中筛选差异表达基因时，发现食道癌组织中钙粒蛋白A下调表达。本研究中，我们以β-...
- 冯莉谢勇恩王朝莉李丽任碧轩敬保迁
- 鲍曼不动杆菌三价抗原融合蛋白的制备及其免疫原性研究被引量：1
- 2020年
- 目的制备鲍曼不动杆菌SmpA/Omp22/NlpA(1⁃128)三价抗原融合蛋白,免疫接种Balb/c小鼠后探究其免疫原性。方法通过人工合成结合PCR扩增法获取smpA/omp22/nlpA(1⁃384)融合基因,将该融合基因克隆到质粒载体pColdI中,构建重组质粒pColdI⁃SON。将该重组质粒转化E.coli BL21进行原核表达,并将纯化的重组蛋白与弗氏佐剂混合作为免疫原经背部皮下注射接种Balb/c小鼠,并于初次接种后第14、28天各加强免疫1次,同时设置佐剂对照组和PBS对照组。分别于末次免疫后第7、21天小鼠内眦取血分离血清,ELISA检测抗体滴度。分离免疫小鼠脾淋巴细胞,检测抗原刺激培养后脾细胞增殖活性及IFN⁃γ/IL⁃4的分泌情况。结果所构建的重组质粒大小约为5.9 kb,转化大肠杆菌后诱导表达并纯化出分子量约56 kDa的重组蛋白,免疫接种后在小鼠体内检测到高滴度的抗原特异性IgG抗体,小鼠脾淋巴细胞增殖活性明显高于佐剂及PBS对照组(P<0.001),免疫小鼠脾淋巴细胞经抗原刺激后所产生的IL⁃4水平明显高于对照组(P<0.01),而IFN⁃γ产生水平各组间无显著性差异。结论成功制备了鲍曼不动杆菌SmpA/Omp22/NlpA(1⁃128)融合蛋白,小鼠免疫接种后显示出较强免疫原性。
- 董瑶吕琳曦关丽娜王朝莉冯莉谢勇恩
- 关键词：鲍曼不动杆菌免疫原性融合蛋白
