中国药科大学生命科学与技术学院微基因药物实验室
- 作品数：37 被引量：62H指数：4
- 相关作者：胡向兵陈檬廖忠平杨梦琪李祝方更多>>
- 相关机构：南京晓庄学院生物化工与环境工程学院徐州师范大学生命科学学院江西中医药大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家基础科学人才培养基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学历史地理更多>>
- 热休克蛋白HSP65抑制肿瘤新生血管形成的药效学实验研究被引量：1
- 2012年
- 观察卡介苗来源的热休克蛋白HSP65对肿瘤新生血管形成的影响并初步探讨可能的作用机制。通过基因工程手段获得纯化的重组HSP65蛋白,与弗氏佐剂联合给药。构建皮内接种黑色素瘤B16-F10细胞的小鼠模型。通过在肿瘤接种前长期的多次给药,发现Hsp65能够在小鼠体内诱导高滴度的特异性抗体,并显著抑制肿瘤周围新生血管的形成,抑制率达到41.01%。经免疫组化技术对肿瘤表面VEGF的表达水平进行分析,结果表明HSP65免疫组VEGF表达量明显下降,提示了该疫苗作用的可能机制。
- 谢燕飞陈颖瑛左爱仁曹荣月
- 关键词：新生血管
- P277多肽融合热休克蛋白65提高抗1型糖尿病的作用被引量：4
- 2008年
- 为了提高P277肽抗1型糖尿病的作用,把P277肽融合在卡介苗热休克蛋白65的C端,构建了pET28a- HSP65-P277高效表达载体,在大肠杆菌中高效可溶性表达。利用硫酸铵分级沉淀、阴离子交换柱层析分离纯化了融合蛋白HSP65-P277。使用HSP65-P277在没有任何佐剂存在的情况下免疫非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠,通过三次腹腔注射,每月收集被免疫动物的血清,血糖浓度用自动生化分析仪测定。结果显示HSP65-P277免疫组小鼠血糖平均值及糖尿病的累积发病率和其余组相比均有显著差异(P<0.01),融合蛋白HSP65-P277抗NOD小鼠糖尿病的作用显著高于单独的P277和HSP65。为进一步开发能用于临床的1型糖尿病疫苗提供了良好的设计思路,HSP65-P277极有可能进一步发展成为新的抗Ⅰ型糖尿病的疫苗。
- 朱爱华鲁勇金亮吴洁李泰明刘景晶
- 关键词：热休克蛋白1型糖尿病融合蛋白血糖
- 不同剂量MOG(34-56)抗原诱导食蟹猴EAE模型的研究被引量：1
- 2017年
- 利用不同剂量髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(Myelin oligodendrocytes glycoprotein,MOG34-56)免疫诱导制备食蟹猴(Macaca fascicularis)实验性自身免疫性脑脊髓炎模型(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)。选择4岁左右雌性食蟹猴,分高、低2个剂量组,利用合成的MOG34-56与完全弗氏佐剂(Complete Freund's adjuvant,CFA)混合制备成乳剂,经腋窝和腹股沟皮下多点免疫注射的方法,制备EAE食蟹猴模型,从行为学、核磁共振成像(Magnetic Resonance Imaging,MRI))和病理学等多方面进行评估。结果显示利用不同剂量MOG34-56在完全弗氏佐剂条件下通过皮下多点免疫方法能成功诱导出不同病程的EAE食蟹猴模型,且诱导发病率达100%。表现为行为学异常,体重下降,神经系统显示功能障碍,MRI影像及解剖病理观察均有明显病变,且高剂量诱导组症状较低剂量组严重。
- 彭真张礼标何向阳张琴刘会彭兴文王华倩孙云霄吴洁
- 关键词：食蟹猴髓鞘少突胶质细胞糖蛋白
- S-腺苷蛋氨酸抗小鼠H22肝癌作用研究
- 2011年
- 探讨S-腺苷蛋氨酸(SAM)能否抑制小鼠H22肝癌。通过建立H22小鼠肝癌模型,SAM预防及治疗,检测皮下抑瘤率、皮内肿瘤微血管新成、肺转移等指标对其抗肿瘤作用机理进行部分探讨。结果显示,SAM对H22肿瘤攻击起到有效地保护作用,与PBS阴性对照组相比,预防组和治疗组肿瘤生长缓慢,平均瘤重显著降低(P<0.01),抑瘤率达到70%以上;有效地抑制了小鼠皮内模型中的微血管新生(P<0.01);同时在一定程度上减少了小鼠的肺转移(P<0.05)。SAM通过抑制肿瘤血管生长表现出有效的抑制小鼠H22肝癌作用。
- 姚毅张宇张帆侯景罗新龙曹荣月金亮吴洁刘景晶
- 关键词：S-腺苷蛋氨酸H22肝癌抑制血管生成肺转移
- hVEGF_(121)与βhCG融合蛋白的克隆、分离纯化与初步鉴定被引量：2
- 2014年
- 构建一种新型抗肿瘤融合蛋白疫苗,包含hVEGF121和βhCG抗原表位,并探索融合蛋白的纯化条件和方法。采用PCR方法,克隆VEGF和βhCG基因,并通过限制性内切酶NcoⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ将两个基因逐个插入pET-28a(+)质粒中,利用质粒自带的卡那霉素抗性筛选出阳性克隆,获得重组基因的表达载体。对重组菌进行乳糖诱导表达后,通过超声破碎,硫酸铵分级沉淀,阴离子交换层析等方法进行融合蛋白的分离纯化,Western-blot鉴定。测序结果表明成功构建重组载体pET-28a-VEGF-M2-X10-βhCG-CTP37,重组基因长993 bp,编码331个氨基酸残基。SDS-PAGE显示,经乳糖诱导,Escherichia coli BL21(DE3)重组菌表达hVEGF121-M2-X10-βhCG-CTP37多肽,约占菌体总蛋白量的35%。融合蛋白经分离纯化后纯度可达到电泳纯,约占蛋白冻干粉的80%。结论:克隆、测定了融合蛋白基因,并在Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达hVEGF121-M2-X10-βhCG多肽,同时成功分离纯化此多肽。
- 曹荣月宦晓军孙翁李盼郑梅赵鹤杨梦琪龙军张晓红
- 关键词：ΒHCG克隆分离纯化融合蛋白
- 热休克蛋白HSP65DNA疫苗抑制黑色素瘤血行转移的实验研究被引量：4
- 2009年
- 观察卡介苗来源的热休克蛋白HSP65的DNA疫苗对小鼠B16/F10黑色素瘤血行转移的抑制作用。构建含HSP65编码基因的真核分泌表达DNA疫苗pCR3.1-VS-HSP65及其后融合多个T细胞辅助表位的pCR3.1-VS-HSP65-TP-M2。连续8次肌肉注射免疫C57BL/6J雄性小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清中抗HSP65-IgG类抗体滴度,于最后一次免疫后第2周,尾静脉接种B16/F10黑色素瘤细胞,考察该疫苗的免疫原性及药效。ELISA结果显示两种HSP65核酸疫苗均能诱发高滴度抗HSP-IgG类抗体。pCR3.1-VS-HSP65-TP-M2诱发抗体滴度较pCR3.1-VS-HSP65显著增加,并能显著抑制B16/F10的血行转移(P<0.05),且与生理盐水对照组对比抑瘤率达到74.8%(肝),53.2%(肺)。HSP65在增强其免疫原性的基础上能显著抑制B16/F10黑色素瘤的血行转移。
- 林明鲁勇张宇谢燕飞胡向兵王华倩李泰明吴洁刘景晶曹荣月
- 关键词：热休克蛋白HSP65DNA疫苗黑色素瘤抑瘤率
- 真核表达载体pcDNA3.1(+)-GFP-M2的构建及在小鼠骨髓树突状细胞中的表达被引量：1
- 2014年
- 为了构建含有绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)报告基因的M2真核表达载体pcDNA3.1(+)-GFP-M2(2段热休克蛋白70表位序列407-426,mHSP70407-426,M2),探讨M2基因转染小鼠骨髓树突状细胞(Dendritic cell,DC)的表达情况。采用4轮PCR方法从pcDNA3.1(+)-GFP载体中将GFP编码序列扩增出来,并在其上游引入Kozak序列,下游引入M2序列,使用限制性内切酶HindIII和BamHI将目的片段插入到pcDNA3.1(+)中,利用质粒自带的氨苄青霉素抗性筛选出阳性克隆,获得重组基因的表达载体。重组载体通过转染试剂Lipofectamine2 000转染至DC中,通过倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在细胞内的表达。构建的pcDNA3.1(+)-GFP-M2经双酶切、PCR和测序鉴定和预期结果一致。荧光显微镜观察显示在转染pcDNA3.1(+)-GFP-M2基因的树突状细胞中,荧光均匀地分布于整个细胞。成功构建含有绿色荧光蛋白报告基因的M2真核表达载体pcDNA3.1(+)-GFP-M2。M2基因成功转染至树突状细胞中。
- 曹荣月孙翁陈檬杨梦琪宦晓军肖芳李盼龙军
- 关键词：真核表达载体树突状细胞KOZAK序列
- 抗βhCG蛋白疫苗的抗肿瘤作用被引量：4
- 2010年
- 以人绒毛膜促性腺激素β亚基（βhCG）的羧基端109~118的6段串联重复表位为靶点、热休克蛋白65（HSP65）为载体,设计一种新型的蛋白疫苗HSP65-X6-βhCGCTP37,探讨其能否抑制小鼠前列腺癌,并且对其抗肿瘤的作用机理进行部分探讨。以制备的HSP65-X6-βhCGCTP37免疫C57BL/6小鼠,分别检测体液免疫应答和细胞免疫应答。通过ELISA法,从血清中检测到高滴度的抗βhCGIgG类抗体。Western blot实验证明小鼠血清中的抗体能够特异性识别βhCG表位。淋巴细胞增殖实验的结果显示,HSP65-X6-βhCGCTP37的免疫能够有效的刺激脾淋巴细胞的增殖。预防性实验的结果显示,HSP65-X6-βhCGCTP37激发的免疫应答对于RM-1肿瘤攻击起到有效的保护作用,与PBS阴性对照组比较,平均肿瘤重显著降低（P〈0.05）。同时有效地减少了小鼠的肺转移（P〈0.01）;抑制了小鼠皮内肿瘤模型中的血管新生（P〈0.01）。HSP65-X6-βhCGCTP37蛋白疫苗能有效地抑制小鼠前列腺癌的生长。
- 叶嘉燕胡向兵邢芸侯景李飞张帆金亮李泰明刘景晶曹荣月
- 关键词：蛋白疫苗前列腺癌
- 抗Ⅰ型糖尿病融合基因HSP65-6×P277在烟草中的表达被引量：1
- 2012年
- 为了研究抗Ⅰ型糖尿病融合蛋白质基因HSP65-6×P277在植物中的表达,构建了含有融合基因HSP65-6×P277的植物表达载体pCAMBIA2301-HSP65-6×P277,通过农杆菌介导法将重组载体转入烟草,利用卡那霉素作为植物筛选标记,获得含有抗Ⅰ型糖尿病基因的16株转基因烟草植株。通过PCR、半定量RT-PCR及SDS-PAGE蛋白质电泳等方法检测,初步验证在抗性烟草植株中融合基因HSP65-6×P277在mRNA和蛋白质水平上进行了表达。
- 郑卿郭书巧杨洁吴洁刘景晶倪万潮
- 关键词：烟草植物疫苗
- 人源血管内皮生长因子突变体Ⅱ的克隆表达、分离纯化及初步鉴定
- 2013年
- 构建人源血管内皮生长因子突变体hVEGF121Ⅱ的重组原核表达质粒,获得hVEGF121Ⅱ蛋白用于制备抗血管生成作用更强的抗肿瘤疫苗。利用PCR技术,在已构建的hVEGF121Ⅰ突变体的基因末端引入热休克蛋白mHSP70的407-426两段串联重复序列的编码基因,PCR产物经Hind III和Nco I双酶切后连接到经同样限制性内切酶切过的原核表达载体pET-28a(+)上,转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)中,乳糖诱导表达,超声破碎菌体,包涵体经洗涤、溶解、稀释复性、离子交换层析得到目的蛋白hVEGF121Ⅱ,Western-blot鉴定。结果成功构建了hVEGF121Ⅱ蛋白的表达质粒pET-28a(+)-hVEGF121Ⅱ,重组菌株经乳糖诱导后,目的蛋白表达量占全菌蛋白的62%,分离纯化后纯度达到95%,hVEGF121Ⅱ蛋白的单体和二聚体都可以和VEGF抗体结合。重组hVEGF121Ⅱ蛋白的表达成功为进一步对其进行免疫学研究奠定了基础。
- 曹荣月张鹏徐茂磊陈檬邢芸胡晓利黄巧玲
- 关键词：血管内皮细胞生长因子突变体抗血管新生包涵体
