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树突状细胞分泌的exosomes体外诱导特异性CTL抗肾癌的初步研究被引量：1: 2010年; 目的提取树突状细胞外来体(DC)分泌的外来体(exosomes),检测其体外刺激同源T细胞活化和诱导特异性细胞毒性T细胞(CTL)抗肾癌769-P的免疫效应。方法从健康志愿者外周血单个核细胞中诱导培养DC,流式细胞术检测DC的表型;通过超速离心法结合超滤法制备DC分泌的exosomes,透射电镜观察exosomes的形态,MTT法检测DC分泌的exosomes诱导T细胞的增殖和特异性CTL对769-P的体外杀伤活性。结果超速离心法结合超滤法能从DC上清中分离exosomes,并且肿瘤抗原致敏DC分泌的exosomes能有效促进T细胞的增殖及特异性CTL抗769-P效应,T细胞增殖倍数达(1.68±0.22)%,CTL杀瘤活性为(38.23±2.16)%。结论抗原致敏DC分泌的exosomes能有效诱导激活具有较强杀瘤活性的肿瘤特异性CTL。; 王新利李卿高婷付立叶王扬蒋涛姜又红; 关键词：外来体细胞毒性T细胞肾癌

CIK细胞的制作及对不同肿瘤细胞株体外抗肿瘤作用的研究被引量：31: 2005年; 目的:制备细胞因子激活杀伤(CIK)细胞并观察其生物学特性及对不同肿瘤细胞株的杀伤作用。方法:外周血单个核细胞用无血清培养基经干扰素γ(IFNγ),CD3McAb,白介素2(IL2),白介素1α(IL1α)诱导,制作CIK细胞,以淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)作为对照,流式细胞仪检测CIK细胞的免疫表型,MTT法检测其对不同肿瘤细胞株的杀瘤活性。结果:CIK细胞与LAK细胞相比增殖速度快、最终增殖倍数高。CIK细胞主要由CD3和CD56双阳性细胞构成。CIK细胞对多种肿瘤细胞具有较强的杀伤活性。结论:CIK细胞过继免疫治疗是一种非常有前景的抗肿瘤治疗方法。; 隋承光孟凡东王晓华王扬蒋涛戚新王晓颖姜又红; 关键词：肿瘤过继免疫治疗

NK细胞杀瘤活性与肿瘤细胞表面MICA/B表达的相关性研究被引量：1: 2010年; 目的探讨自然杀伤NK细胞杀瘤活性与肿瘤细胞表面MICA/B表达的相关性。方法采用流式细胞术检测人红白血病细胞K562、乳腺癌细胞Bcap37、肾癌细胞769P及肺癌细胞A549表面MICA/B的表达,RosetteSep誖改进法分离人外周血NK细胞,MTT法检测不同效靶比时NK细胞对几种肿瘤细胞的杀伤活性。结果K562、Bcap37、769P及A549细胞表面MICA/B的表达阳性率分别是(60.35±0.50)%、(90.72±0.64)%、(55.59±0.55)%、(3.84±0.10)%;RosetteSep誖改进法分选出的NK细胞纯度为(96.52±2.42)%,在同一效靶比时,NK细胞对K562、Bcap37及769P的杀伤活性较强,与A549相比有显著性差异(P<0.01),其中K562与Bcap37之间无显著性差异(P>0.05);效靶比为5∶1、10∶1、20∶1时,NK细胞的杀伤活性与4种肿瘤细胞表面MICA/B表达均呈正相关关系(P<0.01),随着效靶比增加,相关性增强。结论NK细胞的杀伤敏感性与肿瘤细胞表面MICA/B的表达水平相关,肿瘤细胞表面MICA/B的表达水平影响NK细胞的杀伤活性。; 王新利李卿蒋涛王扬付立叶高婷姜又红; 关键词：自然杀伤细胞肿瘤细胞细胞毒性实验

卵巢癌患者自体细胞因子诱导杀伤细胞治疗前后免疫功能的检测与分析被引量：8: 2006年; 目的观察卵巢癌患者自体细胞因子诱导杀伤细胞治疗前后患者外周血淋巴细胞亚群的变化,为综合评价临床应用CIK细胞疗法治疗卵巢癌的效果提供依据。方法2004-2005采集中国医科大学附属第一医院5例卵巢癌患者的外周血单个核细胞,经多种细胞因子诱导制成CIK细胞,回输前及回输后取患者外周血,流式细胞仪测定外周血淋巴细胞亚群的变化。结果诱导培养后,CD3+/CD56+效应细胞的比例明显升高;CIK细胞回输后患者外周血CD3+、CD3+/CD8+、CD3+/CD56+阳性淋巴细胞亚群的比例明显升高。结论CIK细胞疗法可以提高卵巢癌患者的细胞免疫功能,提高对肿瘤细胞的杀伤作用。; 孟凡东隋承光王晓华王扬蒋涛付立业姜又红; 关键词：杀伤细胞细胞表型

不同因素对诱导肿瘤患者cik细胞体外增殖能力及杀伤活性的影响被引量：1: 2007年; 目的研究不同因素对诱导细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells,CIK)体外增殖能力及杀伤活性的影响。为肿瘤CIK细胞治疗提供实验依据。方法细胞计数法及MTT法测定CIK细胞的增殖能力及杀伤活性。结果低年龄组较高年龄组CIK细胞体外增殖能力及杀伤活性强;在无血清培养基条件下培养的CIK细胞的体外增殖能力及杀伤活性较完全培养基的强;在一定的培养时间内CIK细胞的体外增殖能力与培养的时间成正比;CIK细胞对各种肿瘤细胞均有杀伤作用。结论不同因素对肿瘤患者CIK细胞体外增殖能力及杀伤活性有影响。; 王晓华隋承光孟凡东梁红王杨蒋涛付立业姜又红; 关键词：增殖能力杀伤活性细胞因子

正常人和肿瘤患者CIK细胞的体外增殖能力及抗肿瘤作用的对比分析被引量：13: 2007年; 目的:探讨正常人和肿瘤患者CIK细胞体外增殖能力及抗肿瘤作用的差异。方法:分离正常人和肿瘤患者的外周血单个核细胞(PBMC),加入细胞因子(CK),体外诱导CIK细胞,用细胞计数板法观察CIK细胞增殖能力及随时间变化的趋势,用MTT法检测其对不同肿瘤细胞株的杀伤活性。结果:与正常人CIK细胞相比,肿瘤患者CIK细胞的增殖速度较慢,其最大增殖倍数低(P<0.01);CIK细胞的增殖速度与年龄有关,即低年龄段的CIK细胞增殖能力强;正常人的CIK细胞对乳腺癌细胞株(MDA-MB-231)、肺巨细胞癌细胞株(BE-1)和前列腺癌细胞株(PC-3)的杀伤活性明显高于肿瘤患者的CIK细胞(P<0.01);不同年龄段肿瘤患者的CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤率差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CIK细胞的体外增殖力及对肿瘤细胞的杀伤活性与年龄有关,正常人CIK细胞的体外增殖力及对肿瘤细胞的杀伤活性高于肿瘤患者的CIK细胞。; 梁红王晓华隋承光孟凡东傅立业姜又红; 关键词：CIK细胞外周血单个核细胞细胞因子体外增殖抗肿瘤作用

一种经济高效的人外周血NK细胞纯化方法的建立被引量：5: 2010年; 目的:建立一种经济并且纯化率高的人外周血NK细胞分离方法。方法:对用RosetteSep(法直接从全血分离NK细胞的方法进行改进,先从全血中获得单个核细胞(PBMC),与红细胞按比例混合后再进行分离,利用流式细胞仪检测纯度,并且用CCK-8法检测NK细胞对K562细胞的杀伤活性。结果:改进后分离每毫升血所需RosetteSep抗体复合物用量仅为直接分离法的1/50;NK细胞的纯度由纯化前的(11.02±3.15)%提高到(96.52±2.42)%,细胞回收率为(70.24±10.51)%;纯化的NK对靶细胞K562有较强的杀伤作用,与直接分离法比较杀伤活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论:改进后的方法可以获得高纯度的NK细胞,该分离方法不影响NK的杀伤活性,同时极大的降低了分离成本。初步建立了一种经济高效,快速简便,并且纯化率高的人外周血NK细胞纯化方法。; 王新利李卿高婷姜又红; 关键词：外周血 NK细胞纯化

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辽宁省自然科学基金(20042093)