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重组腺病毒Ad-CRT/MAGE-A3联合表柔比星抑制乳腺癌细胞增殖及侵袭被引量：1: 2012年; 目的:构建携带钙网蛋白(calreticulin,CRT)基因和黑素瘤抗原基因-A3(melanoma antigen gene-A3,MAGE-A3)的重组腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3,观察其联合表柔比星对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭的抑制作用。方法:构建Ad-CRT/MAGE-A3载体,感染MDA-MB-231细胞后,荧光显微镜观察其最适感染复数(multiplicity of infection,MOI)。分表柔比星、Ad-GFP、Ad-CRT/MAGE-A3、表柔比星+Ad-GFP、表柔比星+Ad-CRT/MAGE-A3共5组,MTT法检测各组MDA-MB-231细胞的增殖,Transwell实验检测各组MDA-MB-231细胞的侵袭力。结果:成功构建重组腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3,其感染MDA-MB-231细胞的最适MOI为100。与其他各组相比,应用Ad-CRT/MAGE-A3联合表柔比星能明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖[(83.27±1.04)%vs(57.42±1.27)%,(43.26±0.95)%,(61.23±1.47)%,(55.38±1.62)%;P<0.05]和侵袭[(8.41±4.20)vs(14.62±5.33),(107.66±3.35),(100.60±4.42),(104.20±2.60);P<0.05]。结论:腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3能增强表柔比星抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭的能力。; 刘新莉赵丹李晓曦李岩马萍; 关键词：重组腺病毒载体表柔比星乳腺癌

重组腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3抑制肺腺癌细胞A549侵袭的体外研究: 2012年; 目的:探讨同时携带CRT基因及MAGE-A3基因的重组腺病毒载体转染人肺腺癌细胞A549后基因的表达及其对体外增殖、侵袭、凋亡及血管形成能力的影响。方法:Ad-CRT/MAGE-A3转染A549细胞,转染48h后以Western blotting法检测CRT及MAGE-A3蛋白的表达;MTT法检测Ad-CRT/MAGE-A3对A549细胞增殖的影响;Transwell方法检测Ad-CRT/MAGE-A3对A549细胞侵袭的影响;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测Ad-CRT/MAGE-A3对A549细胞凋亡的影响;小管形成实验检测Ad-CRT/MAGE-A3对血管形成的影响。结果:转染48h,Western blotting结果显示转染Ad-CRT/MAGE-A3的A549细胞能够表达CRT及MAGE-A3蛋白;MTT检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制A549细胞的增殖;Tran-swell检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制A549细胞的侵袭能力;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够诱导A549细胞凋亡;小管形成实验结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制血管形成。结论:Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制A549的增殖及侵袭能力,诱导其凋亡,并能明显抑制血管内皮细胞血管生成,其作用机制可能与CRT及MAGE-A3蛋白同时表达后相互作用有关,提示Ad-CRT/MAGE-A3可以作为潜在的肺癌基因治疗的新方法。; 刘新莉赵丹李晓曦王扬李岩马萍; 关键词：CRT 重组腺病毒载体血管形成

重组腺病毒载体CRT联合紫杉醇对乳腺癌细胞周期、增殖及凋亡的影响: 2012年; 目的:研究Ad-CRT联合紫杉醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞周期、细胞增殖及凋亡的影响。方法:MTT法检测细胞增殖,相差显微镜观察细胞形态学变化;PI单染流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果:Ad-CRT联合紫杉醇对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的抑制率明显高于单纯Ad-CRT组和单纯紫杉醇组,且抑制作用呈时间依赖关系(P<0.05),且细胞形态发生明显的改变。Ad-CRT联合紫杉醇将乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞周期明显的阻滞在G2/M期,并且促进细胞的凋亡。结论:Ad-CRT联合紫杉醇能增强乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖抑制、阻滞细胞周期并且诱导细胞凋亡。; 赵丹刘新莉仇凤启孙大鹏马萍; 关键词：紫杉醇乳腺癌增殖凋亡

重组CRT/MAGE-A3腺病毒转染SGC-7901细胞及对其抑制作用的研究: 2011年; 目的探讨同时携带CRT基因及MAGE-A3基因的重组腺病毒载体转染人胃癌细胞SGC-7901的表达及对其体外侵袭、凋亡及血管形成能力的影响。方法 Ad-CRT/MAGE-A3转染SGC-7901,转染48h后以Western blotting法检测CRT及MAGE-A3蛋白的表达,Transwell方法检测Ad-CRT/MAGE-A3对SGC-7901细胞侵袭的影响,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测Ad-CRT/MAGE-A3对SGC-7901细胞凋亡的影响,小管形成实验检测Ad-CRT/MAGE-A3对血管形成的影响。结果转染48h,Western blotting结果显示转染Ad-CRT/MAGE-A3的SGC-7901细胞能够表达CRT及MAGE-A3蛋白,Transwell检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制SGC-7901的侵袭能力,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测结果证实Ad-CRT/MAGE-A3在实验的转染条件下对SGC-7901并无诱导凋亡的作用,小管形成实验结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制血管形成。结论 Ad-CRT/MAGE-A3明显抑制SGC-7901的侵袭能力和血管生成,提示Ad-CRT/MAGE-A3可以作为潜在的胃癌基因治疗的新方法。; 刘新莉赵丹李岩马萍; 关键词：CRT MAGE-A3 重组腺病毒载体血管形成

CRT/MAGE-A3重组腺病毒载体的构建及体外表达的研究被引量：3: 2009年; 目的构建钙网织蛋白/黑素瘤抗原基因-A3(CRT/MAGE-A3)双基因重组腺病毒载体,并进行体外表达研究。方法从表达质粒pcDNA3/CRT中切取目的片段CRT,定向克隆至穿梭载体pShuttle-GFP-CMV。根据Genbank中提供的黑素瘤基因序列,设计并合成引物,以人肺癌组织cDNA文库为模板采用RT-PCR技术扩增人黑素瘤抗原基因-A3基因片段,测序后将黑素瘤抗原基因-A3基因片段定向克隆至穿梭载体,进而将穿梭载体克隆至PacⅠ限制性内切酶线性化的腺病毒载体pAdxsi。结果目的片段CRT转入穿梭载体后,酶切鉴定pShuttle(-ΔGFP)-CRT正确。人肺癌组织经RT-PCR扩增出大小约950 bp的基因片段,测序证实为MAGE-A3 DNA后,克隆至穿梭载体pShuttle(-ΔGFP)-CRT构建穿梭载体pShuttle-CRT-MAGE-A3,酶切鉴定证实构建正确。酶切穿梭载体将双基因片段克隆至腺病毒载体pAdxsi得到Ad-CRT/MAGE-A3病毒载体,酶切鉴定证实构建成功。转染293LP细胞并用Western blot检测到其体外表达。结论成功构建CRT/MAGE-A3重组腺病毒载体并证实其能在体外有效表达CRT蛋白及MAGE-A3蛋白。; 刘新莉陈洋马萍; 关键词：腺病毒基因治疗

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辽宁省自然科学基金(20042073)