广东省科技计划工业攻关项目(2007B060401053)
- 作品数：6 被引量：8H指数：1
- 相关作者：李茹冰傅泳航杨向阳李若冰李健更多>>
- 相关机构：广州市恺泰生物科技有限公司解放军第458医院广州军区广州总医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生理学化学工程更多>>
- rhIL-12与HBsAg联合给药对食蟹猴rhIL-12药代动力学的影响
- 2012年
- 目的探讨重组人白细胞介素-12(Recombinant human interleukin-12,rhIL-12)与乙型肝炎表面抗原(HBsAg)联合给药对食蟹猴rhIL-12药代动力学的影响。方法以抗rhIL-12单克隆抗体为包被抗体,生物素标记的抗人IL-12单克隆抗体为检测抗体,建立双抗体夹心BAS-ELISA法,测定食蟹猴血清中rhIL-12含量,并对其进行验证。将食蟹猴分为HBsAg(90μg/kg,肌肉注射)与rhIL-12(0.5μg/kg,皮下注射)联用低剂量组和HBsAg(90μg/kg,肌肉注射)与rhIL-12(40μg/kg,皮下注射)联用高剂量组,分别于给药后不同时间采血,分离血清,用建立的BAS-ELISA法测定血清中rhIL-12浓度,采用统计矩方法计算药代动力学参数。结果建立的双抗体夹心BAS-ELISA法的最低定量限为31.25 pg/ml,特异性较强,精密性和准确性良好,检测不同条件处理的样品均保持稳定;联合给药后,食蟹猴血清中rhIL-12的浓度随其剂量的增加而增加,于9 h左右达峰值,高、低剂量组半衰期分别为(21.24±2.03)和(16.05±4.76)h。结论 rhIL-12与HBsAg联合给药对食蟹猴rhIL-12的药代动力学无影响,本研究为IL-12的临床应用奠定了基础。
- 李茹冰李健李淑穗陈新孙智平张宜俊傅泳航
- 关键词：白细胞介素-12乙型肝炎表面抗原食蟹猴药代动力学
- 绿脓杆菌及其鞭毛蛋白联合rhIL-12体外对慢性乙型肝炎患者细胞免疫功能的影响被引量：1
- 2010年
- 目的探讨绿脓杆菌及其鞭毛蛋白联合rhIL-12体外对慢性乙型肝炎患者细胞免疫功能的影响,为rhIL-12作为佐剂应用于临床提供理论依据。方法取健康人及慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMCs),分别与绿脓杆菌、鞭毛蛋白、rhIL-12、绿脓杆菌+rhIL-12、鞭毛蛋白+rhIL-12孵育,ELISA法检测细胞培养上清中IFNγ的含量。结果绿脓杆菌和鞭毛蛋白组只诱导产生低水平的IFNγ,rhIL-12组诱导产生IFNγ的水平较阴性对照组显著提高;而绿脓杆菌+rhIL-12组、鞭毛蛋白+rhIL-12组诱导产生IFNγ的水平显著高于绿脓杆菌、鞭毛蛋白和rhIL-12组,差异均有统计学意义,且rhIL-12的作用呈剂量依赖性。结论绿脓杆菌及其鞭毛蛋白联合rhIL-12体外能显著提高健康人和慢性乙型肝炎患者PBMCs产生IFNγ的水平,增强其细胞免疫应答。
- 傅泳航杨向阳李茹冰王增松王翠玲谢飞群牛丽红邓凤君徐江平张宜俊
- 关键词：绿脓杆菌制剂鞭毛蛋白白细胞介素-12外周血单个核细胞干扰素Γ
- 乙型肝炎表面抗原联合rmIL-12诱导的小鼠细胞免疫应答被引量：6
- 2009年
- 目的探讨乙型肝炎表面抗原(HBsAg)联合重组鼠白介素-12(rmIL-12)对免疫小鼠诱导细胞免疫应答的影响。方法以不同给药方式、不同剂量的HBsAg联合rmIL-12免疫C57BL/6J小鼠,ELISA法检测小鼠血清及脾淋巴细胞中IFNγ及IL-4的水平。结果HBsAg+rmIL-12高剂量组免疫的C57BL/6J小鼠,其脾淋巴细胞IFNγ水平明显高于BALB/c小鼠;3种不同给药方式均可诱导C57BL/6J小鼠血清和脾细胞IFNγ水平明显升高,三者之间差异无统计学意义;HBsAg+rmIL-12高、中、低剂量组免疫C57BL/6J小鼠血清可诱导IFNγ水平明显升高,且呈剂量依赖性,脾细胞IFNγ水平在中、低剂量组均未产生效应,高剂量组明显升高,而对IL-4无明显影响。结论rmIL-12可显著增强HBsAg诱导的细胞免疫应答,并使免疫应答转向Th1型,对于发展治疗性乙肝疫苗具有潜在的应用价值。
- 傅泳航杨向阳李茹冰夏书奇王翠玲王增松谢飞群段祥曾振飞张宜俊
- 关键词：乙型肝炎表面抗原细胞免疫细胞因子
- rhIL-12联合HBsAg刺激健康人外周血单核细胞对IL-12R的影响
- 2012年
- 目的确认重组人白细胞介素12(rhIL-12)联合乙型肝炎表面抗原(HBsAg)可增强健康人外周血单核细胞(PBMC)产生特异性细胞免疫应答,并分析其细胞来源,及对IL-12R的影响,探讨hIL-12联合HBsAg作为治疗型乙型肝炎疫苗的应用前景。方法 8名健康人PBMC分别与rhIL-12(1 ng/mL)、rHBsAg(500 ng/mL)和rhIL-12(1ng/mL)+rHBsAg(500 ng/mL)体外孵育,采用流式细胞术检测CD4+IFN-γ(γ-干扰素)+T细胞、CD8+IFN-γ+T细胞及CD56+IFN-γ+NK细胞百分比,并测定表达IL-12Rβ1、IL-12Rβ2的细胞百分比。结果 rhIL-12与rHBsAg联合组CD8+IFN-γ+T细胞及CD56+IFN-γ+NK细胞百分比均较对照组明显升高,且有非常显著差异(P<0.01),联合组CD8+IL-12Rβ1和CD56+IL-12Rβ1与单用rhIL-12或rHBsAg组比较均显著升高。结论提示rhIL-12联合rHBsAg诱生的IFN-γ主要来自CD56+NK细胞、CD8+T细胞,其次是CD4+T细胞;rhIL-12和rHBsAg单独均能上调健康人PBMCs表面IL-12R的表达,rhIL-12与rHBsAg联合具有增强作用。
- 李茹冰李若冰王翠玲张宜俊李超傅泳航
- 关键词：乙型肝炎表面抗原外周血单个核细胞Γ干扰素
- 重组人白细胞介素-12(CHO细胞)的纯化及其活性被引量：1
- 2009年
- 目的建立CHO细胞表达的重组人白细胞介素-12(rhIL-12)的纯化工艺,并检测纯化的rhIL-12的生物活性。方法取高效表达rhIL-12的CHO工程细胞培养上清液,采用层析结合硫酸铵沉淀的方法进行分离纯化,ELISA法测定目的蛋白的含量,并计算回收率;SDS-PAGE、SEC-HPLC和Westernblot对纯化样品进行鉴定;以PBMCIFNγ诱生法检测纯化rhIL-12的生物活性。结果纯化的rhIL-12的总回收率为56.4%;经SEC-HPLC检测,其纯度达99.2%;SDS-PAGE分析显示,两个亚基的相对分子质量分别与理论值(40000和35000)相符;Westernblot分析显示,rhIL-12可与相应抗体发生特异性结合;rhIL-12诱生IFNγ量与rhIL-12浓度呈典型的S型曲线关系,具有剂量依赖性,其效价为8.3×106IU/mg。结论已建立了CHO细胞表达的rhIL-12纯化工艺,该工艺成本低,操作简便,纯化产物回收率和纯度高,适于工业化生产。
- 赵峰罗慧娟叶倩君张霞张桂铃王兴勇张宜俊
- 关键词：白细胞介素-12纯化活性
- 三氯醋酸沉淀法测定食蟹猴体内^(125)I-rhIL-12的含量被引量：1
- 2013年
- 目的建立三氯醋酸(Trichloroacetic acid,TCA)沉淀法测定食蟹猴体内125I-rhIL-12的含量,并进行验证及初步应用。方法采用Na125I标记结合TCA沉淀蛋白的方法测定食蟹猴体内125I-rhIL-12的含量,对建立的方法进行线性、精密度及回收率验证;将2μg/kg125I-rhIL-12单剂量皮下注射食蟹猴,分别于注射后4、8、24、32、48、72、96、120、144和168 h收集尿和粪,用建立的方法测定放射性,计算排出放射性占注入放射性的百分比。结果125I-rhIL-12的效价与未标记对照品效价无显著差异;在0.02～200 ng-当量范围内,不同组织/体液中125I-rhIL-12的加入量与总放射性及TCA沉淀放射性之间线性关系良好,变异系数(CV)多小于20%;125I-rhIL-12原形主要在TCA沉淀部分。125I-rhIL-12经皮下注射食蟹猴后,放射性主要经尿排泄,少量经粪排泄,皮下注射后168 h,可排泄完全。结论125I与rhIL-12在体内结合稳定,TCA沉淀法可用于测定食蟹猴体内125I-rhIL-12的含量。
- 李淑穗李若冰李茹冰李健陈新孙智平张宜俊傅泳航
- 关键词：白细胞介素-12食蟹猴
