国家自然科学基金(31172350) 作品数:5 被引量:13 H指数:2 相关作者: 冯力 时洪艳 张鑫 陈建飞 石达 更多>> 相关机构: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 东北农业大学 中国农业科学院上海兽医研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 黑龙江省杰出青年科学基金 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03分离株细胞适应性和致病性研究 被引量:5 2012年 为确定猪捷申病毒(PTV)Swine/CH/IMH/03株的易感细胞系及其致病性,本实验将该病毒接种不同细胞,通过细胞病变、电子显微镜观察和PCR技术进行鉴定。并进一步将该病毒回归本动物鉴定其致病性。试验结果表明,PTV Swine/CH/IMH/03对IB-RS-2和PK-15细胞系敏感,能够在IB-RS-2和PK-15细胞系中增殖。致病性试验结果显示,Swine/CH/IMH/03分离株能够导致实验猪出现神经症状,剖检可见脑、肾、脾、肠道发生出血,病理组织学检查可见脑实质内胶质细胞浸润、肾脏间质小血管淤血、脾淋巴细胞减少、小肠伴有出血及淋巴细胞浸润等病理变化,对仔猪具有强致病性。 冯力 胡守萍 时洪艳 童光志 刘娣关键词:猪捷申病毒 猪流行性腹泻病毒N蛋白核仁定位信号对宿主细胞周期的影响 被引量:5 2013年 为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白(N)与宿主细胞相互作用,本研究根据前期已经鉴定的PEDV N蛋白核仁定位信号序列,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法扩增出核仁定位信号序列缺失的PEDV N基因(dN),并将其与真核表达载体pAc-GFP-C1连接,构建重组质粒pAc-GFP-dN。将pAc-GFP-dN转染于Vero E6细胞中,利用激光共聚焦显微镜分析重组质粒pAc-GFP-dN表达蛋白的定位情况,并利用流式细胞仪检测转染细胞的周期变化。实验结果表明:与完整的N蛋白相比,缺失核仁定位信号的N蛋白不能定位于细胞核仁,同时丧失了使宿主细胞周期在G2/M期停滞的能力,从而揭示了N蛋白核仁定位信号对宿主细胞具有重要的影响。 刘随新 石达 陈建飞 张鑫 时洪艳 刘孝珍 张莎 王璐 冯力关键词:猪流行性腹泻病毒 核衣壳蛋白 流式细胞术 猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定 被引量:1 2014年 为了更系统的研究病毒在猪肠道内侵入及致病的分子机制,本试验以猪小肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC)为模型,应用RNeasy Min Kit从猪IEC中提取细胞总RNA,反转录后,利用SMART技术合成双链cDNA(ds-cDNA),通过同源重组的方法构建猪IEC酵母双杂交cDNA文库。结果显示,文库的滴度为8.4×108 CFU/mL,插入的ds-cDNA片段大小为0.5~2.0kb,平均长度约为1.1kb,文库重组率为100%。此文库为筛选与猪腹泻病毒相互作用的宿主蛋白及进一步阐明病毒的致病机制奠定了基础,为研制有效的药物或疫苗提供了依据。 徐天 石达 陈建飞 谷凤丽 时洪艳 张鑫 冯力关键词:酵母双杂交 CDNA文库 Vero细胞nucleolin和fibrillarin基因的克隆及序列分析 2012年 为克隆及分析Vero细胞的nucleolin和fibrillarin基因,本研究根据人类的相关基因设计两对引物,从Vero E6细胞中扩增nucleolin和fibrillarin基因。测序结果显示nucleolin基因序列长度为2 139 bp,编码712个氨基酸;fibrillarin基因序列长度为969 bp,编码322个氨基酸。与GenBank中登录的人类相应序列相似性高达97%,处于同一进化分支,表明该基因具有种属特异性并且保守性很高;同时利用软件对nucleolin和fibrillarin预测蛋白进行了生物信息学分析,从而为研究冠状病毒核蛋白与核仁蛋白相互作用奠定了基础。 石达 陈建飞 时红艳 王洪峰 张鑫 刘孝珍 张莎 刘随心 王璐 冯力关键词:核仁素 纤维蛋白 克隆 猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03株免疫原性的研究 被引量:2 2012年 为确定猪捷申病毒(Porcine Teschovirus,PTV)Swine/CH/IMH/03株免疫原性,本研究将该PTV分离株灭活后分别与氢氧化铝佐剂和Montanide ISA 50V2佐剂混合,制成油佐剂疫苗,并采用不同免疫程序接种实验猪后对病毒抗体进行检测。抗体检测结果表明:PTV Swine/CH/IMH/03分离株能够诱导实验动物产生较高抗体水平,并显著高于对照组;与氢氧化铝佐剂混合制成的佐剂疫苗免疫效果优于Montanide ISA 50V2佐剂;而且一次免疫组与二次免疫组没有明显差异。通过PTV Swine/CH/IMH/03株免疫原性的研究,为后续猪捷申病的预防工作提供技术支持。 冯力 时洪艳 童光志 刘娣关键词:猪捷申病毒 免疫原性研究