国家自然科学基金(31172322)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 猪狂犬病的确证
- ＜正＞目的了解广东省某一猪场发生狂犬病猪只的感染状况。方法采集疑似狂犬病发病猪的大脑、小脑以及海马回,制成切片,用姬姆沙染色,在光学显微镜下检测狂犬病病毒包涵体。用抗狂犬病病毒N蛋白荧光抗体染色,在荧光显微镜下检测特异荧...
- 刘祥茵邓衔柏施赫赫范小龙张莹郑声陶郭霄峰
- 关键词：狂犬病包涵体
- 文献传递
- 狂犬病病毒HEP-Flury M基因重排后在小鼠神经母细胞瘤细胞中的表型分析被引量：1
- 2020年
- 【目的】探究狂犬病病毒HEP-Flury M基因重排对基因转录和蛋白表达的影响,揭示病毒在小鼠神经母细胞瘤(NA)细胞中的表型变化与M基因重排的相关性。【方法】通过荧光定量PCR、Western blot以及病毒在NA细胞中的生长和扩散试验,对亲本毒株rHEP-Flury和M基因重排毒株M2、M4在NA细胞中的基因转录、表达、生长和扩散进行比较。【结果】狂犬病病毒结构基因的转录和表达主要受病毒基因组RNA合成的影响,但是在一个完整转录过程中单个结构基因的转录比例与其所在位置相关,M基因重排病毒的Leader RNA(LeRNA)和L mRNA的转录比例显著高于亲本毒株rHEP-Flury。M基因重排病毒在NA细胞中的生长和扩散都劣于亲本毒株rHEPFlury。【结论】狂犬病病毒亲本毒株rHEP-Flury具有狂犬病病毒原始的基因组顺序,在NA细胞中的生长和扩散都明显优于M基因重排病毒。结构基因在基因组中的位置主要决定其在一次转录过程中的转录比例,进而影响病毒在NA细胞中的生长和扩散。
- 梅明珠杨先锋龙腾张琼赵静田钦彭娇娇罗均姜贺林颖仪林志雄郭霄峰
- 关键词：狂犬病病毒基质蛋白神经母细胞瘤细胞
- 狂犬病病毒G蛋白的过表达及对病毒的抑制
- 2018年
- 【目的】探究G蛋白在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)复制中的作用,以揭示携带双G基因的重组RABV的Hep-dG与亲代毒株rHep-Flury在神经母细胞瘤(NA)细胞中滴度差异的原因,为RABV致病机制的研究奠定基础。【方法】通过病毒吸附、入侵、荧光定量PCR、Western-blot以及中和抗体阻断等试验,检测G蛋白过表达对IFN-β以及相关因子转录的影响。【结果】Hep-dG感染能显著上调NA细胞中IFN-βmRNA的表达,激活了下游因子STAT1的表达与磷酸化,在较低的感染复数(MOI=0.01)下,Hep-dG感染后24 h即可显著促进IFN-β基因的表达,36 h达到最高水平(P<0.001)。该病毒进入细胞后,产生了更多的病毒Leader RNA和RIG-I mRNA,且与IFN-βmRNA的表达高度一致。抗体阻断IFN-β后,Hep-dG在NA细胞中的病毒滴度显著上升(P<0.01),约为阻断前的7.9倍,且与亲代毒株rHep-Flury无显著差异。与阴性对照比较,5μg的pH-G质粒转染能刺激IFN-β的转录(P<0.05),表明真核表达RABV G蛋白能在一定程度上刺激IFN-β的转录。【结论】本研究初步揭示了G蛋白激活先天性免疫应答的原因和作用。RABV G蛋白的过表达,通过促进病毒Leader RNA的转录,激活了RIG-I介导的IFN-β通路,进而抑制了Hep-dG在NA细胞的繁殖。G蛋白的过表达也对干扰素通路起到一定的作用。
- 阳佑天张琼张博越刘文俊罗永文赵静梅明珠张莹罗均郭霄峰
- 关键词：狂犬病病毒G蛋白Β干扰素病毒滴度
- 猪源狂犬病病毒N和G基因的序列分析
- 2012年
- 通过对新分离的猪源狂犬病病毒GD-SH01株N基因和G基因进行序列分析,解析它们与其他狂犬病病毒N和G基因的差异.提取猪源狂犬病病毒GD-SH01株的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增N基因和G基因,并与T载体连接,克隆至大肠埃希菌DH5α.测序后与国内外部分毒株的N基因和G基因进行核苷酸序列和氨基酸序列比对.与其他毒株相比,N基因核苷酸相似性为84.3%～98.0%;氨基酸相似性为92.5%～99.3%.G基因核苷酸相似性为80.4%～98.2%;氨基酸相似性为87.8%～99.6%.
- 张莹刘祥茵罗永文杨先峰黄永亮施赫赫傅秋玲阳佑天吴晓薇郭霄峰
- 关键词：狂犬病病毒
- 猪狂犬病的确证被引量：1
- 2012年
- 目的了解广东省一猪场发生狂犬病猪只的感染状况。方法采集疑似狂犬病发病猪的大脑、小脑以及海马回,制成切片,用姬姆沙染色,在光学显微镜下检测狂犬病病毒包涵体。用抗狂犬病病毒N蛋白荧光抗体染色,在荧光显微镜下检测特异荧光。用蛋白酶K处理病料,抽提核酸,以狂犬病病毒N基因特异引物作RT-PCR检测狂犬病病毒特异性核酸。将病料接种小白鼠接毒,观察小鼠的发病。结果病理学切片检测病猪脑海马神经细胞中有包涵体;脑组织印片经特异性抗狂犬病病毒核蛋白(NP)单克隆抗体免疫荧光染色后,荧光显微镜下可见大量的针尖状绿色荧光颗粒;狂犬病病毒NP特异性目的基因RT-PCR得到与预期结果大小一致的扩增产物;小白鼠接毒试验,3日龄以内乳鼠接毒后出现特异性的神经症状。结论该猪场病死猪检测狂犬病病毒感染阳性,确定猪群中发生狂犬病。
- 刘祥茵邓衔柏施赫赫范小龙张莹郑声陶郭霄峰
- 关键词：狂犬病包涵体
