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聚乙烯亚胺包裹的磁性纳米颗粒用于基因载体的实验研究被引量：7: 2005年; 目的:探讨聚乙烯亚胺(PEI)包裹的氧化铁磁性纳米颗粒中polyMAG1000用于体外基因转导的可行性。方法:用扫描电镜观测polyMAG1000的粒径;观察在不同的酸碱度下,将polyMAG1000与pEGFP N1质粒DNA按不同的比例(v∶w)混合后,观察polyMAG1000结合和保护DNA的能力,并进行体外转染实验。结果:polyMAG1000的直径约100nm,颗粒均匀,无论在酸性、中性和碱性条件下均能与质粒DNA稳定地结合;polyMAG1000能把pEGFP质粒DNA导入肿瘤细胞中,进而表达绿色荧光蛋白。当polyMAG1000与DNA比例为1∶1时转染效率最高;加与不加磁场转染效率比较,差异具有显著性意义。结论:PEI包裹的氧化铁磁性纳米颗粒可用于体外基因转导,把PEI等基因导入载体与磁性纳米颗粒结合而形成的新型基因导入载体具有良好的应用前景。; 韦卫中吴华徐春芳; 关键词：磁性纳米颗粒聚乙烯亚胺非病毒载体基因治疗

维甲酸对人乳腺癌细胞NIS基因表达和摄碘功能的影响: 2005年; 目的探讨9-顺-维甲酸(9-cis—RA)对人乳腺癌细胞钠/碘同向转运体(NIS)基因功能表达的影响。方法应用9-cis—RA和全反式维甲酸(ATRA)分别在不同浓度下对雌激素受体(ER) 阳性的乳腺癌细胞(MCF-7)和ER阴性的乳腺癌细胞(MDA-MB-231)进行干预,于不同时间点提取细胞总RNA,通过半定量逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测乳腺癌细胞NIS mRNA表达水平的变化;在体外培养条件下研究RA刺激后乳腺癌细胞对放射性碘的摄取情况。结果9-cis-RA处理后, MCF-7细胞NIS mRNA表达增强,呈浓度依赖性(F=114.17,P<0.001),在10-6mol/L浓度下NIS mRNA的表达随时间上调,16 h时达到最高,是对照组(0 h)的8.2倍(q=8.32,P<0.01),此后随时间逐渐下调;且9-cis-RA(10-6mol/L,24 h)的作用强于ATRA(t=6.572,P<0.01)。MDA-MB-231 基础状态下几乎无NIS表达,9-cis-RA刺激后可上调其表达(t=20.195,P<0.001),但表达量(NIS/ β-actin)远低于MCF-7(t=10.395,P<0.001)。碘摄取实验表明,10-6mol/L 9-cis-RA干预12 h后。MCF-17细胞摄碘开始增加,干预24 h时碘摄取达最大,是基础状态下的3.2倍.其摄碘能力可被KClO4抑制。结论9-cis—RA能明显增强ER阳性的MCF-7细胞NIS基因的表达及摄碘功能。; 何小文吴华; 关键词：基因表达维甲酸聚合酶链反应人乳腺癌细胞 NIS基因半定量逆转录-聚合酶链反应

放射性核素报告基因显像被引量：3: 2003年; 随着分子影像学的发展,可以利用放射性核素报告基因显像技术探测基因治疗中治疗基因表达情况。目前主要有两种报告基因系统———编码细胞内的酶和细胞表面受体的报告基因。; 张振蔚张雪梅吴华; 关键词：放射性核素显像报告基因

磁性纳米颗粒介导基因治疗乳腺癌实验研究被引量：6: 2005年; 目的探讨新型基因载体PEI包裹的磁性纳米颗粒polyMAG-1000介导TRAIL基因治疗乳腺癌的可行性,观察TRAIL基因转染乳腺癌细胞后的治疗作用。方法以polyMAG-1000为基因载体,联结TRAIL质粒DNA后转染人乳腺癌细胞株MCF-7细胞,用Tunel法检测细胞的凋亡,用流式细胞仪检测细胞的凋亡率,以空载体作为阴性对照;脂质体转染TRAIL基因作阳性对照。结果Tunel法可见MCF-7细胞经polyMAG-1000和脂质体转染TRAIL基因后均可见发生凋亡的细胞,流式细胞仪检测polyMAG-1000转染的细胞凋亡率为25.11%±2.85%,脂质体转染的细胞凋亡率为18.31%±2.44%(P<0.05)。结论TRAIL对乳腺癌细胞MCF-7具有凋亡效应,PEI包裹的磁性纳米颗粒介导的TRAIL基因治疗在肿瘤的基因治疗中具有应用前景。; 韦卫中吴华李芳; 关键词：氧化铁磁性纳米颗粒 TRAIL 乳腺癌基因治疗

多肽的放射性标记被引量：2: 2004年; 朱小华吴华; 关键词：放射性标记多肽显像剂肿瘤放射性核素标记血栓

阳离子聚合物纳米基因载体的研究进展被引量：6: 2004年; 由于阳离子聚合物等非病毒纳米基因导入载体安全、低毒、装载容量大、制备容易等优点已引起越来越多的关注 ,对提高其转导效率的研究也较多。该文作者对PLL和PEI等阳离子聚合物纳米基因载体的研究进展进行了综述。; 韦卫中吴华; 关键词：基因治疗非病毒载体阳离子聚合物纳米

磁导向^(131)I-Sc-7269-DMN治疗荷人肝癌裸鼠的实验研究被引量：5: 2004年; 目的　研究磁导向1 31 I标记抗血管内皮生长因子单克隆抗体Sc 72 6 9和葡聚糖磁性纳米颗粒复合物 (Sc 72 6 9 DMN)在荷人肝癌裸鼠模型体内的生物学分布、抑瘤效能及安全性。方法　于 18只荷人肝癌裸鼠肿瘤部位体表持续设置磁场 ,分别自瘤体内均匀注射 (n =9)或尾静脉注射 (n =9) 1 31 I Sc 72 6 9 DMN约 0 74MBq ,进行生物学分布研究。另 2 5只平均分为 5组 ,其中 4组瘤内分别注射1 31 I Sc 72 6 9 DMN、1 31 I Sc 72 6 9、1 31 I DMN及1 31 I(放射性浓度均为 74MBq ml) ,其中1 31 I Sc 72 6 9 DMN组和1 31 I DMN组裸鼠肿瘤部位体表持续设置磁场 ;余 1组作为对照组注射生理盐水。治疗后观察肿瘤生长延迟时间 (TGD)及体重变化 ,并计算抑制率和检测外周血白细胞计数。结果　给药后 4、2 4和 4 8h局部瘤内给药组肿瘤组织百分注射剂量率 (%ID g)分别为 10 4 0 6、10 1 5 8和 10 0 96 ;静脉给药组分别为85 33、89 6 7和 90 0 0 ,两组间差异有显著性 (P <0 0 5 )。1 31 I Sc 72 6 9 DMN组TGD为 (13 3± 3 3)d ,肿瘤抑制率为 89 0 % ,与其他组相比差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;该组治疗后外周血白细胞虽有下降[(390 0± 30 9) μl],但与对照组相比差异无显著性。结论　1 31 I Sc 72 6 9; 陈璟韩德艳谢长生吴华; 关键词：^131I DMN 人肝癌裸鼠生物学分布

肝癌特异性结合肽的筛选及鉴定: 2004年; 目的　探讨利用噬菌体随机肽库筛选肝癌细胞特异性结合多肽或肝癌细胞优势结合多肽的可行性。方法　①利用噬菌体随机十二肽库 ,对人肝癌细胞系HepG2和人正常肝细胞系L0 2进行 4轮差异筛选、富集 ,获得与肝癌细胞亲和的噬菌体克隆。②用酶联免疫吸附测定 (ELISA)法测定其与肝癌细胞、正常肝细胞的亲和力 ,进一步筛选出高度亲和肝癌细胞的特异性阳性噬菌体克隆。比较其与其他肿瘤细胞的亲和力。③提取阳性噬菌体DNA并进行DNA序列测定 ,获得与肝癌细胞亲和的多肽序列。④用免疫荧光共聚焦成像进一步确定展示阳性多肽序列的噬菌体与肝癌细胞的结合部位。⑤根据筛选的多肽序列合成十六肽WH16 ,利用竞争抑制实验鉴定其与肝癌细胞的结合。结果　筛选及ELISA结果示得到与肝癌细胞特异性结合并内化入肝癌细胞的噬菌体克隆 ,测序结果示 5 6 6 7%的被检噬菌体展示相同的多肽序列FLLEPHLMDTSM ,推测FLEP是肝癌细胞特异性结合肽的基序。免疫荧光共聚焦成像进一步确定展示序列FLLEPHLMDTSM的噬菌体与肝癌细胞特异性结合并内化入细胞内。竞争抑制实验示WH16能有效抑制展示序列FLLEPHLMDTSM的噬菌体克隆与肝癌细胞的结合。结论　利用噬菌体随机肽库获得能与肝癌细胞特异性结合的多肽序列FLLE PHLMDTSM 。; 朱小华吴华; 关键词：肝癌细胞噬菌体特异性结合肽阳性克隆 DNA序列

^(125)I-WH16制备及与HepG2人肝癌细胞结合特性研究被引量：2: 2004年; 目的　研究高比活度亲肝癌肽1 2 5I WH16的制备及其与HepG2人肝癌细胞的体外结合特性。方法　采用Iodogen法碘标记WH16 ,用高效液相色谱法分离纯化并鉴定标记产物。①将1 2 5I WH16与HepG2细胞进行体外细胞量 (或保温时间 ) 计数实验 ,以得到较佳的体外结合条件 ;②比较HepG2与正常肝细胞 (L0 2 )的1 2 5I WH16平均结合计数 ,以检验其特异性 ;③1 2 5I WH16与HepG2细胞进行体外饱和结合实验 ,研究其亲和特性。结果　①1 2 5I标记率 5 0 % ,1 2 5I WH16比活度 8 2 1× 10 1 5Bq mol,放化纯 95 % ,放射性浓度 6 6 4× 10 9Bq/L ,- 2 0℃保存 2 4h后放化纯仍为 95 %。②1 2 5I WH16与HepG2细胞结合具有细胞依赖性 ,较佳保温时间为 3h;相同条件下 ,1 2 5I WH16与HepG2细胞、L0 2细胞之间平均特异性结合计数有明显差异 ;1 2 5I WH16与HepG2细胞结合具有可饱和性 ,Scatchard作图提示HepG2细胞仅含一种WH16受体 ,Kd 为 (1 4 2± 0 2 8)nmol L ,Bmax为 (12 15± 0 6 3)pmol L ;Hill系数为1 0 3,接近于 1。结论　WH16的放射性标记物在肝癌显像及生物靶向治疗中可能有潜在的应用前景。; 罗莎贾兵朱小华杜进王凡吴华; 关键词：^125I标记人肝癌细胞 IODOGEN法碘标记放射性标记

Magnetic Iron Oxide Nanoparticles Mediated Gene Therapy for Breast Cancer-An In Vitro Study被引量：1: 2006年; The aim of this study was to evaluate the feasibility and efficacy of using TRAIL gene to treat breast cancer mediated with a novel carrier - magnetic iron oxide nanoparticles （poly- MAG-1000） coated with PEI. The magnetic iron oxide nanoparticles were used as gene carrier to transfect TRAIL gene into MCF-7 cells. The polyMAG-1000 without TRAIL gene was transfected into the tumor cells as negative control. TRAIL gene transfection with liposome as carrier served as positive control. The apoptosis of cells was detected with TUNEL method. The apoptosis ratio of tumor cells was measured with flow cytometry （FCM）. It was found that the apoptosis occurred in the tumor cells after transfection of TRAIL gene mediated by both polyMAG-1000 and liposome. The apoptosis ratio in the group with polyMAG-1000 as gene cartier was （25.11±2.85） %, whereas it was （5.06±1.05） % in the control group with polyMAG-1000 （P〈0.01）. The apoptosis ratio was as low as （18.31 ±2.44） % in the group with liposome as gene carrier （P〈0.05, as compared with the group with polyMAG- 1000 as gene carrier）. It is suggested that TRAIL gene may induce apoptosis in MCF-7 breast cancer cells. The magnetic iron oxide nanoparticles coated with PEI may be a potential gene carrier with high transfection efficacy for cancer gene therapy..; 韦卫中徐春芳吴华; 关键词：NANOPARTICLES TRAIL

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国家自然科学基金(30171062)

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