国家自然科学基金(30171051)
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
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- 人THANK基因转染人肝癌细胞及生物学特性
- 2005年
- [目的]将人THANK基因转染入人肝癌细胞SMMU-7721中稳定表达,检测转染后细胞的生物学特性变化。[方法]将由pMD18-T-THANK质粒上获得的THANK全长cDNA克隆到真核表达载体pcDNA3.1中;用脂质体法将pcDNA3-THANK导入人肝癌细胞株SMMU-7721中,G418筛选克隆,再以RT-PCR及Westernblot检测THANK的表达,流式细胞仪及细胞毒杀伤实验分析转染后细胞的生物学特性变化。[结果]THANK在7721细胞中的表达可抑制7721细胞的生长,使肿瘤细胞的生长停滞于S期,且可在体外诱导强烈的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应,人外周血单个核细胞(PBMC)对THANK-7721细胞的杀伤活性明显增强。THANK的转染与IFN-γ协同可增强7721细胞的凋亡比例。[结论]THANK基因的转染改变了7721细胞的生物特性,在体外诱导PBMC的CTL反应,有可能用于肝癌的免疫治疗。
- 吴东沈锋吴孟超
- 关键词：THANK多聚酶链反应逆转录流式细胞术
- 腺病毒介导的THANK基因在SMMC-7721细胞中的表达
- 2005年
- 目的:构建THANK腺病毒载体,观察腺病毒感染后THANK在SMMC-7721细胞中的表达情况。方法:把THANK基因克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrackCMV中,与腺病毒骨架质粒pAdEasy1共转染大肠杆菌BJ5183,获得腺病毒重组质粒,再将获取的腺病毒重组质粒转染入293细胞进行包装,获取THANK重组腺病毒,以不同感染复数(MOI)腺病毒感染SMMC-7721细胞,观察腺病毒对SMMC7721细胞的感染情况。结果:成功地构建了THANK腺病毒,该腺病毒可高效介导THANK在SMMC-7721细胞中表达,基因转染后第5天,THANK表达高于35ng/ml,且随时间延长增加。结论:腺病毒可诱导THANK基因在SMMC-7721细胞中高表达。
- 吴东沈锋吴孟超
- 关键词：THANK基因表达肝肿瘤腺病毒
- THANK重组腺病毒肝癌基因治疗的实验研究
- 2006年
- 目的在构建 THANK 腺病毒载体的基础上,在裸鼠体内观察 THANK 基因转移对SMMC-7721细胞作用。方法用 THANK 重组腺病毒,感染 SMMC-7721细胞,获取高表达THANK 基因的7721细胞,将不同7721细胞接种裸鼠,观察 THANK 基因转移后7721细胞的成瘤性变化,包括肿瘤生长的大小、速率,肿瘤重量、裸鼠生存期变化以技成瘤后肿瘤组织及脾脏的微观结构变化。结果 THANK 在7721细胞中的表达可抑制肿瘤细胞的生长,激发机体的抗肿瘤免疫,抑制初次和再次接种的亲代7721细胞的生长,降低了7721细胞的成瘤性。光镜和电镜观察均可发现THANK 的转染使得7721细胞的坏死和凋亡比例有所增高,提示 THANK 在裸鼠体内可能通过某种机制增强了7721细胞的凋亡比例。结论 THANK 在裸鼠体内可诱发有效的抗肿瘤免疫。
- 吴东沈锋吴孟超
- 关键词：THANK基因转移腺病毒
- LIGHT基因的克隆及其可溶性表达被引量：1
- 2002年
- 目的 克隆LIGHT基因 ,构建含有人LIGHT基因的表达载体 ,诱导其在大肠杆菌中可溶性表达 ,并对表达的LIGHT蛋白的生物学活性进行检测。方法 从人的外周血单个核细胞中克隆LIGHT全长cDNA及其胞外区片段 ,并将其胞外区片段亚克隆至原核表达载体pET 11a中 ,筛选阳性重组质粒pET LIGHT ,以IPTG诱导其可溶性表达 ,并以SDS PAGE和Westernblot检测进行分析。表达的蛋白初步纯化后 ,进行生物学活性分析。结果 RT PCR扩增出了LIGHT全长 72 3bp的cDNA。SDS PAGE和Westernblot分析证实重组pET LIGHT质粒可表达出相对分子质量 (Mr)为 19× 10 3的蛋白。可溶性LIGHT重组蛋白可共刺激T细胞的增殖及诱导IFN γ的产生。结论 本实验成功地将LIGHT胞外区片段在大肠杆菌中进行表达 ,表达的蛋白具有生物学功能 。
- 吴东沈锋娄永华焦炳华吴孟超
- 关键词：基因克隆基因表达生物学
- 沉默Racl基因对LoVo细胞侵袭移动的影响
- 2009年
- 目的探讨Racl基因沉默后对结直肠癌LoVo细胞侵袭移动的影响。方法逆转录PCR和Westcrn印迹法检测RaclmRNA和Racl蛋白在结直肠癌细胞株LoVo、SW480、SW620、SW1116、HT29中的表达。通过转染Racl—shRNA观察Racl基因沉默后LoVo细胞骨架的变化，再转染RaclN17和Racl—L61，观察Racl基因缺失和表达增强后对LoVo细胞侵袭移动的影响。结果Racl mRNA和蛋白住结直肠癌细胞株中均高表达。Racl基因沉默后LoVo细胞交联的纤维状肌动蛋白（F—actin）网和细胞膜伪足形成减少。细胞迁移实验显示，Racl—shRNA组细胞迁移数为（75±5）个、Racl—N17组为（93±5）个、Racl-L61组为（267±7）个、对照组为（214±8）个，Racl—shRNA、Racl—N17组与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．01），Racl-L61组与对照组比较差异亦有统计学意义（P〈0．05）。在细胞侵袭试验中，Racl-shRNA组细胞迁移数为（35±5）个、Racl-N17为（42±5）个、Racl-L61为（86±7）个、对照组为（73±6）个，Racl—shRNA、Racl—N17组与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．01），Racl-L61组与对照组比较差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论RNA干扰沉默Racl基因后影响了LoVo细胞肌动蛋白细胞骨架的形成，同时抑制了LoVo细胞移动和侵袭特性。
- 赵世义张振书孙嫣赖桌胜南清振李康
- 关键词：RHO因子细胞骨架肿瘤浸润
- THANK—一种新的免疫调节因子被引量：3
- 2002年
- THANK是 1999年发现的肿瘤坏死因子超家族成员。最早发现其可诱导肿瘤细胞凋亡 ;之后则发现THANK和TNF家族的另一成员APRIL与它们的两个受体TACI和BCMA形成了双配体 双受体系统 ,共同调节B细胞的活化、增生与成熟 ;而TACI表达于活化的T细胞及可诱导NFAT的表达 ,表明THANK不仅与B细胞的功能有关 ,且参与了T细胞介导的免疫调节。THANK对B细胞的作用大大地加深了人们对B细胞生长、发育调控的理解。本文对THANK基因的研究进展进行了综述。
- 吴东
- 关键词：生物学功能肿瘤坏死因子肿瘤细胞凋亡免疫调节因子
