国家自然科学基金(30400214)
- 作品数：7 被引量：11H指数：2
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- hBAFF-R-Fc融合分子的构建、表达与鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的构建人hBAFF-R-Fc基因的真核表达质粒,并表达有生物学活性的人hBAFF-R-Fc融合蛋白。方法化学合成法合成人hBAFF-R膜外区cDNA编码基因,酶切测序证实后,与hIgG4.Fc/Leu235Glu突变体一起导入线性化pSec/WG真核表达载体,阳性重组体酶切测序证实后,采用脂质体法稳定转染CHO细胞,用夹心ELISA检测其表达;收集的蛋白经蛋白A亲和纯化,以SDS-PAGE与Western blot进行鉴定并检测hBAFF-R-Fc的活性。结果测序证实构建的hBAFF-R膜外区与hBAFF-R-Fc cDNA阅读框完整,ELISA证实转染hBAFF-R-Fc基因的CHO细胞培养上清中含有hBAFF-R-Fc蛋白,SDS-PAGE与Western blot鉴定证实其为hBAFF-R-Fc蛋白。hBAFF-R-Fc蛋白对活化后的B细胞有抑制增殖的作用。结论成功构建了人hBAFF-R-Fc真核表达载体,并使有生物学活性的hBAFF-R-Fc蛋白在CHO细胞上获得了稳定表达。为进一步研究该蛋白在狼疮性肾炎等自身免疫性疾病治疗中的作用奠定了基础。
- 丁涵露吴雄飞何娅妮倪兵
- 关键词：BAFF-R真核表达
- BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠B淋巴细胞的影响
- 2010年
- 目的研究BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠B淋巴细胞的影响。方法体外观察BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BAFF刺激的B细胞活性的影响;100μl的PBS、200μg人IgG4和100μg BAFF-R-IgG4mut融合蛋白分别经腹腔注射10周龄雄性BXSB狼疮鼠,每周注射3次,共注射5周。分别检测狼疮鼠外周血BAFF水平、外周血和脾脏组织中B220+CD5-、CD3+CD4-、CD8+T和CD3+、CD4+、CD8-T细胞的表达以及狼疮鼠的存活率。结果BAFF-R-IgG4mut融合蛋白组外周血BAFF以及外周血、脾脏组织中B220+CD5-细胞较对照组下降(P<0.01),实验组狼疮鼠存活率较对照组延长(P<0.01)。结论BAFF-R-IgG4mut融合蛋白可抑制BXSB狼疮鼠B细胞活性。
- 丁涵露王莉倪兵高闻达钟雪梅
- 关键词：狼疮性肾炎B细胞刺激因子B淋巴细胞
- B细胞刺激因子受体融合蛋白改善BXSB狼疮鼠病变的研究被引量：1
- 2010年
- 目的观察腹腔注射B细胞刺激因子受体融合蛋白（BAFF—R—IgG4mut）对狼疮鼠病变的影响。方法100μl的磷酸盐缓冲液（PBS）、200μg人IgG4和100μgBAFF—R—IgG4mut融合蛋白分别经腹腔注入10周龄BXSB狼疮鼠，每周注射3次，共注射5周。分别检测狼疮鼠外周血BAFF水平、外周血和脾脏组织中B220^＋CD5^-B细胞、CD3^＋CD4^-CD8^＋T细胞和CD3^＋CD4^＋CD8^-T细胞的表达，检测尿蛋白、IgG型抗双链DNA（dsDNA）抗体、肾脏病理损伤指标和狼疮鼠的存活率。以方差分析和，检验进行数据统计。结果实验组9、10、12、15周龄鼠外周血BAFF水平分别是（2．0±1．6）ng/ml、（4．1±2．2）ng／ml、（3．7±1．9）ng／ml、（3．9±1．8）ng／ml，较对照组下降（P〈0．01）；外周血、脾脏组织中B220^＋CD5^-细胞比率较对照组下降（P〈0．01），蛋白尿、IgG型抗dsDNA抗体产生减少，IgG在肾组织沉积及肾组织病理损伤较对照组明显减轻（P〈0．01），存活率较对照组延长（P〈0．01）。结论BAFF—R～IgG4mut融合蛋白改善BXSB狼疮鼠病变。
- 丁涵露王莉倪兵高闻达钟雪梅
- 关键词：狼疮肾炎BXSB狼疮鼠
- 重组腺病毒程序性死亡配体-1治疗BXSB狼疮鼠的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的观察增强程序性死亡-1（PD-1）信号通路的功能对BXSB狼疮鼠病变的影响。方法重组腺病毒程序性死亡配体-1（AdPD—L1，2．2×10^9PFU／ml×0．5ml，一次量）尾静脉注射8周龄雄性BXSB狼疮鼠。结果AdPD—L1经尾静脉注入BXSB狼疮鼠体内后，PD—L1可有效转染80％近端肾小管上皮细胞；12周时AdPD—L1组狼疮鼠的蛋白尿发生率为20％，对照组为100％，AdPD—L1组IgG型dsD—NA抗体光密度值为0．38，肾小球IgG荧光表达强度1．16，均较对照组明显下降（P〈0．01），肾组织病理损伤也减轻。结论增强PD-1信号通路的功能可减轻BXSB狼疮鼠的病变。
- 丁涵露吴雄飞何娅妮吴军
- 关键词：狼疮肾炎程序性死亡配体-1BXSB狼疮鼠
- IFN-γ对培养的人近端肾小管上皮细胞表达PD-L1的影响被引量：2
- 2005年
- 目的 了解培养的人近端肾小管上皮细胞株HK2细胞程序性死亡配体 (PD L1)的表达及其影响因素。方法 RT PCR、流式细胞计数和免疫细胞化学染色法。结果 正常的HK2细胞表达少量PD L1mRNA和蛋白,2 0 0ng mLIFN γ刺激2 4h后其表达升高,并持续至72h ;不同质量浓度的IFN γ(5 0、10 0、2 0 0ng mL)刺激HK2细胞2 4h后,PD L1表达呈剂量依赖性升高,与对照组比较差异显著(P <0 .0 1)。结论 IFN γ刺激培养的HK2细胞表达PD L1升高,推测HK2细胞上表达的PD L1有可能和T细胞上的受体PD 1结合,影响肾小管间质的发病。
- 丁涵露吴雄飞
- 关键词：人近端肾小管上皮细胞IFN-Γ程序性死亡配体-1
- 重组AdPD-L1腺病毒的构建表达及鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的 构建程序性死亡配体 1(PD L1)重组腺病毒载体,以期用于体内实验研究。方法 酶切含有小鼠全长PD L1cDNA的pcDNA3 .1 PD L1质粒,亚克隆到穿梭质粒pAdtrack CMV上,在BJ5 183细胞内和AdEasy 1同源重组,筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确,线性化后脂质体法转染2 93细胞进行包装、扩增,利用报告基因EGFP对病毒滴度进行监测,氯化铯密度梯度离心纯化病毒。PCR、Westernblot鉴定AdPD L1感染2 93细胞后PD L1的表达,同时进行野生型腺病毒的检测和PD L1在混合淋巴细胞反应中的作用。结果 测序、酶切证实PD L1基因重组腺病毒载体构建成功。RT PCR、Westernblot检测AdPD L1感染的2 93细胞,均有PD L1的表达。无野生型腺病毒的产生,PD L1能显著抑制小鼠混合淋巴增殖反应。结论 成功构建了含小鼠PD L1基因的重组腺病毒载体,这种膜结合性的PD L1与其相应受体结合后,对T细胞可起到负性调控的作用,为下一步体内基因治疗实验奠定了基础。
- 丁涵露吴雄飞高闻达贺伟峰张晓容吴军
- 关键词：PD-L1腺病毒基因治疗
- PD-L1及其受体PD-1在急性肾移植排斥患者肾组织中的表达及意义被引量：4
- 2005年
- 目的 了解急性肾移植排斥患者肾组织中PD L1、PD 1的表达及PD L1与PD 1、肾小管 间质病理损害程度的关系。方法 二步法免疫组化观察正常肾和急性肾移植排斥患者肾组织PD L1、PD 1的表达,以及PD L1阳性强度与小管 间质PD 1阳性细胞数、小管 间质病理损害程度的关系。结果 急性肾移植排斥肾组织表达PD L1、PD 1较正常组增多、增强;其小管PD L1阳性强度与肾间质PD 1阳性细胞数呈正相关,与小管 间质病理损害程度呈负相关。结论 PD L1 PD 1信号通路在急性肾移植排斥肾小管 间质病理损害中起重要作用。
- 丁涵露吴雄飞
- 关键词：PD-L1PD-1
