国家杰出青年科学基金(20625619)
- 作品数：46 被引量：289H指数：11
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程医药卫生更多>>
- 聚乙烯醇脱氢酶的提取及检测
- 2009年
- 为解决结合在细胞上的可溶性蛋白聚乙烯醇脱氢酶(PVADH)的检测困难问题,从提取及检测两方面对该酶进行研究,并对检测方法进行改进。结果表明,非离子型表面活性剂Triton X-100对可溶性蛋白PVADH的提取效果优于离子型表面活性剂烷基苯磺酸钠(LAS)和溴化十六烷基吡啶(CPB),酶活力比LAS和CPB提取后所得酶活力分别提高246.5%和831.3%。而非离子型表面活性剂中,Triton X-100与Tween 80相比,所得最高酶活提高了101.4%。Triton X-100浓度和提取时间对测定有明显影响,以1%Triton X-100提取18 h为宜,最高比酶活达14.9U/g。在PVADH检测体系中,加入电子受体启动反应比加入酶液与底物启动反应可使酶活性分别提高60.6%和126.5%;酶液与吡咯喹啉醌(PQQ)预先保温对检测该酶活性是十分重要的,可使酶活性提高59.1%。在检测系统中加入的KCN、CaC l2和PQQ的适宜浓度分别为1.0 mmol/L、0.5 mmol/L和2μmol/L,可使测定酶活分别提高37.1%、38.7%和214.0%。
- 李敏廖鲜艳堵国成陈坚
- 关键词：脱氢酶聚乙烯醇表面活性剂
- 表面活性剂对大肠杆菌胞外生产α-环糊精葡萄糖基转移酶的影响被引量：12
- 2009年
- 研究了不同浓度表面活性剂Tween-80,Triton X-100,SDS对大肠杆菌生产α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGT酶)的影响。结果表明:发酵初始添加Tween-80和Triton X-100的最适浓度分别为2%,0.5%,最终胞外酶活分别达2.03U/ml和4.92U/ml,相对于未添加表面活性剂时提高4.6倍和12.67倍,且改变添加时间不能提高酶的产量;发酵36h添加0.02%SDS对α-CGT酶产量促进最大,最终胞外酶活达5.31U/ml,较对照组提高12.75倍。表面活性剂对α-CGT酶生产的促进作用可能是由大肠杆菌细胞内外膜渗透性增加所致,使细胞周质空间中α-CGT酶能更加快速地渗透到胞外。
- 丁闰蓉李兆丰李金根陆辰霞吴敬陈坚
- 关键词：PAENIBACILLUS环糊精葡萄糖基转移酶表面活性剂
- 过量表达NADH氧化酶加速光滑球拟酵母合成丙酮酸被引量：6
- 2008年
- 【目的】进一步提高光滑球拟酵母(Torulopsis glabrata)发酵生产丙酮酸的生产强度。【方法】将来源于乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)中编码形成水的NADH氧化酶noxE基因过量表达于丙酮酸工业生产菌株T.glabrata CCTCCM202019中,获得了一株NADH氧化酶活性为34.8U/mg蛋白的重组菌T.glabrata-PDnoxE。【结果】与出发菌株T.glabrata CCTCC M202019相比,细胞浓度、葡萄糖消耗速率和丙酮酸生产强度分别提高了168%、44.9%和12%,发酵进行到36h葡萄糖消耗完毕。补加50g/L葡萄糖继续发酵20h,则使丙酮酸浓度提高到67.2g/L。葡萄糖消耗速度和丙酮酸生产强度增加的原因在于形成水的NADH氧化酶过量表达,导致NADH和ATP含量分别降低了18.1%和15.8%,而NAD+增加了11.1%。【结论】增加细胞内NAD+含量能有效地提高酵母细胞葡萄糖的代谢速度及目标代谢产物的生产强度。
- 董志姚李秀芬刘立明堵国成陈坚
- 关键词：光滑球拟酵母NADH
- 重组角质酶的发酵制备及其对涤纶纤维的表面改性被引量：7
- 2011年
- 对大肠杆菌表达嗜热子囊菌Thermobifida fusca角质酶的摇瓶诱导条件及3 L发酵罐扩大培养进行了研究,并探讨了角质酶对涤纶纤维的改性作用。结果表明,在摇瓶培养中,采用工业级TB培养基,用2 g/L乳糖诱导,菌体培养至对数生长前期添加0.5%甘氨酸,角质酶产量可达到128 U/mL。在3 L发酵罐扩大培养中,补料培养生物量(OD600)最大达到35,角质酶酶活最高达506 U/mL,是迄今国内外报道细菌来源角质酶的最高水平。紫外分光光度法分析初步表明涤纶纤维经角质酶水解产生了对苯二甲酸类物质。角质酶处理后纤维的染色性和润湿性明显高于对照样,且角质酶与Triton X-100联合作用,能显著提高涤纶的亲水性。为国内首次采用细菌来源角质酶进行涤纶纤维改性的报道。
- 张瑶陈晟吴丹何淼朱孔亮陈坚吴敬
- 关键词：乳糖发酵涤纶表面改性
- 化学添加剂提高重组α-环糊精葡萄糖基转移酶酶制剂稳定性被引量：4
- 2011年
- 通过向重组α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGT酶)液中添加化学添加剂以提高其热稳定性及贮存稳定性。在不同温度下研究了添加剂对酶液的贮存稳定性影响,并用圆二色谱(CD)研究了CGT酶在近紫外区和远紫外区蛋白质结构与热稳定性的变化关系。当单独加入各种添加剂在50℃水浴1 h和室温放置108 d后,发现含有20%甘油的酶液稳定性最好,与未加任何添加剂的对照酶液相比仍有91%和50%的酶活,对照酶液在50℃水浴1 h后仅有小于10%的活性,室温放置108 d后已经没有酶活。明胶、CaCl2和PEG400也有一定的保护效果。将4种保护剂分别以最佳浓度组合叠加添加到CGT酶发酵液中40℃贮存45 d,CGT酶的残酶活几乎不变,维持在100%左右。通过变温圆二色光谱分析α-CGT酶α-螺旋和β-折叠变化,发现了保护剂可以明显降低高温条件下酶的变性程度,有利于维持其二级结构及天然三维构象,使酶在高温时保持较高的酶活。化学添加剂可以明显提高α-CGT酶酶制剂的稳定性,为CGT酶的工业化应用提供稳定剂复配的方法,同时蛋白质的变温圆二色谱分析也为其他蛋白酶热稳定性研究提供了理论依据。
- 郑贤良吴丹李兆丰陈坚吴敬
- 关键词：Α-环糊精葡萄糖基转移酶化学添加剂热稳定性圆二色光谱
- 生物技术法生产维生素C的研究进展被引量：20
- 2008年
- 维生素C是一种重要的有机酸,广泛应用于药物、食品、饮料、化妆品和饲料等中。相对于"莱氏法"而言,生物技术法生产维生素C具有低成本、高品质等优势,其主要包括一步发酵工艺和二步发酵工艺,而后者又包括以葡萄糖为底物的串联工艺和以D-山梨醇为底物的工艺。在对比各种生产方法的基础上,鉴于以D-山梨醇为底物的发酵工艺是唯一用于工业生产的生产方法,重点介绍了发酵法生产维生素C在发酵条件优化和一步发酵工程菌株的构建等方面的研究进展,并给出了生物技术法将来可能的发展方向。
- 张静刘立明刘杰秦苏东堵国成陈坚
- 关键词：维生素C2-酮基-L-古龙酸发酵生产
- 光滑球拟酵母中α-酮戊二酸脱氢酶系生理作用解析被引量：1
- 2009年
- 【目的】研究α-酮戊二酸脱氢酶系在光滑球拟酵母碳代谢流、能量代谢和氨基酸代谢中的生理作用。【方法】通过敲除光滑球拟酵母中编码α-酮戊二酸脱氢酶系中E1酶的基因kgd1,构建α-酮戊二酸脱氢酶活性缺失菌株T.glabratakgd1::kan,并考察KGDH缺失引起TCA循环关键酶活性,碳代谢流量以及胞内氨基酸和能荷水平等方面的变化。【结果】光滑球拟酵母中α-酮戊二酸脱氢酶活性的缺失导致:(1)细胞启动乙醛酸途径,通过形成TCA-乙醛酸循环实现TCA循环的正常代谢;(2)胞内NADH/NAD+水平下降33.7%,ATP/ADP水平下降31.8%,而与NADH代谢相关的丙酮酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶的活性分别提高58.1%、33.3%和32.5%;(3)胞内丙酮酸含量下降50.1%,而胞内琥珀酸、苹果酸和α-酮戊二酸含量则分别增加了172.7%、66.1%和41.1%;(4)丙酮酸族氨基酸含量下降29.3%,而胞内谷氨酸族氨基酸和天冬氨酸族氨基酸含量则提高了34.7%和26.8%。【结论】上述研究结果表明,α-酮戊二酸脱氢酶系在微生物细胞中心碳代谢、能量代谢和氨基酸代谢中发挥着重要作用。
- 张旦旦刘立明堵国成陈坚
- 关键词：光滑球拟酵母Α-酮戊二酸丙酮酸
- Paecilomyces sp. S152胞外漆酶的合成调控被引量：2
- 2010年
- 探索了不同碳氮源营养条件下,Paecilomyces sp.S152胞外漆酶的分泌情况,发现麦芽糖(20 g/L)、大豆蛋白胨(10 g/L)及酵母粉(1 g/L)最适于Paecilomyces sp.S152胞外漆酶的合成,发酵7～8 d后,漆酶酶活达到5064 U/L。研究发现Paecilomyces sp.S152漆酶在细胞内及细胞外均有分布,添加1.5 g/L的Tween 80可促进胞内漆酶的释放,提高胞外漆酶酶活,缩短发酵周期(6 d),生产强度提高至946 U/(L·d)。
- 刘志钰张东旭堵国成陈坚
- 关键词：拟青霉胞外漆酶营养条件同工酶
- 氨基酸强化Torulopsis glabrata发酵生产丙酮酸被引量：2
- 2008年
- 在维生素限量添加的条件下,研究了添加氨基酸对丙酮酸发酵的影响.在发酵初始添加0.8g/L谷氨酸、0.6g/L酪氨酸和0.2g/L甲硫氨酸使丙酮酸产量分别提高23.5%,16.4%和11.8%.动力学分析表明,添加以上3种原料提高丙酮酸生产性能的原因在于用于细胞生长的葡萄糖下降,显著提高了细胞对葡萄糖的产率系数(Yx/s)和丙酮酸对葡萄糖的产率系数(Yp/s).添加氨基酸导致胞内NADH/NAD+比下降,增加了胞内NAD+可用度,加强了糖酵解速度,从而提高了丙酮酸生产强度.
- 许庆龙许晓鹏刘立明史仲平堵国成陈坚
- 关键词：光滑球拟酵母氨基酸丙酮酸发酵
- 角质酶及其在纺织工业中的应用被引量：8
- 2010年
- 详细综述了国内外对角质酶的研究概况,包括角质酶的主要来源,角质酶基因的克隆与表达,以及关于角质酶的发酵研究。着重阐述了目前角质酶在棉纤维的生物精炼,羊毛的防毡缩整理,以及合成纤维的生物改性等方面的应用进展。另外,作为推动纺织工业清洁生产的关键酶制剂,对未来角质酶在纺织工业中的应用前景作了简要展望。
- 张瑶陈晟吴丹吴敬陈坚
- 关键词：角质纺织工业酶制剂
