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Notch3 siRNA增强结肠癌细胞对托泊替康的化疗敏感性被引量：1: 2009年; 目的:探讨下调Notch3表达是否可增强结肠癌SW620细胞对化疗药托泊替康(topotecan)的敏感性。方法:将Notch3 siRNA转染到SW620细胞中,Western blotting检测转染后SW620细胞中Notch3的表达水平。转染后不同时间加入托泊替康,MTT法检测SW620细胞的增殖;Hoechst33342染色和流式细胞仪检测SW620细胞的凋亡;Caspase-3活化试剂盒检测SW620细胞中caspase-3的活化。结果:Notch3 siRNA转染可明显抑制SW620细胞中Notch3蛋白的表达;托泊替康作用于Notch3 siRNA转染组细胞的IC50较对照Ctrl siRNA转染组显著降低(P<0.05);流式细胞仪检测显示沉默Notch3的表达可显著增强托泊替康诱导的结肠癌细胞凋亡(P<0.05)和caspase-3活化(P<0.05)。结论:siRNA沉默Notch3的表达可增强SW620细胞对托泊替康的化疗敏感性。; 姚军钱翠娟; 关键词：NOTCH3 托泊替康结肠肿瘤化疗敏感性

活化Notch1信号下调Wnt信号抑制结肠癌细胞增生被引量：10: 2009年; 目的构建重组反转录病毒载体pCLNRX-ICN,研究过度活化Notch1信号对人结肠癌细胞HT-29细胞增生的影响作用及机制。方法将人Notch1基因胞内区(ICN)克隆至反转录病毒载体pCLNRX中,与包装载体pCL-10A1共转染293细胞,制备重组病毒上清,检测病毒效价。MTT法检测稳定表达外源性ICN对细胞生长的影响,RT-PCR及Western Blot检测c-Myc、β-catenin表达水平。结果成功构建重组反转录病毒载体pCLNRX-ICN,通过共转染获得了具有较高效价的重组反转录病毒。通过表达外源性ICN而过度活化Notch1抑制HT-29的生长,并下调Wnt信号途径关键调控分子β-catenin的蛋白表达水平,但对β-catenin的mRNA水平未见明显影响。而且过度活化Notch1对c-Myc的蛋白及mRNA表达水平均无明显影响。结论过度活化Notch1信号部分通过下调Wnt信号而抑制HT-29的生长,且该作用不依赖c-Myc的抑制。; 钱翠娟姚军谭诗云; 关键词：人结肠癌细胞

重组pEGFP-C1-Smad4表达载体的构建及在SGC7901细胞中的表达被引量：2: 2009年; 目的:构建pEGFP-C1-Smad4表达载体,并观察其在人胃癌SGC7901细胞中的表达。方法:应用基因重组技术,构建增强绿色荧光蛋白与Smad4的融合表达载体,经限制性内切酶酶切鉴定和PCR分析,用基因转染技术将其转入人胃癌SGC7901细胞,荧光显微镜、Western blot检测其表达。结果:酶切鉴定和PCR分析证实重组质粒中插入的目的基因片段及载体DNA大小、方向和插入位点均正确,在转染的人胃癌SGC7901细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达,Western blot检测到Smad4在蛋白水平的表达。结论:成功构建真核表达质粒pEGFP-C1-Smad4,并在胃癌SGC7901细胞瞬时表达成功,为进一步研究Smad4在胃癌发生中的作用奠定基础。; 钱翠娟姚军张欣; 关键词：胃肿瘤 SMAD4

过表达NOTCH-1抑制TNFα诱导的胃癌BGC-823细胞增殖抑制及凋亡被引量：2: 2009年; 目的探讨过表达NOTCH-1对TNFα诱导的胃癌BGC-823细胞凋亡的调节作用。方法用包含NOTCH-1胞内段的反转录病毒载体转染BGC-823,G-418筛选后获得细胞克隆。TNFα作用于各组细胞后用MTT法、流式细胞术、W estern b lot及EMSA等检测细胞生长、凋亡、NOTCH-1表达、NF-κB及caspase-3活性。结果转染ICN的细胞中NOTCH-1及其靶基因HES-1表达强度明显强于对照组。经TNFα作用后,过表达NOTCH-1的胃癌细胞的细胞杀伤率、凋亡率显著低于对照组;过表达NOTCH-1能明显抑制TNFα诱导的caspase-3活化;然而,未发现过表达NOTCH-1对TNFα诱导的NF-κB活化有明显的影响。结论过表达NOTCH-1抑制TNFα诱导的BGC-823细胞增殖抑制与凋亡,可能通过非NF-κB依赖途径抑制caspase-3活化所致。; 姚军钱翠娟; 关键词：胃癌 NOTCH-1 CASPASE-3

下调Notch3对小鼠T淋巴细胞体外活化增殖及NF-κB的影响被引量：2: 2010年; 研究siRNA下调Notch3对小鼠T淋巴细胞体外增殖的影响,并初步探讨其免疫调节机制。从小鼠脾脏分离制备T淋巴细胞悬液;将化学合成的靶向Notch3基因的siRNA在Lipofectamine 2000介导下转染小鼠淋巴细胞;通过Westernblot检测各组细胞中Notch3蛋白水平的变化;以不同浓度的Notch3 siRNA作用于该小鼠T淋巴细胞模型,流式细胞术检测CD3^+T细胞早期活化标志CD69分子的表达;MTT检测Notch3-siRNA对小鼠淋巴细胞增殖的抑制作用;EMSA检测NF-κB活性。在淋巴细胞体外培养试验中,转染Notch3 siRNA可以明显降低小鼠淋巴细胞内Notch3的表达,下调Notch3可以显著抑制刀豆蛋白A(ConA)诱导的T细胞CD69的表达;同时下调Notch3对小鼠淋巴细胞的增殖有抑制作用;而且发现下调Notch3能明显抑制ConA诱导的NF-κB活化。实验结果提示,下调Notch3信号可通过抑制NF-κB活化对小鼠T淋巴细胞活化与增殖发挥抑制作用。; 姚军李烨佳钱翠娟; 关键词：小鼠T淋巴细胞 NOTCH3基因 SIRNA 排斥反应

Smad4过表达对人胃癌细胞增殖和NF-κB通路的影响: 2009年; 目的:构建pEGFP-C1-Smad4表达载体,观察Smad4过表达对人胃癌SGC7901细胞增殖的影响,探讨其与NF-κB的相关性。方法:构建增强绿色荧光蛋白(EGFP)与Smad4的融合表达载体,转染人胃癌SGC7901细胞,荧光显微镜观察转染后细胞EGFP的表达,Western blotting检测SGC7901-Smad4细胞中Smad4和NF-κB的表达,电泳迁移率变异分析(electro-phoretic mobility shif assay,EMSA)检测过表达Smad4对胃癌SGC7901细胞NF-κB活化的影响,MTT法检测过表达Smad4对SGC7901细胞增殖的影响。结果:在转染pEGFP-C1-Smad4的人胃癌SGC7901细胞(SGC7901-Smad4)中观察到EGFP的表达;Western blotting检测显示,SGC7901-Smad4细胞中Smad4过表达,并伴随核转录因子NF-κBp65的表达水平下调;EMSA检测显示Smad4过表达可下调NF-κB活化;MTT法显示过表达Smad4显著抑制SGC7901细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。结论:Smad4过表达显著抑制人胃癌细胞增殖,其机制可能与下调NF-κB信号通路有关。; 姚军钱翠娟; 关键词：胃癌 SMAD4 NF-ΚB

丹皮酚通过抑制NF-κB信号通路诱导Tca8113细胞凋亡被引量：3: 2009年; 目的研究丹皮酚对核因子κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制。方法将丹皮酚以不同浓度及不同时间作用于人舌鳞癌Tca8113细胞,应用MTT法观察不同浓度丹皮酚在不同作用时间下对Tca8113细胞增殖的抑制作用,Hoechst33342荧光染色及流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2,以及NF-κB信号通路组分中IκBα和p-IκBα的表达情况,并采用凝胶电泳迁移率检测(EMSA)对NF-κB活性进行测定。结果经丹皮酚作用后,Tca8113细胞生长受到明显抑制,并呈明显的时间、剂量依赖效应关系。丹皮酚有明显诱导Tca8113细胞凋亡的作用,WesternBlot以及EMSA检测结果显示,丹皮酚上调Tca8113细胞中Bax与IκBα的表达,下调Bcl-2的表达,并能下调IκBα磷酸化及NF-κB活性。结论丹皮酚能够抑制NF-κB信号转导通路,进而抑制Tca8113细胞的增殖并诱导其凋亡。; 姚军钱翠娟; 关键词：丹皮酚 NF-ΚB TCA8113细胞株细胞凋亡

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浙江省医药卫生科学研究基金(2008B204)