国家自然科学基金(31172272)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 卡尼鄂拉蜂锌转运蛋白-7相似蛋白(ZnT-7-like)的基因克隆、抗体制备及差异表达
- 2013年
- 【目的】本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂Apis mellifera carnica锌转运蛋白-7相似蛋白(zinc transporter 7-like,ZnT-7-like)基因,制备ZnT-7-like多克隆抗体,了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况。【方法】运用RT-PCR法从卡尼鄂拉蜂王浆腺总RNA中扩增ZnT-7-like基因,进行生物信息学分析,为避开跨膜结构的干扰,选择克隆其部分序列(273 bp)作为多肽免疫序列。将其亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,转入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达获得融合蛋白,然后将融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,分别用间接ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性,最后采用实时荧光定量RT-PCR以及Western blot技术检测该基因在不同日龄成虫王浆腺中的相对表达量。【结果】克隆得到卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因,大小为1 065 bp。SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达;制备的多克隆抗体效价高达1∶64 000,且具有很高的特异性。ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂5个日龄成虫中的转录情况存在较大差异,表现为3日龄成虫中的表达量极显著高于其他日龄(P<0.01),12日龄表达量最低,其他日龄间表达量两两差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);ZnT-7-like蛋白表达与转录水平基本一致。【结论】成功克隆了卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因,制备了兔抗蜂ZnT-7-like多克隆抗体,并在转录和翻译两个水平上测定了ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的相对表达量。这些结果为深入研究卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因的功能奠定了基础。
- 沈杰刘振国沈芳吉挺
- 关键词：王浆腺基因克隆抗体制备
- 卡尼鄂拉蜂工蜂咽下腺解剖形态学和超微结构研究被引量：1
- 2014年
- 为了分析卡尼鄂拉蜂(Apis mellifera carnica)工蜂咽下腺发育的不同阶段解剖形态和超微结构变化规律,探讨咽下腺在工蜂分泌王浆过程中的细胞学机制,运用扫描电镜和透射电镜方法比较分析5个不同日龄内勤蜂(3、6、9、12、16日龄)和3个不同阶段越冬蜂(越冬阶段、春繁阶段、淘汰阶段)工蜂小囊发育饱满程度和细胞超微结构。结果表明,3日龄工蜂咽下腺小囊发育尚未完全,而线粒体、内质网等细胞器已经出现;9日龄工蜂咽下腺小囊直径极显著大于其他日龄内勤蜂工蜂(P<0.01),发育最为饱满,内质网、核糖体、导管等细胞器成分也最为丰富;春繁阶段越冬蜂工蜂咽下腺小囊直径极显著大于其他阶段越冬蜂(P<0.01),与9日龄工蜂相比差异不显著(P>0.05),但细胞器数量较9日龄有所下降;淘汰阶段越冬蜂和16日龄工蜂咽下腺细胞出现崩解现象。说明卡蜂咽下腺小囊总体发育较为迟缓;伴随蜂王浆分泌,内勤蜂和越冬蜂咽下腺小囊发育均呈现"饱满—萎缩"的发育规律;多个细胞器参与蜂王浆的合成和分泌,细胞器丰富程度反映出工蜂泌浆能力的高低。
- 吉挺沈芳刘振国
- 关键词：咽下腺扫描电镜透射电镜
