国家自然科学基金(30570867)
- 作品数：9 被引量：18H指数：2
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- 多囊蛋白1氨基段融合蛋白对肾小球系膜细胞细胞外基质及其降解基因表达的影响被引量：1
- 2007年
- 目的研究多囊蛋白-1氨基段（PC-INF）融合蛋白对大鼠肾小球系膜细胞（RMC）Ⅳ型胶原及其降解调控基因表达的影响。方法用实时荧光定量RT-PCR法检测PC-1NF融合蛋白对RMCIV型胶原和细胞外基质（ECM）降解调控基因基质金属蛋白酶、金属蛋白酶1组织抑制剂（MMP-2、TIMP-1）表达的作用。ELISA方法检测培养的细胞上清液中Ⅳ型胶原含量的变化。免疫细胞化学方法观察融合蛋白对细胞核因子c-jun和c-fos表达的影响。Western印迹检测融合蛋白对蛋白激酶C（PKC）-α信号转导通路的影响。结果4mg／LPC-1NF融合蛋白作用48h后，RMCⅣ型胶原mRNA从（103±16）降至（82±11）拷贝，106GAPDH，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），培养上清液中的IV型胶原含量也明显降低；MMP2mRNA从（1150±90）升至（2770±）拷贝，106GAPDH，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01），而TIMP-1mRNA从（5530±480）降至（3040±370）拷贝，106GAPDH，与对照组差异有统计学意义（P〈0．01）。DAB染色显示，融合蛋白作用后，RMC的c-jun和c-fos表达受到明显抑制。RMC经不同浓度PC-1NF融合蛋白作用48h后，随着融合蛋白浓度升高。PKC-α的表达逐渐减弱。结论PC-1NF融合蛋白可通过上调促进ECM降解的MMP-2和抑制ECM降解的TIMP-1之间的比值而促进Ⅳ型胶原降解；还可能通过PKC-α信号转导通路，抑制c-ju．和c-fos表达，从而抑制RMC的增殖和ECM的合成。
- 关天俊梅长林王文靖付莉莉赵海丹蔡厚安
- 关键词：常染色体显性多囊肾病细胞外基质系膜细胞
- 塞来昔布延缓Han：SPRD大鼠肾衰竭进展的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的通过观察塞来昔布（CXB）对常染色体显性多囊肾病（ADPKD）动物模型Han：SPRD大鼠的作用，从而研究CXB延缓肾衰竭进展的机制。方法选取3周龄杂合（cy／＋）Han：SPRD大鼠共57只，随机分成3组（每组19只）进行实验。按照CXB在饲料中的含量分为对照组（0mg·kg^-1·d^-1）、小剂量组（3mg·kg^-1·d^-1）和大剂量组（10mg·kg^-1·d^-1）。在大鼠4、6、8、10、12和16周龄时测定血清BUN、Scr。ELISA法检测16周龄大鼠血浆6-酮前列腺素F1α（6-keto—PGF-1α）和血栓烷B2（TXB2）的含量。实时荧光定量PCR法检测大鼠肾组织肿瘤坏死因子α（TNF—α）的mRNA水平。免疫荧光共聚焦显微镜检测TNF—α和环氧化酶2（COX-2）的蛋白表达。Western印迹检测16周龄大鼠TNF—α的蛋白表达量。结果对照组BUN、Scr持续升高，分别于6、8周龄时即大于正常范围；至16周龄时，BUN为（26．56±9．19）mmol／L，Scr为（95．08±67．54）μmol／L；CXB小剂量组和大剂量组均能减缓BUN、Scr上升速度，减小其上升幅度。16周龄大鼠CXB小剂量组血浆中6-keto—PGF-α和TXB2[（1831．68±233．31）ng／L和（156．62±9．29）ng／L1和大剂量组两者的含量[（1148．57±105.80）ng／L和（157．87±10．16）ng／L]均显著低于对照组[（2792．26±830．48）ng／L和（248．88±93．72）ng／L]（均P〈0．05）。实时荧光定量PCR结果示，16周龄大鼠肾组织小剂量组和大剂量组TNF—α mRNA水平均显著低于对照组（均P〈0．05）。免疫荧光共聚焦显微镜显示，对照组TNF-α和COX-2在小管间质区高表达，小剂量组和大剂量组荧光强度显著减弱。与对照组比较，CXB小剂量组和大剂量组大鼠肾组织蛋白表达量显著减少，差异有统计学意义（均P〈0．05）。结论CXB可能通过抑制COX-2的活性，阻止膜磷脂释放花生四烯酸代谢产物6-keto—PGF-1α和TXB2，减少炎性因子TNF-α的含量，正�
- 许涛王素霞叶朝阳梅长林
- 关键词：多囊肾常染色体显性6-酮前列腺素F1Α血栓烷B2塞来昔布
- 罗格列酮对多囊肾囊肿衬里上皮细胞p38促分裂原活化蛋白激酶信号通路的影响被引量：2
- 2009年
- 目的探讨罗格列酮对多囊肾囊肿衬里上皮细胞p38促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的作用。方法分别用罗格列酮（RGZ，10μmol／L）、过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）抑制剂GW9662（10μmol／L）、RGZ（10μmol／L）＋GW9662（10μmol／L）、p38MAPK特异性抑制剂SB203580（10txmol／L）、SB203580（10μmol／L）＋RGZ（10μmol／L）处理体外培养的多囊肾囊肿衬里上皮细胞（PKD细胞）2h后，再用表皮生长因子（EGF）刺激不同时间，另设置空白对照组和单独EGF刺激组。采用Western印迹方法检测p38MAPK、磷酸化p38MAPK（p-p38）、增殖细胞核抗原（PCNA）表达；RT—PCR检测p38mRNA表达；免疫细胞化学检测c—fns和c-jun的表达。结果（1）与空白对照组相比，EGF显著上调p—p38、PCNA、c—fos和c—jun的表达（P〈0．01）。（2）与EGF单独刺激相比，RGZ显著降低p38活化和基因表达（均P〈0．01）。RGZ组、SB203580＋RGZ组p-p38、PCNA、c—fos、c—jun表达明显下调（P〈0．01），两组间差异无统计学意义。（3）与RGZ组相比，RGZ＋GW9662组部分阻断RGZ的下调作用（P〈0．05）。结论罗格列酮抑制多囊。肾囊肿衬里上皮细胞增殖的作用机制可能与其降低p38MAPK活性，继而抑制PCNA、c—fos及c-jun表达有关。这种抑制作用是部分非PPARγ依赖的。
- 贾洁爽梅长林付莉莉戴兵胡惠民
- 关键词：P38丝裂原活化蛋白激酶类多囊肾常染色体显性表皮生长因子罗格列酮
- AnnexinⅡ及其与人类疾病研究进展
- 2007年
- Annexins蛋白家族是一组钙离子（Ca^2＋）介导的磷脂结合蛋白，各成员在结构上表现为同源相似性。该豸谳的成员之一AnnexinⅡ在生物膜结构域的建立或稳定、胞膜运输、形成离子通道、DNA合成及细胞增殖等方面起重要作用，并且细胞外的AnnexinⅡ还作为受体，参与纤溶、细胞间粘附、配体介导的细胞信号转导和病毒感染等，AnnexinⅡ的异常表达参与人类多种疾病。现将AnnexinⅡ的结构、功能及其与人类疾病的关系综述如下。
- 刘亚伟戴兵梅长林
- 关键词：人类疾病磷脂结合蛋白细胞信号转导DNA合成
- 塞来昔布通过抑制COX-2活性抑制Han：SPRD大鼠肾囊肿生长被引量：2
- 2009年
- 目的:观察塞来昔布(celecoxib,CXB)对常染色体显性遗传性多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD)模型Han:SPRD大鼠肾囊肿生长的作用,探讨其可能的作用机制。方法:3周龄杂合(cy/+)Han:SPRD大鼠随机分成3组(n=19):小剂量(3mg·kg-1.d-1)、大剂量(10mg·kg-1.d-1)CXB作用组及空白对照组。大鼠饲养至16周龄,称取体质量(TBW)及双肾质量(2K),计算2K/TBW;取肾组织行H-E染色及特殊染色,观察肾间质炎细胞浸润程度,测定囊肿指数、纤维化指数;采用免疫荧光共聚焦扫描法检测肾组织环氧化酶(COX)-2、增殖细胞核抗原(PCNA)共染的荧光斑表达丰度,采用Western印迹法检测肾组织COX-2、PCNA蛋白表达量。结果:小剂量CXB作用组大鼠2K/TBW低于空白对照组,差异有统计学意义[(1.10±0.009)%vs(1.33±0.02)%,P<0.05]。与空白对照组相比,小剂量、大剂量CXB作用组大鼠肾间质炎细胞浸润程度评分减轻[(2.6±0.26)、(2.8±0.31)vs(3.7±0.33),P<0.05],肾囊肿指数[(42.9±6.56)、(47.1±7.28)vs(64.8±6.71)]、纤维化指数[(11.2±2.63)、(10.1±3.30)vs(16.3±4.16)]明显降低(P<0.05)。小剂量CXB作用组大鼠肾组织COX-2、PCNA共染的荧光斑强度较空白对照组明显减弱,差异具有统计学意义(P<0.05);与空白对照组相比,小剂量、大剂量CXB作用组大鼠肾组织COX-2[(0.326±0.011)、(0.409±0.008)vs(0.814±0.012),P<0.05]、PCNA表达量明显降低[(0.763±0.051)、(0.925±0.042)vs(0.988±0.031),P<0.05]。结论:3、10mg·kg-1.d-1塞来昔布可能通过抑制COX-2活性,减轻炎细胞浸润而发挥抑制Han:SPRD大鼠肾囊肿生长的作用。
- 许涛王素霞叶朝阳梅长林
- 关键词：塞来昔布环氧化酶2常染色体显性多囊肾囊肿
- 塞来昔布对Han：SPRD大鼠肾细胞外基质重塑的影响
- 2010年
- 目的研究塞来昔布（CXB）对Han：SPRD大鼠肾细胞外基质（ECM）重塑的影响，探讨其抑制多囊肾肾间质纤维化的作用机制。方法选取杂合（cy／＋）交配后第4代雄性、3周龄、体质量（68．54-16．6）g的Han：SPRD大鼠共57只，随机分成对照组（CXB：0mg·kg^-1·d^-1）、CXB小剂量组（CBX：3mg·kg^-1·d^-1）、CXB大剂量组（CBX：10mg·kg^-1·d^-1），每组19只。另选19只SD大鼠作为正常对照。饲料中加入CXB喂食13周后，处死动物。倒置显微镜下分析肾组织纤维化指数；实时荧光定量PCR检测肾组织胶原Ⅳ（COLⅣ）、基质金属蛋白酶（MMP）2、金属蛋白酶2组织抑制剂（TIMP）和转化生长因子（TGF）B1mRNA的表达；免疫荧光共聚焦扫描法检测COLIV、MMP-2、TIMP-2、TGF-β1与PCNA共染的蛋白丰度；蛋白免疫印迹法检测TGF-81的表达。结果与对照组相比，小剂量组和大剂量组均能显著减少肾囊肿指数（42．90±6．56和47．10±7．28比64．80±62．71，均P〈0．05）、纤维化指数（11．20±2．63和10．10±3．30比16．30＋4．16，均P〈0．05）和间质炎性细胞的浸润（2．60±0．26和2．80±0．31比3．70±0．33，均P〈0．05）。小剂量组和大剂量组COLⅣ、TIMP-2和TGF．B1mRNA的表达量显著低于对照组（均P〈O．05），而MMP-2mRNA的表达量显著高于对照组（均P〈0．05）。小剂量组和大剂量组COLlV荧光强度较对照组显著减弱，差异有统计学意义（20．30±5．11比61．40±4．51，P〈0．01；27．50±6．73比61．40±4．51，P〈0．05）。小剂量组和大剂量组MMP．2／TIMP-2比值较对照组增高，差异有统计学意义（4．88＋1．52和3．63±1．67比0．35±0．13，均P〈0．05）。小剂量组和大剂量组TGF—β1蛋白表达比对照组均显著减少。结论塞来昔布可能通过下调TGF-β1、增加MMP-2／TIMP-2比值、促进胶原Ⅳ的降解来抑制肾小管间质的纤维化。
- 许涛王素霞叶朝阳梅长林
- 关键词：多囊肾常染色体显性细胞外基质塞来昔布
- 多囊蛋白1氨基段融合蛋白对大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响
- 2009年
- 常染色体显性多囊肾病（ADPKD）是最常见的遗传性肾病之一，85％-90％ADPKD的发生是由多囊蛋白1基因的编码产物多囊蛋白1（PC—1）的结构与功能异常所致。既往研究发现，稳定过表达人PKD1全长cDNA的犬远端肾小管上皮细胞（MDCK细胞）的生长率与凋亡率均降低。在前期工作中，我们成功制备了PC-1氨基段（PC-1NF）较为特征性的LRR—WSC区融合蛋门，并发现PC-1NF融合蛋白能抑制大鼠肾小球系膜细胞（RMC）增殖和细胞外基质合成。
- 关天俊梅长林赵海丹付莉莉王文靖邹祝英
- 关键词：融合蛋白系膜细胞凋亡氨基常染色体显性多囊肾病细胞外基质合成
- 2型糖尿病动物模型KK-Ay小鼠糖尿病肾病的鉴定被引量：9
- 2008年
- 目的研究2型糖尿病KK-Ay小鼠糖尿病肾病(DN)的特点和应用价值。方法选择雄性KK-Ay小鼠和C57BL/6 J小鼠各30只,每两周代谢笼收集24 h尿液及随意尿测尿微量白蛋白,眶后静脉丛采血测空腹血胰岛素、糖化血红蛋白、血糖、胆固醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐、白蛋白。8、12、20周龄时两组分别处死10只小鼠取肾脏行病理检查。结果不同周龄KK-Ay小鼠尿微量白蛋白、血胰岛素、糖化血红蛋白、血糖、胆固醇、甘油三酯均比同周龄C57BL/6 J小鼠高(P<0.05),且随周龄增加而进展,8周龄表现为典型2型糖尿病,12周龄进入早期DN,20周龄肾脏病理表现为特征性DN改变,但未见肾功能下降。结论KK-Ay小鼠是研究DN早期病变的理想模型。
- 董哲毅华参高翔华振浩吉程程熊锡山胡惠民梅长林
- 关键词：KK-AY小鼠糖尿病非胰岛素依赖型糖尿病肾病病理学
- 霉酚酸酯与雷帕霉素对多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖和凋亡影响的比较被引量：4
- 2008年
- 目的:观察霉酚酸酯(MMF)对多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖和凋亡的影响,并与雷帕霉素(RAPA)比较。方法:采用原代培养的人多囊肾囊肿衬里上皮细胞,用不同浓度MMF和RAPA分别作用48 h和72 h。MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期变化;AnnexinⅤ-FITC流式细胞术测定细胞凋亡率;透射电镜观察细胞超微结构改变。结果:MMF和RAPA均能抑制囊肿衬里上皮细胞增殖,呈明显的量效和时效关系。作用48 h后MMF使细胞阻滞在S期,RAPA使细胞阻滞在G0/G1期。MMF和RAPA均可诱导细胞凋亡,最大凋亡率分别为(5.53±0.27)%和(4.36±0.10)%;电镜下可见典型的凋亡改变。结论:MMF与RAPA相比同样能明显抑制囊肿衬里上皮细胞增殖,诱导细胞凋亡,但其对细胞增殖的抑制作用较RAPA弱。
- 张彤付莉莉梅长林
- 关键词：霉酚酸酯雷帕霉素多囊肾囊肿衬里上皮细胞细胞增殖
