武汉市青年科技晨光计划(20025001041)
- 作品数：7 被引量：88H指数：6
- 相关作者：肖少波陈焕春方六荣江云波张辉更多>>
- 相关机构：华中农业大学更多>>
- 发文基金：武汉市青年科技晨光计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 修饰的ORF5基因增强猪繁殖与呼吸综合征DNA疫苗的体液免疫被引量：11
- 2005年
- 为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV) ORF5基因 DNA疫苗的免疫效力 ,将通用型辅助性 T淋巴细胞表位 (PADRE)插入 ORF5的中和表位和覆盖表位间 ,获得修饰后的 ORF5基因 ORF5 M。在此基础上 ,进一步构建了ORF5 M的真核表达质粒 p CI- 5 2 M。间接免疫荧光证实体外表达后 ,免疫 BAL B/c小鼠 ,检测免疫后的 EL ISA抗体和中和抗体 ,并与未经修饰的 ORF5基因真核表达质粒 p CI- 5 2进行比较。结果表明 ,修饰后的 DNA疫苗 p CI- 5 2 M诱导的 EL ISA抗体和中和抗体均明显优于未经修饰的 DNA疫苗 p CI- 5 2 ,是一种具有良好开发前景的
- 江云波方六荣肖少波牛传双张辉陈焕春
- 关键词：ORF5基因ELISA抗体DNA疫苗体液免疫
- 修饰的ORF5基因增强猪繁殖与呼吸综合征DNA疫苗的免疫反应
- 为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因DNA疫苗的免疫效力,将通用型辅助性T淋巴细胞表位(PADRE)插入ORF5的中和表位和覆盖表位间,获得修饰后的ORF5基因ORF5M。在此基础上,进一步构建修饰型...
- 江云波方六荣肖少波牛传双张辉陈焕春
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因DNA疫苗
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5-M在大肠杆菌中的融合表达及其ELISA诊断方法的建立被引量：20
- 2005年
- 利用谷胱甘肽 S 转移酶 (GST)表达系统将猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)的ORF5和ORF6基因依序串联于GST下游 ,并在大肠杆菌中成功表达 ,获得了大小约为 6 0kD的融合蛋白GST GP5 M ,Westernblot检测证实表达的融合蛋白具有良好的生物学活性。以纯化的融合蛋白为抗原建立了猪繁殖与呼吸综合征P5 6 ELISA检测方法 ,与国外试剂盒IDEXX ELISA总符合率为 94 1% ,表明建立的P5 6 ELISA检测方法具有很好的特异性和敏感性。进一步分析了P5 6 ELISA检测结果与血清中和试验的相关性 ,经回归函数分析 ,发现在临床送检猪血清中的抗融合蛋白GP5 M抗体水平 (OD6 30nm)与中和抗体水平之间的相关性并不高。
- 江云波方六荣肖少波谢甜甜陈焕春
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA中和抗体
- 共表达与牛疱疹病毒1型VP22融合的猪繁殖与呼吸综合征病毒E及M蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其免疫原性观察被引量：8
- 2006年
- 为了研制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因工程疫苗,以伪狂犬病毒(PRV)gE基因缺失标志疫苗株TK-/gE-/LacZ+为病毒载体,通过同源重组,构建了共表达与牛疱疹病毒1型VP22(BHV-1 VP22)融合的PRRSV E及M蛋白的重组伪狂犬病毒(rPRV)TK-/gE-/VP22E+/VP22M+。经PCR、Southern blot、Westernblot证实rPRV构建正确,并能表达与BHV-1 VP22融合的PRRSV E及M蛋白。rPRV在IBRS-2、PK-15细胞中的增殖滴度与PRV亲本株相比无显著差异,表明外源基因的插入不影响rPRV增殖。用该rPRV免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠抗PRRSV中和抗体及脾淋巴细胞增殖反应,并与未融合VP22的单表达PRRSV E蛋白及共表达E及M蛋白的rPRV TK-/gE-/E+与TK-/gE-/E+/M+进行比较。结果显示TK-/gE-/VP22E+/VP22M+可诱导小鼠产生更好的体液与细胞免疫反应,BHV-1 VP22发挥了佐剂效应。本研究为研制安全、有效的猪繁殖与呼吸综合征-伪狂犬病二价基因工程疫苗奠定了基础。
- 赵武肖少波方六荣江云波宋云峰严琳余晓岚陈焕春
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF6基因重组伪狂犬病毒
- 基于西门利克森林病毒复制子的“自杀性”DNA疫苗载体的构建及其体外表达特性被引量：5
- 2005年
- 对西门利克森林病毒(SFV)复制子质粒型表达载体pSFV1进行改造,即在SFV非结构蛋白(nSPs) 上游插入依赖于RNA聚合酶Ⅱ的人巨细胞病毒立即早期启动子/增强子序列(hCMV IE Pro/Enh),同时在pS- FV1的多克隆位点下游插入SV40 poly(A)终止信号序列,获得可以完全在DNA水平上操作并具有自主复制功能的表达载体pSFV-DNA。为了进一步探讨改造载体的转染效率、表达能力以及是否能诱导细胞凋亡等特性, 将报告基因EGFP插入pSFV-DNA中亚基因组启动子下游,构建的重组表达质粒pSFV-EGFP转染BHK-21 细胞,转染后12 h即可观察到荧光,但转染效率明显低于直接由hCMV IE Pro/Enh驱动的EGFP真核表达质粒pEGFP-C1;提取转染后48 h的细胞基因组DNA,电泳发现pSFV-EGFP转染细胞均呈典型的DNA断裂(ladder),而pEGFP-C1转染细胞未观察到这种现象。上述结果表明:改造的载体不仅可完全在DNA水平上操作,而且能正确表达外源基因和诱导细胞凋亡,为开展各种病原微生物的“自杀性”DNA疫苗研究提供了良好的工具。
- 方六荣肖少波谢京国潘永飞姚林陈焕春
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5-M在大肠杆菌中的融合表达及其ELISA诊断方法的建立
- 利用谷胱苷肽-S-转移酶(GST)表达系统将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF5和ORF6基因依序串联于GST下游,并在大肠杆菌中成功表达,获得了大小约为60kD的融合蛋白GST-GP5-M,Western-b...
- 江云波方六荣肖少波谢甜甜陈焕春
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA中和抗体
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒YA株ORF5基因的克隆与序列分析被引量：14
- 2002年
- 以猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)YA株为材料 ,采用RT -PCR扩增其ORF5基因全长cDNA并进行序列测定和比较分析。结果YA株ORF5基因cDNA编码区长 6 0 3bp ,可编码 2 0 0个氨基酸残基。与欧洲型代表株LV株、美洲型代表株VR - 2 332株在氨基酸水平上的同源性分别为 5 8%和 90 % ,与国内首株分离株 (CH - 1a)的同源性高达 95 % ,推测YA株属于美洲型。根据YA株ORF5基因编码的氨基酸序列 ,与具有代表性的 12株美洲型毒株和 2株欧洲型毒株绘制进化系统树 ,结果也显示YA株与美洲型分离毒株的遗传关系较近 ,而与欧洲型毒株的遗传关系较远。进一步采用序列分析软件对推导的氨基酸进行比较分析 ,发现YA株ORF5编码的E蛋白存在 5个潜在的N -糖基化位点 ,6个抗原位点 ,其糖基化位点的数目及抗原位点的分布与其它美洲型毒株均存在一定程度的差异 ,但
- 方六荣牛传双肖少波方兵兵张辉陈焕春
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒克隆ORF5基因
- 表达猪繁殖与呼吸综合征病毒两种膜相关蛋白重组伪狂犬病毒的免疫反应和免疫保护研究
- 为了获得较好预防PRRSV的新型疫苗,本研究以致弱的伪狂犬病毒(PRV)为载体构建了表达PRRSV两种膜相关蛋白(GP5和M)的4种重组病毒,分别为rPRV-GP5(单独表达GP5)、rPRV-GP5m(单独表达修饰型G...
- 江云波方六荣肖少波张辉潘永飞罗锐李彬陈焕春
- 关键词：伪狂犬病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫反应免疫保护
- 文献传递
- 表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5的重组伪狂犬病毒TK^-/gG^-/GP5^+的构建及其生物学特性初步探讨被引量：36
- 2004年
- 以伪狂犬病毒基因缺失标志疫苗株TK-/gG-/LacZ+为亲本株,通过同源重组,构建了表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要免疫原性蛋白GP5的重组伪狂犬病毒TK-/gG-/GP5+。经PCR、Southern杂交、Westernblot证实构建正确,并能表达GP5。同时,对重组病毒在PK-15细胞中的增殖特性进行了检测,结果与亲本株相比,增殖滴度无显著性差异。将重组病毒免疫BALB/c小鼠,2次免疫后4周,50%(3/6)小鼠产生了低水平的GP5特异性ELISA抗体,但中和抗体均小于1:4。
- 方六荣肖少波江云波牛传双张辉陈焕春
- 关键词：伪狂犬病毒生物学特性
- 表达猪繁殖与呼吸综合征病毒修饰型GP5m蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其在小鼠的免疫反应被引量：10
- 2005年
- 猪伪狂犬病毒(PRV)是一种良好的兽用活病毒疫苗载体。但以PRV基因缺失疫苗株TK-gE-LacZ+为载体表达PRRSVGP5的重组病毒TK-gE-GP5+免疫实验动物后难以激发抗PRRSV的中和抗体。为了进一步增强这种重组病毒的免疫效力,用具有更好免疫原性的修饰的ORF5基因(ORF5m)代替天然ORF5基因,构建了表达PRRSV的修饰型GP5m蛋白的重组伪狂犬病毒TK-gE-GP5m+。经PCR、Southernblot、Westernblot证实构建正确,并能表达具有活性的GP5m蛋白。将TK-gE-GP5m+与TK-gE-GP5+分别免疫Balbc小鼠,结果TK-gE-GP5m+免疫小鼠不仅产生了较高水平的抗PRRSV的中和抗体(36只达到了1∶16),而且在诱导PRRSV特异性细胞免疫方面也显著优于TK-gE-GP5+,表明TK-gE-GP5m+是一种极有希望的PRRSV和PRV二价基因工程候选疫苗。
- 江云波方六荣肖少波张辉陈焕春
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒重组伪狂犬病毒
