国家自然科学基金(30570854)
- 作品数：13 被引量：56H指数：5
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- 血小板反应蛋白1的作用及与肾纤维化的关系被引量：1
- 2008年
- 血小板反应蛋白-1（TSP-1）是一种内源性血管生成抑制因子，能拮抗血管内皮生长网子（VEGF）的作用。TSP-1足TGF-β主要的内源性激活物，它通过激活TGF-β导致各种器官纤维化的发生。血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）是TSP—1很强的诱导剂，可上调TSP-1的表达，是促进肾间质纤维化另一重要因素。
- 陈芷珉郑法雷
- 关键词：肾疾病纤维变性
- 红细胞生成素对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮-间充质细胞转化的抑制作用及其与VEGF和TSP-1表达变化的关系
- 2012年
- 目的探讨红细胞生成素(EPO)对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾小管上皮-间充质细胞转化的作用,以及这种作用与肾组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)和血管形成抑制因子(TSP-1)表达变化的关系。方法将60只雄性Wistar大鼠分为假手术组(n=20)、UUO对照组(n=20)及EPO治疗组(n=20),分别于手术后第3、7、14、21天处死动物留取肾组织标本。应用免疫组化方法和Western blot方法测定肾组织中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、VEGF和TSP-1的表达程度。结果手术后第3、7天EPO治疗组较UUO对照组α-SMA表达明显减少(P<0.05),E-cadherin表达明显增加(P<0.05)。术后第3、7、14天,EPO治疗组TSP-1表达明显低于UUO对照组(P<0.05),而VEGF表达明显高于UUO对照组(P<0.05)。结论 EPO具有抑制UUO模型大鼠早期肾小管上皮-间充质细胞转化作用,该作用可能与EPO下调肾组织TSP-1表达,上调VEGF表达有关。
- 赵班吴华郑法雷
- 关键词：输尿管梗阻红细胞生成素血管内皮生长因子类
- 吗替麦考酚酯对大鼠肾小管上皮-间充质转化的作用及其机制探讨被引量：2
- 2008年
- 目的探讨吗替麦考酚酯（MMF）对腺嘌呤致慢性肾衰竭大鼠肾间质纤维化及肾小管上皮-间充质转化（EMT）的作用，以及该作用同肾组织血管内皮生长因子（VEGF）和分化抑制因子（Id2、Id3）变化的关系。方法雄性Wistar大鼠64只，分对照组（16只）、慢性肾衰竭组（24只，腺嘌呤125mg·kg^-1·d^-1灌胃）、MMF干预组（24只，腺嘌呤125mg·kg^-1·d^-1＋MMF15mg·kg^-1·d^-1灌胃）。分别于第2、4、6、8周处死动物，收集血、尿标本测血肌酐、尿蛋白。取肾组织，Masson染色作肾间质纤维化程度评分，免疫组化法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子β1（TGFβ1）表达，RT-PCR测肾组织TGFβ1、VEGF mRNA表达，Western blot测肾组织α-SMA、VEGF及Id2、Id3蛋白表达。结果（1）慢性肾衰竭组、MMF干预组血肌酐均显著高于对照组，但慢性。肾衰竭组、MMF干预组之间无显著差异；MMF干预组第6、8周时24h尿蛋白显著低于慢性肾衰竭组。（2）慢性肾衰竭组、MMF干预组在第6、8周肾间质纤维化程度显著重于对照组，但MMF干预组间质纤维化程度显著低于慢性肾衰竭组。（3）慢性肾衰竭组、MMF干预组在第6、8周肾组织α-SMA、TGFβ1表达较对照组明显增强，但MMF干预组肾组织α-SMA表达在第6、8周明显低于慢性肾衰竭组，TGFβ1表达在第2、4、6周亦显著低于慢性肾衰竭组。（4）慢性肾衰竭组第8周肾组织VEGF蛋白表达低于对照组，MMF干预组。肾组织VEGF表达第6、8周显著高于慢性肾衰竭组。（5）MMF干预组肾组织Id2、Id3蛋白表达高于慢性肾衰竭组，在第4、6周差异显著。结论MMF具有减轻慢性肾衰竭大鼠肾间质纤维化、抑制肾小管上皮细胞EMT的作用，该作用可能与MMF下调。肾组织TGFβ1表达及上调VEGF、Id2、Id3表达有关，其确切机制需进一步探讨。
- 何春梅郑法雷刘燕萍
- 关键词：霉酚酸上皮-间充质转化血管内皮生长因子分化抑制因子
- 血管内皮生长因子抑制肾小管上皮间充质转化及其与结缔组织生长因子和PI3K-Akt信号通路的关系
- 2009年
- 目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）对转化生长因子β1（TGF—β1）诱导的肾小管上皮间充质转化（EMT）的作用，及其与结缔组织生长因子（CTGF）、P13K—Akt信号通路的关系。方法（1）将体外培养的HK2细胞分为正常对照组、TGF-β1（5μg／L，下同）组、VEGF组（100μg／L，下同）、TGF—β1＋VEGF组。HK2细胞体外培养48h，用免疫组化双染方法检测肾小管上皮细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E钙黏蛋白的表达。（2）将体外培养的HK2细胞分为正常对照组、TGF-β1组、VEGF组、TGF—β1＋VEGF组、PI3K—Akt信号通路阻断剂LY294002组（25txmol／L，下同）、TGF-β1＋LY294002组、VEGF＋LY294002组、TGF-β1＋VEGF＋LY294002组。HK2细胞体外培养48h，用Western印迹和RTPCR方法检测α-SMA和CTGF的表达；用ELISA方法检测培养上清中纤连蛋白（FN）和Ⅰ型胶原（ColⅠ）的表达。结果免疫组化结果显示，TGF—β1组α-SMA表达比正常对照组增强，而E钙黏蛋白表达减弱；TGF-β1＋VEGF组-αSMA表达比TGF—β1组显著减弱，而E钙黏蛋白表达增强。TGF—β1组α—SMA、CTGF蛋白和mRNA及FN、ColⅠ表达比正常对照组显著增强（均P〈0．05）；TGF-β1＋VEGF组α-SMA、CTGF蛋F1和mRNA及FN、ColI表达比TGF—β1组显著减弱（均P〈0．05）；TGF-β1＋VEGF＋LY294002组α-SMA、CTGF蛋白和mRNA及FN、ColI表达比TGF—β1＋VEGF组显著增强（均P〈0．05）。结论VEGF能抑制TGF—β1诱导的体外培养的HK2细胞发生EMT，其机制可能与VEGF下调HK2细胞CTGF表达及减少细胞外FN、ColⅠ合成有关。VEGF的这种作用可能部分通过PI3K-Akt信号转导通路实现，其确切机制有待进一步研究。
- 连耀国何春梅郑法雷
- 关键词：血管内皮生长因子类转化生长因子Β1上皮细胞结缔组织生长因子上皮间充质转化
- 红细胞生成素对肾小管上皮-间充质细胞转化的抑制作用及其与VEGF表达变化的关系被引量：1
- 2010年
- 目的探讨红细胞生成素(rHuEPO)对人肾小管上皮细胞(HKC)上皮-间充质细胞转化(EMT)的作用及其与该细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达变化的关系。方法体外培养HKC,以未处理的HKC为阴性对照,以8ng/ml的转化生长因子-β1(TGF-β1)处理的HKC为阳性对照,以不同浓度(0.1、1.0、10、50、100IU/ml)的rHuEPO与8ng/ml的TGF-β1共同处理HKC,或在不同时间(-24、0、12、24、36h)用同一浓度rHuEPO(100IU/ml)对8ng/ml的TGF-β1处理的HKC进行干预。应用RT-PCR方法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和VEGFmRNA转录水平,应用免疫印迹方法检测α-SMA、E钙黏蛋白以及VEGF的蛋白表达水平。结果rHuEPO以剂量和时间依赖的方式抑制TGF-β1诱导的HKCα-SMAmRNA和蛋白的表达(P<0.05或P<0.01),保护性上调TGF-β1抑制的HKC细胞E钙黏蛋白的表达(P<0.05或P<0.01);同时上调TGF-β1抑制的HKC细胞VEGFmRNA和蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论rHuEPO对TGF-β1诱导的EMT具有一定的抑制作用,并具剂量-时间依赖性;该作用可能与rHuEPO上调肾小管上皮细胞VEGF的表达有关。
- 赵班吴华郑法雷
- 关键词：红细胞生成素转化生长因子-Β1血管内皮生长因子
- VEGF_(165)抑制HK2细胞上皮-间充质转化过程中NOTCH信号系统的变化被引量：5
- 2010年
- 目的探讨应用血管内皮生长因子(VEGF165)干预肾小管上皮-间充质转化(EMT)过程中NOTCH信号系统的变化及其意义。方法(1)体外培养的人肾小管上皮细胞(HK2)分为转化生长因子-β1(TGF-β1,5μg/L)单独作用组(T组)和TGF-β1(5μg/L)+VEGF(100μg/L)共同作用组(T+V组),RT-PCR及Western blot方法检测不同作用时间点JAGGED-1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。(2)TGF-β1与不同浓度VEGF165(0.1、1、10和100μg/L)共同作用细胞24 h,激光共聚焦显微镜(CFMS)、RT-PCR及Western blot检测E-钙黏素、α-SMA、JAGGED-1、NOTCH1表达。结果(1)作用后24和48 h,T+V组α-SMA和JAGGED-1蛋白表达均明显低于T组(P<0.05)。(2)同TGF-β1单独作用组比较,VEGF165(100μg/L)与TGF-β1共同作用组的E-钙黏素表达明显增强,α-SMA、JAGGED-1及NOTCH1表达均明显降低(P<0.05)。结论VEGF可抑制TGF-β1诱导HK2细胞发生EMT,并同时下调EMT过程中JAGGED-1、NOTCH1分子表达,提示该效应可能是VEGF抑制EMT的机制之一。
- 张颖娟连耀国李雪梅苏颖郑法雷
- 关键词：血管内皮生长因子上皮-间充质转化JAGGED-1NOTCH1
- 单核细胞趋化蛋白-1诱导肾小管上皮-肌成纤维细胞转化的作用及机制探讨被引量：6
- 2008年
- 目的探讨单核细胞趋化蛋白（MCP）-1诱导肾小管上皮细胞发生上皮-肌成纤维细胞转化（EMT）的作用和细胞分子机制，主要是EMT过程中Erk1／2、P38MAPK、RhoA、RhoC、Snail表达水平的变化。方法将HK-2细胞分为阴性对照组，阳性对照组（TGF-β1、5μg／L），MCP-1作用组（0．1、1、10、100μg／L），观察不同时间（12、24、48、72h）MCP-1刺激与α-SMA表达水平之间的变化。用Western印迹方法检测肾小管上皮细胞PErk1／2、Erk1／2、P-P38MAPK、P38MAPK、RhoA蛋白水平的变化，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测RhoC、Snail基因水平的变化。此外，分别观察Erk、P38MAPK、Rho信号通路的阻断剂（PD98059、SB203580、Y27632）对MCP-1诱导EMT的影响。结果在不同浓度MCP-1刺激下，HK-2细胞α-SMA mRNA及蛋白表达水平均明显增强，以1μg／L刺激下表达最强；在1μg／LMCP-1作用下，24、48、72hα-SMAm RNA及蛋白表均达显著高于阴性对照组（均P〈0．05），48h作用达到最高峰。在不同浓度（0．1、1、10、100μg／L）MCP-1刺激5min时，HK-2细胞（PErk1／2）／（Erk1／2）和（P-P38MAPK）／（P38MAPK）的比值均显著高于阴性对照组（均P〈0．05），并表现为剂量依赖性。不同浓度MCP-1刺激下RhoA蛋白水平和RhoC基因表达水平与阴性对照组比较差异均无统计学意义（均P〉0．05）。PD98059可以部分阻断MCP-1诱导的肾小管上皮细胞α-SMA蛋白表达水平，与阳性对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）；而SB203580及Y27632均不能阻断MCP-1诱导的α-SMA蛋白表达，与阳性对照组比较差异无统计学意义（均P〉0．05）。MCP-1（10、100μL）刺激下Snail基因表达水平明显升高，与阴性对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论MCP-1诱导体外培养的HK-2细胞发生EMT与上调Erk1／2信号转导通路有关，并可能与上调Snail转录因子水平有关，本研究未能�
- 李慧凛郑法雷赵班
- 关键词：单核细胞化学吸引蛋白质1肾小管成纤维细胞
- 血管内皮生长因子对肾小管上皮-间充质细胞转化的作用及其与骨形成蛋白-7、分化抑制因子表达的关系被引量：9
- 2008年
- 目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)对肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)的作用及其与骨形成蛋白-7(BMP-7)、分化抑制因子(Id)2、Id3表达的关系。方法体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)经转化生长因子-β1(TGF-β1,5ng/ml)与不同浓度VEGF165(0.1、1、10、100ng/ml)共同作用,或TGF-β1(5ng/ml)与血管内皮生长因子受体-1(VEGFR1)抗体(10μg/ml)共同作用48h后,免疫组织化学双染方法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素表达,实时荧光定量PCR法、Westernblot法检测细胞α-SMA、BMP-7、Id2和Id3的表达。TGF-β1(5ng/ml)、VEGF165(100ng/ml)与激活素受体样激酶-6/Fc嵌合体(Alk6/FcChimera)(2μg/ml,中和内源性BMP-7)共同作用48h后,Westernblot法检测细胞α-SMA、Id2的表达情况。结果TGF-β1作用后,α-SMA表达比正常对照显著增强(P<0.05),E-钙黏素、BMP-7、Id2及Id3的mRNA及蛋白质表达均显著减弱(P<0.05)。VEGF165以浓度依赖方式增强BMP-7及Id2蛋白表达,而显著降低TGF-β1上调α-SMA表达的作用(P<0.05)。加入VEGFR1抗体(10μg/ml)后,TGF-β1上调α-SMA表达的作用显著增强(P<0.05),而E-钙黏素、BMP-7、Id2表达显著减弱(P<0.05)。TGF-β1+VEGF165+Alk6/FcChimera共同作用后α-SMA蛋白表达比TGF-β1+VEGF165共同作用后显著增强(P<0.05),而Id2表达差异无显著性。结论VEGF165可抑制TGF-β1诱导HK-2细胞发生EMT;其机制可能与BMP-7和Id2表达上调有关,而与Id3表达变化无关。Id2表达增强可能与VEGF165的直接作用有关,而与BMP-7无关。
- 何春梅郑法雷连耀国刘燕萍
- 关键词：血管内皮生长因子骨形成蛋白-7分化抑制因子
- VEGF对上皮间充质转化的抑制与Smad信号途径及SnoN表达的变化被引量：3
- 2012年
- 目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导HK-2细胞发生肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)的过程中对Smad2/3,Smad7信号途径以及SnoN表达的影响。方法体外培养的HK-2细胞分为:①正常对照组;②TGF-β1(5μg/L)阳性对照组;③VEGF165(100μg/L)作用组;④TGF-β1(5μg/L)+VEGF165(100μg/L)共同作用组。采用WesternBlot法和RT-PCR分别检测各组细胞p-Smad2/3和Smad2/3(共同作用30和60min),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad7、SnoN的表达水平(共同作用48h)。结果 TGF-β1组α-SMA蛋白和mRNA表达与正常对照组比较明显增强,TGF-β1与VEGF165共同作用组α-SMA蛋白和mRNA表达与TGF-β1单独作用组比较明显减弱(P<0.05)。体外HK-2细胞,TGF-β1组刺激30、60min,与正常对照组比较,(p-Smad2/3)/(Smad2/3)比值明显升高,TGF-β1+VEGF165组与TGF-β1单独作用组相比明显下降,且以30min时下降明显。TGF-β1组作用48h与正常对照组比较,Smad7蛋白和mRNA表达明显下降,VEGF165+TGF-β1组较TGF-β1单独作用组Smad7表达明显升高(P<0.05)。VEGF165组与正常对照组相比,α-SMA、(p-Smad2/3)/(Smad2/3)、Smad7蛋白和mRNA表达的差异无统计学意义(P﹥0.05)。TGF-β1组SnoN蛋白表达与正常对照组比较明显增强(P<0.05),TGF-β1与VEGF165共同作用组SnoN蛋白表达与TGF-β1单独作用组相比差异无统计学意义(P﹥0.05),各组SnoNmRNA表达差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论 VEGF165抑制TGF-β1诱导HK-2细胞EMT的机制可能与直接抑制Smad2/3磷酸化、上调Smad7信号表达有关,而与调节SnoN表达无关。
- 连耀国张颖娟郑法雷
- 关键词：上皮-间充质转化转化生长因子-Β1SMAD2/3
- 地塞米松对马兜铃酸诱导的人肾小管上皮-间充质转化的作用及可能机制被引量：1
- 2012年
- 目的探讨地塞米松(Dex)对马兜铃酸诱导的肾小管上皮-间充质转化(EMT)的影响及可能机制。方法体外培养的人肾小管上皮细胞(HKC)分为阴性对照组、马兜铃酸(AA,10μg/ml)作用组、Dex(100μmol/L)作用组、AA(10μg/ml)+无水乙醇(100μmol/L)组、AA(10μg/ml)+Dex(100、10、1、0.1、0.01μmol/L)共同作用组,培养细胞48h,应用激光共聚焦显微镜(CFMS)观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)的表达,采用Real-timePCR和WesternBlot方法检测α-SMA、E-cadherin、p-Smad3、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad7mRNA和蛋白的表达。结果 AA作用48h后,CFMS观察发现HKC细胞E-cadherin表达减弱而α-SMA表达增强;地塞米松干预后,E-cadherin表达逐渐增强而α-SMA表达减弱,且呈剂量依赖性。Real-timePCR、WesternBlot结果均显示,与阴性对照组相比,AA组α-SMA、p-Smad3、TGF-β1mRNA和蛋白表达水平均显著增强,E-cadherin、Smad7mRNA和蛋白的表达均减弱(P<0.05)。同AA作用组比较,AA+Dex共同作用组随Dex剂量增加,α-SMA、p-Smad3、TGF-β1mRNA和蛋白的表达逐渐减弱,E-cadherin、Smad7mRNA和蛋白的表达逐渐增强(P<0.05),而无水乙醇却无此作用。结论 Dex可抑制AA诱导HKC细胞发生EMT,并同时下调EMT过程中TGF-β1和p-Smad3的表达、上调Smad7分子的表达,提示TGF-β1/Smad下调可能是Dex抑制EMT发生的机制之一。
- 马东红苏颖李明喜李雪梅郑法雷
- 关键词：地塞米松马兜铃酸转化生长因子-Β1SMAD
