武汉市青年科技晨光计划(20025001028)
- 作品数：12 被引量：29H指数：3
- 相关作者：刘勇杨述华郑启新杜靖远邵增务更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 阻断转化生长因子β1自分泌环对骨肉瘤细胞恶性表型的影响被引量：1
- 2005年
- [目的]观察阻断转化生长因子β1(TGFβ1)自分泌环对骨肉瘤细胞恶性表型的影响。[方法]将反义TGFβ1基因转染骨肉瘤细胞MG-63,G418筛选14d后获得转染细胞系MG-TGFβ1(-)。取MTT法检测转染细胞增殖活性,并观察细胞软琼脂克隆形成数和裸鼠体内致瘤能力。[结果]与MG-63和空载体转染细胞MG-pcDNA3相比,MG-TGFβ1(-)细胞增殖活性明显受到抑制。MG-TGFβ1(-)的软琼脂克隆形成数(28·2±5·6)比MG-63组(48·6±8·1)和MG-pcDNA3组(45·2±4·7)明显减少,裸鼠体内形成肿瘤的体积(83·4±27·4)mm3也明显小于MG-63组(191·3±21·5)mm3和MG-pcDNA3组(204·2±30·7)mm3。[结论]反义TGFβ1基因转染骨肉瘤细胞可以逆转肿瘤细胞的恶性表型,进一步的研究将有助于提高骨肉瘤的治疗效果。
- 刘勇郑启新杜靖远杨述华邵增务肖宝钧
- 关键词：转化生长因子Β1反义基因治疗骨肉瘤细胞恶性表型骨肉瘤细胞自分泌环阻断
- B7-1基因转染骨肉瘤细胞诱导抗骨肉瘤主动免疫的实验研究被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨B7-1基因转染骨肉瘤细胞能否诱导抗骨肉瘤主动免疫作用。方法:利用脂质体将B7-1真核表达载体pcDNA3-B7-1和空载体pcDNA3分别导入骨肉瘤细胞株LM8中,G418筛选出阳性克隆(分别命名为LM8/B7-1和LM8/pcDNA3),通过RT-PCR、Western blot和流式细胞仪检测B7-1基因与蛋白的表达;通过软琼脂克隆形成实验观察转基因细胞株LM8/B7-1的体外增殖能力;用LM8、LM8/B7-1和LM8/pcDNA3分别经腹腔免疫小鼠,得到腹腔浸润淋巴细胞和致敏脾细胞,MTT法检测其体外杀伤活力;将LM8、LM8/B7-1和LM8/pcDNA3细胞分别接种到C3H雄性小鼠前腋下,观察其致瘤能力;观察LM8/B7-1致敏的小鼠对骨肉瘤细胞LM8是否具有免疫保护作用。结果:B7-1基因在转基因细胞LM8/B7-1中能得到高表达;LM8/B7-1体外增殖能力与LM8和LM8/pcDNA3无明显差异(P>0.05);LM8/B7-1诱导的CTL的杀伤活力显著高于LM8和LM8/pcDNA3诱导的CTL对相同靶细胞的杀伤活力,LM8/B7-1诱导的CTL对LM8/B7-1的杀伤活力也明显高于对LM8和LM8/pcDNA3的杀伤活力(P<0.05);LM8/B7-1致瘤能力较LM8和LM8/pcDNA3细胞明显下降(P<0.01);LM8/B7-1致敏的小鼠对骨肉瘤细胞LM8具有免疫保护作用。结论:B7-1基因转染骨肉瘤细胞能诱导抗骨肉瘤主动免疫作用,为利用B7-1基因进行骨肉瘤免疫基因治疗提供了实验依据。
- 潘海涛郑启新杨述华刘勇叶树楠
- 关键词：骨肉瘤转染
- 应用反义TGF-β1基因进行骨肉瘤免疫基因治疗的研究被引量：3
- 2005年
- 目的探讨反义转化生长因子β1基因治疗骨肉瘤的价值。方法用转基因技术将反义转化生长因子基因导入骨肉瘤细胞LM8,构建转基因细胞株。用骨肉瘤细胞株LM8皮下注射C3H雄性小鼠建立小鼠骨肉瘤移植瘤模型。应用灭活的转基因骨肉瘤细胞、灭活的未转基因骨肉瘤细胞分原位和异位进行治疗。结果两种治疗措施都可表现出一定程度的抑瘤作用,其中以灭活的转基因骨肉瘤细胞治疗效果最佳,原位治疗效果优于异位治疗。结论灭活的骨肉瘤细胞也有一定的免疫治疗作用;反义转化生长因子基因对小鼠移植性骨肉瘤有较好的实验治疗效果,为人骨肉瘤进行反义转化生长因子基因治疗提供了一定的依据。
- 潘海涛杨述华刘勇
- 关键词：骨肉瘤免疫基因治疗
- B7-1转基因骨肉瘤疫苗的制备及鉴定
- 2005年
- 目的构建含B 7-1基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因的融合表达载体,转染LM 8骨肉瘤细胞制备骨肉瘤疫苗。方法用RT-PCR法扩增B 7-1基因片断,应用含GFP基因的真核表达质粒构建融合表达载体,酶切、测序鉴定构建质粒;采用脂质体介导方法将其转染到LM 8细胞,并用荧光显微镜及LCM结合蛋白免疫印记检测其在肿瘤疫苗细胞中的表达。结果经PCR及酶切鉴定,证实成功构建了含B 7-1基因的真核表达重组体pEGFP-C 1/B 7,重组子测序结果与国际基因文库中m B 7-1序列相符。用荧光显微镜观察到疫苗细胞中有GFP表达,RT-PCR检测到疫苗细胞中B 7-1基因的表达,w esternb lot发现疫苗细胞中有B 7蛋白的表达。结论B 7-1重组真核绿色荧光表达载体pEGFP-C 1/B 7已成功构建,转染LM 8细胞成功制备了骨肉瘤细胞疫苗。
- 宁旭刘勇杨述华傅德皓梅荣成
- 关键词：B7基因绿色荧光蛋白肿瘤疫苗骨肉瘤
- 可移植性鼠骨肉瘤肿瘤模型的建立被引量：7
- 2005年
- 目的建立快速简便的有细胞免疫力的鼠骨肉瘤肿瘤模型。方法取含10×106个对数生长期的UMR106骨肉瘤细胞的混悬液0.5ml,注射至SD大鼠前侧腋窝皮下,或取含5×106个对数生长期的LM8骨肉瘤细胞的混悬液0.3ml,注射至C3h雄性小鼠前侧腋窝皮下。密切观察其生长情况。2～3周时切除肿块,常规病理活检。结果SD大鼠在7～10天时可见明显肿块,3周时可形成1.5cm×1.5cm大小的肿块,肿瘤生成率50%;C3h雄性小鼠在第5天时可见明显肿块,2周时可形成1.0cm×1.0cm大小的肿块,肿瘤生成率100%。肿块经病理检查均证实为骨肉瘤组织。结论种植骨肉瘤细胞LM8于C3h雄性小鼠,可以快速、简便、非常可靠地建立有细胞免疫力的鼠骨肉瘤肿瘤模型。
- 潘海涛杨述华刘勇叶树楠
- 关键词：骨肉瘤肿瘤模型细胞免疫
- 应用反义转化生长因子基因进行骨肉瘤基因治疗的研究
- 2005年
- 目的探讨反义转化生长因子β1基因治疗骨肉瘤的价值。方法用转基因技术将反义转化生长因子基因导入骨肉瘤细胞LM-8,构建转基因细胞株。用骨肉瘤细胞株LM8皮下注射C3H雄性小鼠建立小鼠骨肉瘤移植瘤模型。应用裸反义转化生长因子基因、灭活的转基因骨肉瘤细胞分原位和异位进行治疗。结果两种治疗措施都可表现出抑瘤作用,以灭活的转基因骨肉瘤细胞治疗效果最佳,原位治疗效果优于异位治疗。结论反义转化生长因子基因对小鼠移植性骨肉瘤有较好的实验治疗效果,为人骨肉瘤进行反义转化生长因子基因治疗提供了一定的依据。
- 潘海涛刘勇郑启新杨述华叶树楠
- 关键词：骨肉瘤基因疗法抑瘤作用
- 反义转化生长因子β1表达载体的构建及其对骨肉瘤细胞增殖活性的影响被引量：2
- 2004年
- 目的 :构建反义TGFβ1基因 ,探讨阻断肿瘤细胞TGFβ1自分泌环对细胞增殖活性的影响。方法 :采用RT PCR获取人TGFβ1cDNA后 ,构建反义TGFβ1表达载体pcDNA3 TGFβ1( -)。将pcDNA3 TGFβ1( -)转染骨肉瘤细胞MG -63 ,采用流式细胞仪检测阻断TGFβ1自分泌环对肿瘤细胞增殖活性的影响。结果 :pcDNA3 TGFβ1( -)转染骨肉瘤细胞后 ,反义基因转染细胞MG TGFβ1( -)的G0 /G1期细胞从 5 6 2 %和 60 1%增至 71 6% ,S期细胞从 19 1%和 17 8%降至 12 9% ,细胞增殖活性明显降低。结论 :通过阻断TGFβ1自分泌环以降低骨肉瘤细胞表达的TGFβ1,可以明显抑制肿瘤细胞增殖活性。进一步的深入研究 ,必将为骨肉瘤疗效的提高开辟新的研究方向。
- 刘勇杜靖远杨述华郑启新邵增务肖宝钧
- 关键词：转化生长因子Β1骨肉瘤自分泌环细胞增殖活性
- B7-1基因转染对骨肉瘤细胞生物学行为的影响被引量：1
- 2005年
- 目的:研究B7-1真核表达载体pcDNA3-B7-1转染对骨肉瘤细胞株LM8的生物学行为的影响。方法:用脂质体(lipofectamine)介导B7-1基因和空载体pcDNA3转染LM8细胞,G418筛选得到抗性克隆,分别命名为LM8/B7-1和LM8/pcDNA3,用聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞仪(FCM)鉴定转染基因的表达,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT)和FCM检测细胞体外增殖活性,并观察转染细胞在C3h小鼠体内致瘤能力。结果:RT-PCR和FCM显示B7-1基因在骨肉瘤细胞株LM8中呈高表达,LM8/B7-1体外增殖活性与LM8/pcDNA3和LM8细胞差异并无显著性(P>0.05),但LM8/B7-1的致瘤能力显著下降(P<0.01)。结论:B7-1基因对骨肉瘤细胞的体内增殖能力产生明显抑制作用,可以作为骨肉瘤基因治疗的理想目的基因之一。
- 潘海涛郑启新杨述华刘勇
- 关键词：B7-1基因骨肉瘤基因转染
- 反义转化生长因子β1基因逆转的骨肉瘤细胞对肿瘤侵袭和转移的预防意义(英文)被引量：2
- 2004年
- 背景:转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)能通过自分泌和旁分泌机制促进肿瘤细胞的生长,最近有研究表明反义TGFβ1基因转染骨肉瘤细胞后可以降低肿瘤细胞的增殖活性。目的:观察反义TGFβ1基因对骨肉瘤细胞恶性表型的逆转作用,探讨其预防骨肉瘤的发生、发展的意义。设计:完全随机设计,对照实验研究。地点和材料:研究地点为华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室。TaqDNA聚合酶、TRIzolTM试剂、SuperscriptPreamplificationSystem、胎牛血清、DMEM培养基、Lipofectamine、无血清培养基、G418、PCR引物、反义TGFβ1表达质粒pcDNA3-TGFβ1(-)、人骨肉瘤细胞系MG-63、Balb/c裸鼠、流式细胞仪、CO2培养箱、相差显微镜。方法:将反义TGFβ1基因转染骨肉瘤细胞MG-63后,检测细胞周期、细胞凋亡和明胶酶A表达,并观察转染细胞软琼脂克隆形成数和裸鼠体内致瘤能力。主要观察指标:细胞周期和细胞凋亡检测;RT-PCR检测MMP-2基因表达;软琼脂培养克隆形成实验;裸鼠体内成瘤性的检测。结果:与MG-63和空载体转染细胞MG-pcDNA3相比,反义基因转染细胞MG-TGFβ1(-)的G0/G1期细胞从56.2%和60.1%增至71.6%,S期细胞从19.1%和17.8%降至12.9%,MMP-2mRNA表达明显减少。MG-TGFβ1(-)的软琼脂克隆形成数从48.
- 张宇坤杨述华刘勇李进许伟华叶哲伟夏天
- 关键词：骨肉瘤肿瘤侵袭基因转染
- 阻断转化生长因子β_1自分泌环基因治疗骨肉瘤的机制研究被引量：9
- 2003年
- 目的阻断骨肉瘤细胞TGF-β1自分泌环能抑制肿瘤细胞的增殖活性,从而达到基因治疗骨肉瘤的目的,探讨阻断TGF-β1自分泌环基因治疗骨肉瘤的机制。方法将反义TGF-β1基因转染骨肉瘤细胞MG-63后,采用RT-PCR的方法检测肿瘤细胞BMP-2、IGF-1、bFGF基因表达的变化。结果阻断TGF-β1自分泌环后,骨肉瘤细胞BMP-2、IGF-1、bFGF基因表达明显降低或消失。结论通过阻断自分泌环以降低骨肉瘤细胞表达的TGF-β1后,肿瘤细胞其他各种细胞因子的表达明显抑制,肿瘤细胞生物学活性降低。研究阻断TGF-β1自分泌环抑制肿瘤生长和发展的机制,将为开辟骨肉瘤基因治疗的新方向奠定基础。
- 刘勇杜靖远杨述华郑启新邵增务郭晓东
- 关键词：骨肉瘤肿瘤细胞增殖活性基因治疗BMP-2IGF-1
