浙江省科技厅重点资助项目(2006C23017)
- 作品数：2 被引量：8H指数：1
- 相关作者：盛吉芳鲁海峰吴仲文李兰娟左健更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：浙江省科技厅重点资助项目浙江省医药卫生优秀青年科技人才专项科研基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 粪便DNA抽提方法的比较研究被引量：7
- 2007年
- 目的比较国际主要微生态实验室4种常用的核酸抽提方法获得的粪便 DNA 的质量。方法采用针对目的细菌(总细菌、类杆菌.普氏杆菌属组、双歧杆菌、肠杆菌科细菌及肠球菌)16s rDNA 的特异性引物及实时定量 PCR 方法,分析 QIAamp粪便 DNA 试剂盒法(QIA 法)、FastDNAKit 试剂盒法(Fast 法)、酚-氯仿-玻璃珠击打法(酚-氯仿-玻珠法)及 QIAampDNA 粪便试剂盒+玻璃珠击打法(QIA+玻珠法)4种方法抽提获得的10份人粪便 DNA 的质与量。结果通用引物特异性扩增粪便总 DNA,发现4/10份由酚-氯仿-玻珠法获得的粪便 DNA 中存在 PCR 抑制剂,过柱纯化后 PCR 抑制现象消失。实时定量 PCR 检测粪便总细菌量,以 QIA 法与 QIA+玻珠法获得的量最高(分别为12.16±0.18,12.05±0.48),而 Fast 法与酚-氯仿-玻珠法获得的粪便细菌量(分别为11.26±0.40,11.21±0.16)与 QIA 法相比显著低下(均 P<0.05)。采用 QIA 法(11.63±O.23,8.68±0.51)及 QIA+玻珠法(11.67±0.56,8.77±0.56)抽提获得的粪便类杆菌-普氏杆菌及肠杆菌科细菌的 DNA 量显著高于 Fast 法(10.67±0.47,7.39±0.51)及酚-氯仿-玻珠法(10.65±0.33,7.40±0.18)(均 P<0.05)。对于双歧杆菌,酚-氯仿-玻珠法获得的量显著低下。但对肠球菌而言,以 Fast法获得的量最高。结论实时定量 PCR 检测结果表明,QIA 法及 QIA+玻珠法获得的粪便 DNA 质与量总体上优于 Fast 法及酚-氯仿-玻珠法,但根据不同的目的细菌群对象可以选择不同的方法。
- 吴仲文韩樱鲁海峰李兰娟盛吉芳左健
- 关键词：粪便DNA聚合酶链反应
- 肝移植患者肠道双歧杆菌的生态结构被引量：1
- 2007年
- 目的探讨肝移植患者肠道双歧杆菌属细菌种群分子生态结构变化特点。方法采用荧光定量PCR技术分析健康人27例、肝硬化患者51例及肝移植后患者113例粪便双歧杆菌在属及种水平上的定性和定量变化。结果与健康人比较，肝移植及肝硬化患者肠道双歧杆菌总量、肠道假小链双歧杆菌或小链双歧杆菌组细菌及青春型双歧杆菌显著减少均P〈0．01；肝移植患者肠道长双歧杆菌显著增多（P〈0．01）。肝移植患者肠道假小链双歧杆菌或小链双歧杆菌、青春型双歧杆菌、短型双歧杆菌检出率显著低于健康人群均P〈0．01。肝移植组患者肠道双歧杆菌多样性显著低于健康人群（Х^2=20．1，P〈0．01）。结论肝移植及肝硬化患者肠道双歧杆菌种群生态结构均存在显著异常，尤以假小链双歧杆菌或小链双歧杆菌组及青春型双歧杆菌的数量及检出率降低最为显著，肝移植组患者肠道双歧杆菌多样性显著低于健康人群。
- 鲁海峰吴仲文李兰娟左键盛吉芳郑树森梁廷波卢安卫
- 关键词：肝移植肝硬化双歧杆菌
