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拟南芥中影响基因对胁迫响应模式的顺式元件的挖掘: 2011年; 启动子中关键元件的数量、碱基变化等影响着所调控基因的表达模式。本文基于TAIR数据库的基因组序列和表达谱数据,首先通过BLAST比对和表达模式相关性分析,在拟南芥基因组范围内获得一批启动子序列相似程度很高而下游基因表达模式相反的启动子对,进而借助于PLACE顺式元件库,运用PatSearch软件找到这些启动子对中所含顺式元件种类与数量,并通过Culster聚类,GeneDoc和ContigExpress软件分析,获得了15个能影响胁迫条件下基因表达模式的关键顺式元件,这一发现暗示了生物系统利用较少的调控元件构建稳健与复杂的转录调控系统的方式。; 王飞飞李勇吕德康朱延明才华纪巍柏锡; 关键词：启动子顺式元件

野生大豆盐碱胁迫相关GsTIFY11b的克隆与功能分析被引量：13: 2012年; 以耐盐碱野生大豆(Glycine soja L.G07256)为材料,采用同源克隆方法和RT-PCR技术获得一个TIFY类基因的全长cDNA(命名为GsTIFY11b)。进化树分析表明,与其他物种相比,GsTIFY11b与拟南芥的AtTIFY11a基因相似性最高,达到56%;序列分析表明GsTIFY11b蛋白除具有TIFY保守结构域外,还具有一个N端保守结构域和一个C端保守的Jas结构域;实时荧光定量PCR结果显示该基因受盐和碱胁迫诱导表达;将GsTIFY11b转化拟南芥来验证其耐盐碱功能,获得两个转基因纯合体株系,盐碱胁迫分析结果表明,GsTIFY11b的超量表达没能提高拟南芥对盐碱胁迫的耐性,并且与野生型相比,转基因植株在种子萌发期和苗期表现出对盐胁迫更加敏感。盐胁迫信号通路相关marker基因在转基因拟南芥中的表达特性分析表明,GsTIFY11b可以调控RD29B、KIN1、DREB等基因的转录。在洋葱表皮细胞中瞬时表达GsTIFY11b-GFP融合蛋白的结果表明,GsTIFY11b定位于细胞核中。上述结果表明,该基因在细胞核中起着转录调节子的作用,可能是通过调控盐胁迫信号通路中关键基因的表达来改变植物对盐胁迫的耐受性。; 朱丹柏锡朱延明才华李勇纪巍陈超安琳朱毅; 关键词：野生大豆盐碱胁迫

大豆耐盐性鉴定体系的建立被引量：7: 2013年; 采用沙土水溶液的培养方法,以3个主栽大豆品种合丰50、合丰55和绥农28为试验材料,分别在种子发芽期(VE期)、第二片三出复叶长出期(V2期)进行不同浓度的NaCl处理,测定种子发芽率、死亡叶面积率、相对株高盐害率等表型指标,检测丙二醛含量、相对电导率等耐盐性生理指标。数据分析表明,该方法能区分不同品种、不同处理浓度的盐害程度,反映出相同品种、不同处理浓度间的差异,证明该方法能够用于大豆耐盐性鉴定。通过该鉴定体系测定3个大豆品种的耐盐性,最终选出在VE期抑制50%种子发芽NaCl浓度、V2期死亡叶面积率和对照之间存在显著差异的最小NaCl筛选浓度,并把V2期的死亡叶面积率作为衡量耐盐性的主要表型指标,丙二醛含量作为主要生理指标。研究结果可用于大豆耐盐性的鉴定、转基因耐盐大豆的鉴定等领域,具有重要应用价值。; 柏锡吴芳芳林凡敏赵晓雯狄少康朱延明李勇才华纪巍; 关键词：大豆耐盐性转基因

植物亚细胞定位载体卡盒pCEG的构建及验证被引量：4: 2011年; GFP基因被广泛地应用于植物转基因以及基因功能验证研究,然而构建与GFP融合的植物表达载体,常会因酶切位点难以选择,而使得载体构建过程复杂,周期长。以含GFP的质粒pCAMBIA-1302为基础,消除此质粒本身的多克隆位点(MCS),并在此质粒GFP基因序列前插入原核表达载体pET-32b的多克隆位点,构建了植物GFP亚细胞定位载体卡盒pCEG;采用农杆菌介导的转化方法,将此载体卡盒pCEG导入模式植物烟草叶片中进行瞬时表达,用激光共聚焦显微镜观察GFP蛋白的亚细胞定位情况,发现GFP蛋白均匀的在细胞质和细胞核中表达,证明此载体卡盒可用于植物基因的亚细胞定位分析,并为构建目的基因与GFP融合的植物表达载体提供了很多可用的酶切位点,对植物基因功能验证提供了分子操作简便的植物表达载体卡盒,具有重要的利用价值。; 朱丹王希朱延明陈超李勇柏锡才华纪巍; 关键词：亚细胞定位 GFP 烟草

拟南芥AT2G14260基因功能及其表达特异性被引量：3: 2011年; 拟南芥AT2G14260基因编码脯氨酸亚氨基肽酶,基因芯片表达谱数据显示该基因响应高盐、低温等非生物胁迫。为研究其功能和表达特性,本研究采用野生型和突变体植株pip-1进行低温、干旱和盐胁迫处理,结果显示在正常培养基中野生型与pip-1植株表型没有区别。而在逆境处理下pip-1植株的根比野生型明显短,且在干旱胁迫下,突变体的叶子比野生型植株明显变黄萎蔫。在正常环境、冷、干旱、盐胁迫下,野生型植株脯氨酸含量的平均值分别是突变体的1.11、1.23、1.10和1.34倍,这说明AT2G14260基因对提高非生物胁迫的耐性具有一定的作用。同时分离了该基因的启动子,构建了表达GUS基因的载体并转化拟南芥,该启动子在正常环境中不表达。胁迫处理时从两叶期开始在根、叶、茎中表达,到达花期后,干旱处理下的花瓣、花枝和冷处理下的花柱头中也有表达。GUS相对活性试验也证明对胁迫的响应能力。可见AT2G14260基因启动子是逆境胁迫诱导表达启动子,同时具有组织表达特异性,因此,AT2G14260基因及其启动子在转基因工程育种中具有潜在的应用价值。; 王飞飞李勇王学东朱延明才华纪巍柏锡; 关键词：组织特异性表达

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黑龙江省教育厅科学技术研究项目(11521024)