贵州省农业攻关项目(NY2011)
- 作品数：8 被引量：19H指数：3
- 相关作者：曾智勇汤德元刘建郝飞李春燕更多>>
- 相关机构：贵州大学贵州省动物疫病预防控制中心贵阳市农业试验中心更多>>
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- 猪圆环病毒贵州株ORF2基因的克隆及表达载体的构建被引量：2
- 2013年
- 为了研究猪圆环病毒(PCV)的分子生物学诊断技术和基因工程疫苗,试验根据GenBank公布的PCV ORF2基因的核苷酸序列设计1对特异性引物,从贵州省某猪场的疑似猪圆环病毒组织病料中提取DNA,采用PCR技术扩增PCV ORF2基因,克隆到pMD19-T载体并测序,将构建好的T载体双酶切,回收目的片段与pET-32a(+)载体及pcDNA3.1(+)载体连接并转化入TOP10中构建原核、真核表达载体,并将ORF2基因插到重组质粒pcDNA3.1-IL-2上,构建以IL-2融合表达真核载体。结果表明:克隆的PCV ORF2基因全长为719 bp,ORF为702 bp,编码233个氨基酸,与Gen-Bank公布的PCV ORF2基因的核苷酸同源性为98.4%。说明试验成功克隆了猪圆环病毒贵州地方毒株ORF2基因,并成功构建了PCV ORF2原核、真核表达载体及以IL-2融合表达真核载体。
- 甘振磊汤德元李春燕曾智勇王凤刘建郝飞
- 关键词：猪圆环病毒ORF2基因原核表达载体真核表达载体
- 猪细小病毒非结构蛋白NS1基因的克隆、序列分析及蛋白质结构预测被引量：8
- 2013年
- 根据GenBank登录的猪细小病毒NADL-2株和China株序列,利用Oligo 6.0软件设计1对扩增NS1全基因的特异性引物,对从贵州省安顺地区检测到的PPV的NS1基因进行扩增、克隆、测序、序列分析和蛋白质结构预测分析。测序结果表明,扩增的目的基因长度为1986bp,共编码659个氨基酸,其中NS1基因的1287、1288和1298位碱基发生了缺失,导致429、430和433位氨基酸发生缺失。系统发生树结果表明,本试验测序的NS1基因与NADL-2弱毒株处在同一进化分支;氨基酸同源性与NADL-2弱毒株和Kresse毒株最高,均为98.6%。蛋白质结构预测分析结果表明,非结构蛋白NS1的分子质量为75269.76u,理论等电点pI为7.25,不稳定系数为41.57,推测其为不稳定蛋白质;脂肪指数为73.58,总体平均亲水性为-0.565,推测该蛋白质是一种亲水性蛋白质;该蛋白质含有丰富的α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲,柔性区域较多,呈连续分布;非结构蛋白NS1无跨膜区和信号肽;预测非结构蛋白NS1含有3个N-糖基化位点、3个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点、5个蛋白激酶C磷酸化位点、22个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、1个酪氨酸激酶磷酸化位点、8个N-肉豆蔻酰化位点、1个酰胺化位点及1个ATP/GTP结合位点基序A(P-环);该蛋白质抗原表位较多,存在10个主要的抗原表位。
- 刘建汤德元罗险峰曾智勇李春燕甘振磊王凤郝飞王洪光
- 关键词：猪细小病毒NS1基因克隆蛋白质结构预测
- 猪博卡病毒病原学及其检测技术的研究进展
- 2015年
- 猪博卡病毒(PBo V)是细小病毒科细小病毒亚科博卡病毒属的新成员,该病毒于2009年首次由瑞典学者从表现为多系统衰竭综合征(PMWS)的发病断奶仔猪体内分离鉴定获得。目前,猪博卡病毒作为新发现的病原,已成为许多国家兽医科研人员的研究热点。文章主要针对猪博卡病毒病原学和检测技术的研究进行综述,重点介绍猪博卡病毒病原学的研究进展、PCR检测技术、Real-time PCR检测技术、多重PCR检测技术、半巢式PCR检测技术、套式PCR检测技术、间接免疫荧光检测技术、LAMP检测技术和免疫学诊断方法。
- 李达韦国渠汤德元李春燕曾智勇郝飞刘建王洪光
- 关键词：病原学
- 某规模化猪场猪繁殖障碍性疫病ELISA及六重PCR的检测分析
- 2015年
- 为了解贵州省某规模化猪场6种繁殖障碍性疫病的感染状况,试验采用ELISA试剂盒对送检的血清样品进行了猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒(PCV-2)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)抗体水平的检测,同时对送检的组织病料进行六重PCR检测。结果表明:CSFV、PRRSV、PCV-2、JEV、PRV和PPV的抗体阳性率分别为93.2%、52.7%、49.4%、83.8%、87.3%和78.8%,其中PRRSV免疫效果较差;另外,该猪场未免疫PCV-2疫苗,但是其抗体阳性率相当高,血清学检测结果显示,该猪场很可能存在PRRSV和PCV-2感染;送检的组织病料经六重PCR检测结果显示,该猪场存在PRRSV和PCV-2野毒感染。说明该猪场应加强猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒病的预防工作。
- 罗险峰张华汤德元马萍李春燕曾智勇刘建郝飞李达
- 关键词：规模化猪场繁殖障碍性疫病ELISA抗体水平
- DEB-2抗真菌活性物对半夏组培污染真菌抑制及其生长的影响
- 从药用植物石斛的组织中分离获得1株具有抗真菌活性的芽抱杆菌(DEB-2),该菌株能强烈拮抗多种植物病原菌。该菌产生的物质具有较高的热稳定性,121℃处理20min活性没有损失,对变性剂脲、紫外线相当稳定,在酸碱条件下仍具...
- 吴璇康冀川雷帮星何劲
- 关键词：抗真菌物质组培半夏
- 猪伪狂犬病毒Guizhou-DY株gE基因的克隆及生物信息学分析被引量：2
- 2013年
- 为了研究伪狂犬病毒gE蛋白的结构及其在免疫保护中的功能,试验根据GenBank中猪伪狂犬病毒(PRV)GDSH株(登录号为EF552427)gE全基因序列设计引物,对伪狂犬病病毒gE基因进行PCR扩增、克隆及生物信息学分析。结果表明:PCR扩增基因全长1 734 bp,编码577个氨基酸,与Yangsan株对应序列同源性为99.4%,测序结果已提交GenBank,登录号为JX417716;Guizhou-DY株gE蛋白是一种不稳定的疏水性蛋白,柔性区域呈散在性分布,以T转角和无规则卷曲为主,具有2个疏水区,在100～400位氨基酸残基处抗原性指标较高,基因序列保守性强;经预测,gE全基因不能在大肠杆菌表达系统中得到高效表达。
- 郝飞汤德元罗险峰曾智勇李春燕甘振磊王凤刘建王洪光
- 关键词：生物信息学分析
- 贵州省某猪场PRRSV,PCV-2和PRV混合感染的快速诊断被引量：4
- 2013年
- 为快速诊断出贵州某猪场饲养猪发病的原因,试验对送检样品进行了流行病学调查、临床症状观察、解剖病理观察及血清学检查,初步诊断该猪场发病猪为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)或猪伪狂犬病毒(PRV)感染。为确诊病因,对病料进行了PCR/RT-PCR检测。结果表明:该猪场发病猪为PRRSV、PCV-2和PRV的混合感染。说明该方法能确诊这3种病毒感染。
- 王洪光汤德元罗险峰曾智勇甘振磊刘建郝飞
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型猪伪狂犬病毒
- 日本乙型脑炎病毒贵州分离株NS1基因克隆及表达载体的构建被引量：3
- 2013年
- 为了研究日本乙型脑炎病毒(JEV)NS1基因工程疫苗、生物免疫活性及细胞因子IL-2对真核表达的影响,试验采用RT-PCR方法扩增出JEV贵州分离株(GZ株)NS1 cDNA,克隆到pMD19-T载体上,再进行双酶切并回收目的片段,分别与pET32a(+)和pcDNA3.1(+)载体连接并转化入感受态细胞Top10中,构建原核表达载体pET32a(+)-NS1和真核表达载体pcDNA3.1(+)-NS1,并将NS1基因插入已经构建好的重组质粒pcDNA3.1(+)-IL-2上,构建以IL-2融合表达的真核载体pcDNA3.1(+)-IL-2-NS1,分别通过抽提阳性质粒酶切鉴定和测序后,应用DNAStar等生物软件进行序列分析,最后进行原核表达载体和真核表达载体双酶切及测序。结果表明:JEV GZ株NS1 cDNA全长为1 245 bp,可编码415个氨基酸。说明JEV GZ株NS1 cDNA克隆成功,JEV GZ株NS1基因的原核表达载体、真核表达载体以及IL-2融合表达的真核载体构建成功。
- 王凤汤德元罗险峰曾智勇马萍李春燕
- 关键词：日本乙型脑炎病毒贵州分离株NS1基因
- 强冬性大白菜新品种黔白9号
- 2015年
- 黔白9号是贵州省园艺研究所针对贵州省冬春、早春及春夏反季节大白菜生产需要及春夏叶菜淡季市场需求,利用贵州省特有的抗寒、耐抽薹资源,通过杂种优势利用,育成的抗寒、耐抽薹、丰产的大白菜新品种,介绍了贵州省园艺研究所选育的强冬性大白菜新品种黔白9号的特征特性及反季节栽培技术,为生产者在春大白菜栽培中提供参考。
- 彭莉赵大芹马超潘业勤
- 关键词：强冬性大白菜栽培
