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核心蛋白聚糖真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达被引量：1: 2008年; 目的:构建人核心蛋白聚糖(DCN)真核表达载体,并在CHO细胞中进行表达,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础。方法:以含有人DCN cDNA的质粒pBluescript为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因片段。真核表达载体pcDNA3及PCR产物经XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切后连接,转化大肠杆菌JM109,获得重组载体pCDNA-DEC,进行酶切鉴定和测序鉴定。脂质体lipofectamine介导重组载体转染CHO细胞,经G418(800mg·L-1)筛选建立稳定转染细胞株。采用细胞免疫组织化学方法检测稳定转染CHO细胞中DCN表达。结果:PCR获得与预期大小一致约1000bp的特异性DNA片段;重组载体pCDNA-DEC经双酶切鉴定及测序证实,人DCN基因cDNA片段正确插入真核表达载体中;在稳定转染的CHO细胞株中可见DCN蛋白表达。结论:成功构建DCN真核表达载体pCDNA-DEC,并建立稳定转染CHO细胞株。; 舒振波操海萍王大民张桂珍; 关键词：核心蛋白聚糖基因表达转染 CHO细胞

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吉林省科技厅科技发展计划项目(20061550)