国家重点基础研究发展计划(2012CB1146-00)
- 作品数：13 被引量：20H指数：2
- 相关作者：夏庆友赵萍郭锡杰赵巧玲沈兴家更多>>
- 相关机构：西南大学中国农业科学院蚕业研究所江苏科技大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学经济管理更多>>
- 家蚕脂肪酶1(Bmlipase-1)的原核表达和抗体制备及在转基因增量表达系统中的检测被引量：2
- 2012年
- 家蚕肠液中的脂肪酶1(Bmlipase-1)对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)具有明显抑制作用,建立的增量表达Bmlipase-1的转基因家蚕品系(LI-A)对BmNPV的抵抗力得到显著增强。为了分析LI-A品系幼虫肠液中Bmlipase-1的含量变化,通过原核表达、纯化Bmlipase-1蛋白,并免疫家兔制备Bmlipase-1的多克隆抗体,对LI-A品系和正常家蚕品种大造4龄、5龄起蚕肠液中的Bmlipase-1含量进行Western blotting检测。结果显示Bmlipase-1在LI-A品系幼虫肠液中的含量明显高于正常家蚕品种大造,证明LI-A品系对BmNPV的抵抗力提高是因为肠液中Bmlipase-1的含量增加。
- 金盛凯蒋亮林平孙薇程廷才夏庆友
- 关键词：家蚕核型多角体病毒原核表达转基因家蚕
- 家蚕核型多角体病毒编码miR-364对DNA聚合酶基因表达的调控作用研究被引量：1
- 2015年
- MicroRNA(miRNA)在调控病毒与宿主相互作用方面起着重要作用。为了研究家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)编码的miRNA对其自身靶基因的调控作用,通过高通量测序得到Bm NPV编码的一条miRNA——Bm NPV-miR-364,利用在线靶基因预测程序RNAhybrid与RNA22预测Bm NPV基因组中有6个基因可能是Bm NPV-miR-364的靶基因。分别构建Bm NPVmiR-364与6个侯选靶基因3'-UTR的表达载体,共转染Bm N细胞后检测其双荧光素酶活性,结果表明Bm NPV-miR-364对Bm NPV DNA聚合酶(DNA polymerase)基因的抑制作用显著(P<0.05),对其余5个靶基因的抑制作用不显著。进一步采用Bm NPV-miR-364 mimic与Bm NPV-miR-364 inhibitor分别进行过表达和缺失表达分析,显示Bm NPV-miR-364 mimic能显著抑制DNA polymerase基因的表达,而Bm NPV-miR-364 inhibitor能显著解除Bm NPV-miR-364对DNA polymerase基因的抑制作用。将Bm NPV-miR-364与DNA polymerase基因的表达载体共转染Bm N细胞,qRT-PCR分析发现实验组细胞中病毒DNA polymerase基因的表达水平显著低于对照组。qRT-PCR检测家蚕经口接种Bm NPV后24 h内,血淋巴中Bm NPV-miR-364和病毒DNA polymerase基因的表达量很低,但在24 h之后表达量急剧上升。研究结果提示:Bm NPV编码的miR-364可以靶向抑制自身复制过程中的重要酶基因,调节DNA的复制。
- 曹学亮夏定国裘智勇郭锡杰沈兴家赵巧玲
- 关键词：家蚕核型多角体病毒DNA聚合酶基因
- 高糖饲料饲养对家蚕的血糖浓度和脂肪体中的甘油三酯含量影响被引量：5
- 2014年
- 以高糖饲料饲养家蚕后,测定与分析蚕体血糖浓度、脂肪体中甘油三酯含量以及蚕的体质量变化,探究以家蚕为模型阐明高糖饮食导致的人体糖代谢和脂质代谢变化的可行性。5龄起蚕摄食高糖饲料3 d后,血淋巴中葡萄糖和海藻糖的浓度上升;脂肪体组织中的甘油三酯积累,脂肪球明显增大、增多;蚕体质量明显降低,生长受到影响。此外,高糖饲料饲养家蚕按1 IU/头剂量注射人胰岛素后,血淋巴中的葡萄糖和海藻糖浓度有一定程度降低。试验结果表明,高糖饲料喂养家蚕后可导致其糖代谢和脂质代谢失调,体质量下降,与Ⅱ型糖尿病患者的病理生理变化相似。
- 卢忠燕温阳丽张振任秀张毅赵萍夏庆友
- 关键词：家蚕脂质代谢
- 家蚕蛹期特异基因BmCP283的启动子活性分析
- 2013年
- 前期研究鉴定了家蚕蛹期特异表达基因BmCP283,并克隆了翻译起始位点上游长度为2 004 bp的启动子区序列BmCP283P。用PCR方法扩增了BmCP283P启动子9个不同区域的片段,构建由其驱动的荧光素酶基因报告载体,并转染BmE细胞进一步分析该启动子的活性。结果显示,BmCP283P启动子序列由上游2 004 bp递减至1 743 bp,以及由1 608 bp递减至1 328 bp,其活性显著增强;而从1 328 bp递减至1 189 bp,其活性则显著减弱。这暗示2 004～1 743 bp和1 608～1 328 bp区域可能存在抑制BmCP283P启动子活性的调控元件,而1 328～1 189 bp区域可能存在启动子活性增强元件。另外,蜕皮激素(20E)诱导能增强BmCP283P启动子的活性,暗示20E参与了BmCP283基因的转录调控。研究结果不仅有助于阐明BmCP283基因的转录调控机理,也为人为调控家蚕蛹期发育提供了潜在的可用启动子。
- 康丽霞孟勐王永虎唐林彭健钱文良程道军夏庆友
- 关键词：家蚕启动子蜕皮激素
- 家蚕法尼酸甲基转移酶(FAMeT)基因的鉴定及表达模式分析被引量：2
- 2013年
- 保幼激素(JH)是昆虫生长、发育、变态和生殖等一系列生理生化过程中必不可少的一类激素。法尼酸甲基转移酶(farnesoic acid O-methyltransferase,FAMeT)被认为是昆虫及其它节肢动物催化合成保幼激素前体甲基法尼酸(methyl farne-soate,MF)的关键酶。通过生物信息学分析,从家蚕全基因组数据中共鉴定了7个编码家蚕FAMeT的基因(BmFAMeT1～BmFAMeT7)。系统进化分析暗示BmFAMeT2可能是家蚕FAMeT家族成员的最原始拷贝。对其中位于6号染色体上的BmFAMeT5、BmFAMeT6和BmFAMeT7的时空表达谱分析显示,3个基因从家蚕胚胎发育后期至成虫期持续性表达;在5龄第3天幼虫中肠组织特异性高水平表达。利用RACE技术克隆获得了这3个基因的全长cDNA序列,并发现BmFAMeT5及BmFAMeT6分别存在2种不同的选择性拼接形式。上述结果为进一步研究家蚕FAMeT的生物学功能提供了线索。
- 孟勐程道军彭健康丽霞王永虎钱文良夏庆友
- 关键词：家蚕保幼激素表达谱
- 家蚕N-乙酰基转移酶基因BmNAT的克隆与表达分析
- 2016年
- N-乙酰基转移酶(N-acetyltransferase,NAT)是昆虫体内一种催化乙酰基团在乙酰辅酶A和胺之间转移的酶,主要与色素沉积、生理节律等有关。对已公布的家蚕(Bombyx mori)N-乙酰基转移酶基因Bm NAT(Gen Bank登录号:NP_001040401.1)进行生物信息学分析:该基因序列全长763 bp,ORF为564 bp,编码187个氨基酸残基,分子质量21.4 k D;多序列比对表明Bm NAT与脐橙螟(Amyelois transitella)同源蛋白质的序列相似性最高。通过原核表达的方法制备了融合Bm NAT蛋白,经蛋白质纯化并免疫新西兰兔获得多克隆抗体。亚细胞定位显示Bm NAT主要存在于细胞质和细胞核中。利用Western blotting检测Bm NAT在家蚕不同发育时期和5龄幼虫各组织器官的表达谱,结果表明Bm NAT在蛾、卵期以及5龄幼虫的头部表达量较高,与Bm NAT的qRT-PCR检测结果基本一致,初步推断Bm NAT可能在家蚕的这些组织或发育时期发挥一定的生物学功能。流式细胞实验显示Bm NAT对细胞周期可能存在一定的影响。
- 程旭升李斌聂作明盛清
- 关键词：家蚕N-乙酰基转移酶基因克隆原核表达亚细胞定位
- 昆虫中肠围食膜构造和功能的研究进展被引量：2
- 2012年
- 围食膜(peritrophic membrane,PM)是无脊椎动物消化道特有的一种半透性膜状结构。昆虫的PM是由中肠上皮细胞分泌形成的一层由蛋白质、多糖和几丁质微纤维组成的蛋白质多糖基质膜,它将食物和中肠上皮细胞分隔开。昆虫的PM有Ⅰ型和Ⅱ型2种类型。Ⅰ型PM是由整个中肠细胞分泌形成的层状管状膜,可以从整个中肠完全剥离,在某些情况下,可能只在被饲喂食物和摄下食物时形成。Ⅱ型PM是由中肠前部特异性区域贲门处的特殊细胞分泌形成的连续的套筒状膜,且一直存在。处于食物与中肠上皮细胞之间的PM可以保护中肠上皮细胞免受机械损伤以及病原菌和毒素的入侵,并作为半透性膜将中肠分为不同的区室在营养物质的消化和吸收等方面起重要作用。本文综述了有关昆虫PM的结构、组分、功能以及与害虫防治的关系等方面的研究进展。
- 胡小龙吴小锋
- 关键词：昆虫中肠围食膜蛋白质害虫防治
- 家蚕酪氨酸羟化酶的氨基酸序列分析和重组表达被引量：1
- 2013年
- 酪氨酸羟化酶参与昆虫体色和斑纹黑色素合成以及免疫黑化反应等重要生理过程。为了研究家蚕(Bombyx mori)酪氨酸羟化酶的生物学功能,采用生物信息学方法对家蚕与其它物种的酪氨酸羟化酶氨基酸序列进行比对分析,结果显示不同物种之间的酪氨酸羟化酶具有保守性,在昆虫物种之间尤其保守;家蚕酪氨酸羟化酶含有保守的功能位点,如铁原子结合位点His331、His336、Glu376,底物蝶呤结合位点Gly293、Leu294、Leu295、Phe300、Glu332、Tyr371和Glu376。构建重组质粒p29-Bmth,利用原核表达系统实现了家蚕酪氨酸羟化酶蛋白的重组表达,通过高效液相色谱分析证明纯化获得的重组家蚕酪氨酸羟化酶蛋白具有酪氨酸羟化活性,测定其活性为0.81 U,比活性为0.13 U/mg。研究结果为深入研究家蚕酪氨酸羟化酶的生理功能奠定了基础。
- 刘春周梦婷谭祥吕金凤李栋聂红毅夏庆友
- 关键词：家蚕酪氨酸羟化酶氨基酸序列功能位点原核表达酶活性
- 家蚕感受神经膜蛋白基因SNMP1的序列分析及原核表达被引量：1
- 2013年
- 昆虫的感受神经膜蛋白SNMP1(sensory neuron membrane protein)可能是一种与嗅觉相关的功能蛋白。家蚕感受神经膜蛋白基因SNMP1(GenBank登录号:NM_001043721.1)由8个外显子和7个内含子组成,ORF长度为1 569 bp,编码522个氨基酸残基,蛋白质分子质量为58.76 kD,理论等电点为8.58,具有6个保守半胱氨酸残基、3个预测的N连接糖基化位点(67 NXT、229NXS/T、440 NXT)、1个CD36结构域。跨膜结构域预测发现家蚕SNMP1具有位于N端和C端的2个跨膜结构域以及1个大的胞内环,与果蝇的SNMP1跨膜拓扑结构正好相反;信号肽分析发现前24个氨基酸残基为信号肽序列,且11～24 aa序列片段位于第1个跨膜结构域内。组织表达谱分析显示家蚕SNMP1基因在成虫触角特异表达,在成虫的其它组织和幼虫触角中无表达。应用原核表达系统对家蚕SNMP1基因CDS序列和去掉两端跨膜结构域的截短序列进行体外表达,SDS-PAGE和Western blotting检测结果显示目的基因已成功地在大肠杆菌细胞表达,为进一步研究家蚕SNMP1在触角的细胞定位及功能打下了基础。
- 陈全梅马振刚王晓欢孙艳慧王鑫代云香赵萍
- 关键词：家蚕表达谱分析原核表达
- 近现代蚕桑业在美国加利福利亚州的兴衰启示录被引量：5
- 2013年
- 从19世纪中期到20世纪中期的百年间,蚕桑业在美国加利福利亚州(加州)经历了兴起、发展和衰落的过程。本文基于美国史料的记载与实地调查,回顾了这段蚕桑业演变历史,分析了特殊时期的市场需求、个人和政府的行为以及行业内外的竞争等对加州近现代蚕桑业的影响。以史鉴今,讨论了蚕桑丝绸产业发展中值得关注和重视的问题。
- 王菲夏庆友
- 关键词：近现代史蚕桑业
