山东省农业重大应用技术创新课题(2009)
- 作品数：16 被引量：110H指数：6
- 相关作者：杨宏军王长法仲跻峰高运东何洪彬更多>>
- 相关机构：山东省农业科学院山东农业大学山东师范大学更多>>
- 发文基金：山东省农业重大应用技术创新课题山东省优秀中青年科学家科研奖励基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牛结核杆菌的mpb-83基因扩增和表达
- 【目的】扩增牛结核杆菌mpb-83并在大肠杆菌中表达,为今后临床诊断奠定基础。【方法】用PCR方法扩增牛结核杆菌mpb83基因,将其连接到T3克隆载体,然后把它们克隆到原核表达载体PET-32a中,构建重组质粒PET-m...
- 李树春斯肯达尔杨宏军何洪斌王长法杨少华高运东仲跻峰
- 关键词：克隆原核表达纯化
- 文献传递
- 母猪妊娠期采食水平对其背膘厚和泌乳期采食量的影响被引量：2
- 2014年
- 为研究母猪妊娠期采食水平对其背膘厚和哺乳期采食量的影响,选择58头大约克母猪,配种后随机分为3组,起始饲喂水平分别按1.8、1.4和0.8倍维持需要供给饲粮（分别为采食高、中、低水平）,随着妊娠期延长各组采食水平递增,测定母猪不同阶段的背膘厚,统计母猪妊娠和哺乳期采食量。结果表明,母猪妊娠期高水平的饲喂量可显著增加其配种后30 d、分娩和断奶时的背膘厚,增加1.29%~40.26%,高水平饲喂量使母猪分娩时的背膘厚达到21.74 mm,而妊娠期中、低水平饲喂母猪分娩时的背膘厚为16.87~16.97 mm,极显著低于妊娠期高水平饲喂母猪分娩时的背膘厚。妊娠期的采食量与泌乳期采食量呈极显著负相关,妊娠期中、低水平饲喂的母猪,其分娩后的采食量增加较快,且保持在较高水平,分娩至断奶日采食量达到3.66~4.30 kg。由此可见,母猪妊娠期间饲喂水平自1.4倍维持需要增加至2.6倍最为适宜,不仅有利于母猪分娩后采食量的快速增加,而且有利于母猪妊娠期和哺乳期的背膘厚保持在适宜水平,使母猪哺乳期的体脂损耗减少。
- 呼红梅王诚张印王彦平郭建凤武英
- 关键词：母猪采食量背膘厚
- 奶牛乳腺炎葡萄球菌生物被膜形成及相关基因分析被引量：13
- 2011年
- 【目的】研究临床分离的奶牛乳腺炎葡萄球菌生物被膜形成能力,相关基因的分布及二者之间的关系;【方法】利用通用硅胶片法培养葡萄球菌生物被膜,经充分洗涤后对生物被膜进行银染定性判断菌株形成生物被膜的能力,通过生物被膜菌落结晶紫染色法定量检测菌株生物被膜的形成能力,并用扫描电镜观察被膜结构,对葡萄球菌bap、icaAD、icaBC、sar、agr、sigB、clfaA、clfaB、fnbpA和fnbpB进行PCR扩增检测。【结果】银染法定性结果显示137株葡萄球菌中有120株形成肉眼可见的生物被膜,生物被膜形成率为87.6%;结晶紫染色定量检测与硅胶粘附的有132株,不粘附的有5株。试验所用的137株葡萄球菌中,57株能扩增出bap基因;有43株和54株分别能扩增出icaAD和icaBC;有73株、49株和38株分别扩增出sigB、sar和agr;分别有76株和50株染色体中存在clfaA和clfaB;fnbpA和fnbpB分别在52株和26株菌株中扩增出。【结论】推测bap、sigB、sar、icaAD和icaBC基因是生物被膜形成的重要相关基因;agr及粘附素基因clfaA、clfaB、fnbpA和fnbpB对生物被膜形成的作用不明显。
- 李丽杨宏军刘代成何洪彬王长法仲跻峰高运东
- 关键词：生物被膜银染法结晶紫染色法
- 重组金黄色葡萄球菌FnbpA亚单位疫苗的研制被引量：1
- 2011年
- 【目的】制备金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(FnbpA)基因工程亚单位疫苗,并以小白鼠为试验模型,检测其免疫保护效果。【方法】诱导表达FnbpA,经组氨酸标签亲合纯化后用Bradford法测定纯化的目的蛋白的含量,并检测其黏附活性及对动物的安全性。制备FnbpA亚单位疫苗,经无菌检验及安全检验后,进行免疫保护试验,用ELISA方法检测被免疫小鼠血清中的抗体效价,通过腹腔攻毒试验检测疫苗的免疫保护力。【结果】纯化的目的蛋白在80 ku处出现单一条带,蛋白质量浓度为0.245 mg/mL。细菌黏附抑制试验发现,经FnbpA蛋白预处理过的MDBK细胞黏附的金黄色葡萄球菌数较对照极显著减少;动物安全性试验显示,小鼠注射FnbpA亚单位疫苗后均健活,表明制备的FnbpA亚单位疫苗安全性良好。所有免疫组小鼠于首免后7 d即可在血清中检测到特异性抗体,抗体效价逐渐上升,在21 d达到最高值,之后逐渐降低。【结论】纯化的FnbpA蛋白达到了电泳级纯度,且依然保持良好的黏附活性;制备的FnbpA亚单位疫苗作用机体产生的抗体水平符合抗体消长规律,且表现出良好的免疫保护力。
- 张海燕杨宏军王长法何洪彬仲跻峰马卫明
- 关键词：基因工程亚单位疫苗免疫效力小白鼠
- 金黄色葡萄球菌Coa基因的克隆、表达及生物活性检测
- 2011年
- 【目的】克隆金黄色葡萄球菌血浆凝固酶(Coa)基因,并在大肠杆菌中进行融合表达,分析重组蛋白的生物活性。【方法】用PCR法扩增金黄色葡萄球菌Coa基因,构建Coa基因原核表达载体pET32a(+)/coa,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,采用SDS-PAGE法分析重组蛋白的表达水平;将重组蛋白纯化后,测定其血浆凝固效价。【结果】扩增出了2 106 bp的Coa基因,其包含1个完整的开放阅读框,编码含701个氨基酸的成熟多肽;IPTG诱导后该基因表达的融合蛋白分子质量为100 ku,目的蛋白产量占菌体总蛋白的13%;纯化的重组蛋白含量为0.047 mg/mL,其对兔血浆凝固效价为0.012 mg/mL。【结论】成功地克隆、表达了金黄色葡萄球菌Coa基因,Coa凝固血浆效价为0.012 mg/mL。
- 张洪波杨宏军葛利江何洪彬杨少华王长法高运东仲跻峰
- 关键词：金黄色葡萄球菌克隆活性分析
- 施钾方式对棉花叶片抗氧化酶活性、产量及钾肥利用效率的影响被引量：29
- 2012年
- 在大田试验条件下,以鲁棉研28为试验材料,研究不施钾肥(CK)、一次性基施硫酸钾(T1)、分次(1/2基施,1/2于花铃期追施)施用硫酸钾(T2)、一次性基施控释复合肥(T3)4个处理的棉花叶片保护酶活性、产量及钾肥利用效率变化。结果表明,与不施钾处理相比,施钾可显著增加叶片叶绿素、可溶性蛋白含量,降低MDA含量,提高SOD、CAT活性(叶龄30、45、60d),降低POD活性(叶龄30、45d),提高籽棉产量和皮棉产量;与一次性基施硫酸钾和控释复合肥相比,分次(1/2基施、1/2花铃期追施)施用硫酸钾可显著提高叶片可溶性蛋白含量(叶龄30、45、60d)和SOD(叶龄15、30、45d)、CAT(叶龄15、30d)活性,降低MDA含量(叶龄30、45、60d)和POD活性(叶龄30d),提高籽棉产量、皮棉产量和钾肥生产效率。本试验条件下,分次(1/2基施、1/2花铃期追施)施用硫酸钾是兼顾高产高效的施肥方式。
- 李宗泰陈二影张美玲赵庆龙许晓龙姬红宋宪亮孙学振
- 关键词：棉花
- 彩色棉纤维分化及色素沉积过程观察被引量：6
- 2011年
- 以棕絮1号、陇绿棉2号和对照品种普通白色棉鲁棉研28为试验材料,利用光学显微镜、扫描电子显微镜和透射电子显微镜,观察其彩色棉胚珠表皮细胞的形态变化、纤维的早期发育及色素沉积过程,旨在明确彩色棉与普通白色棉的纤维分化发育差异及彩色棉纤维色素的沉积过程。结果表明:各供试材料胚珠中部的部分表皮细胞均于开花前1d开始分化;开花当天,胚珠纤维细胞均有突起;开花后1d,纤维细胞突起增多,体积增大,其中鲁棉研28的纤维细胞已有伸长的态势;开花后3d,纤维细胞均已伸长。除分化程度在各供试材料间差异不显著外,突起数量、发育和伸长程度,均以鲁棉研28最优,棕絮1号次之,陇绿棉2号最差。在纤维发育过程中,棕絮1号与陇绿棉2号纤维色素的形成时间及在纤维内的沉积部位均存在差异。纤维色素在陇绿棉2号的形成时间较棕絮1号早,且沉积于纤维中腔和次生壁内层,而棕絮1号仅沉积在纤维中腔内。上述结果表明棕絮1号和陇绿棉2号的纤维品质差,可能与彩色棉纤维早期发育过程中,胚珠表皮细胞的突起时间相对较迟、数量相对较少和色素在纤维中沉积密切相关。
- 张美玲宋宪亮孙学振王振林赵庆龙李宗泰姬红许晓龙
- 关键词：彩色棉棉纤维色素沉积
- 牛结核杆菌mpb-83基因的扩增和表达
- 2010年
- 采用PCR方法扩增牛结核杆菌mpb-83基因,并将其连接到T3克隆载体,然后克隆到原核表达载体PET-32 a中,构建重组质粒PET-32 a-mpb-83。以重组质粒转化大肠杆菌BL21,用NI柱纯化,最后纯化产物在SDS-PAGE中检测。结果得到约664 bp的目的片段,且MPB-83可在大肠杆菌BL21中高效表达。
- 李树春斯肯达尔杨宏军何洪斌王长法杨少华高运东仲跻峰
- 关键词：克隆原核表达
- 多重PCR检测奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌粘附素基因clfa A、clfa B、fnbp A和fnbp B被引量：3
- 2011年
- 利用多重PCR检测金黄色葡萄球菌粘附素基因clfa A、clfa B、fnbp A和fnbp B的方法,对奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌临床分离株进行聚集因子主效基因的分析。通过设计合成的特异性引物对金黄色葡萄球菌模板进行PCR扩增,将目的基因回收并连接到T载体,鉴定后进行测序验证,然后对本实验室所分离鉴定的金葡菌临床分离株进行多重PCR检测。PCR产物经过电泳成像显示,clfa A和clfa B分别在292bp和205bp处出现特异性条带;fn-bp A和fnbp B分别在524bp和642bp处出现特异性条带。通过对29株金葡菌临床分离株多重PCR检测发现:能扩增出clfa A、clfa B、fnbp A和fnbp B的分别有26株、12株、28株和3株。建立的多重PCR检测金黄色葡萄球菌粘附素基因的方法具有良好的特异性和可靠性,并且发现clfa A和fnbp A基因存在于绝大部分的金黄色葡萄球菌中。
- 李丽刘代成杨宏军何洪彬王长法高运东仲跻峰
- 关键词：金黄色葡萄球菌乳腺炎粘附素
- 奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌溶血型及溶血素基因分布的研究
- 目的:建立金黄色葡萄球菌溶血型分型及hla基因、hlb基因分型的方法,初步研究生鲜牛乳中金黄色葡萄球菌溶血素基因的分布状况,并探讨溶血型与溶血素基因分型的相关性。方法:利用表型生化分型,利用PCR分型技术对其进行分型,电...
- 王飞刘代成杨宏军何洪斌王长法高运东仲跻峰
- 关键词：金黄色葡萄球菌乳腺炎溶血素基因
- 文献传递
