国家自然科学基金(30860328)
- 作品数：8 被引量：26H指数：6
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- 相关机构：广西医科大学中国科学院上海生命科学研究院更多>>
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- 新城疫病毒对小细胞肺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用被引量：8
- 2009年
- 目的:探讨新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)7793株在体内对肿瘤生长的抑制作用及机制。方法:体外培养人小细胞肺癌NCI-H446细胞,通过皮下接种NCI-H446细胞建立人小细胞肺癌裸鼠移植瘤模型。NDV组裸鼠瘤内注射新城疫病毒,阳性对照组注射顺铂(cisplatin,DDP),阴性对照组注射PBS。观察移植瘤生长情况和裸鼠体质量变化,绘制肿瘤生长曲线。6周后处死裸鼠剥取肿瘤组织,HE染色观察细胞学变化,免疫组织化学法检测移植瘤细胞Bax和Bcl-2蛋白表达情况。结果:NDV注射对肿瘤生长有显著抑制作用,抑瘤率达34.1%;NDV对荷瘤鼠无不良反应;光学显微镜下观察发现,NDV治疗组肿瘤组织有许多散在分布的凋亡/坏死区域。NDV能明显上调Bax蛋白的表达量(P<0.01),对Bcl-2蛋白表达则无影响。结论:新城疫病毒7793株在体内能够有效抑制移植瘤生长,其抗肿瘤机制可能与上调Bax蛋白的表达有关。
- 宋德志樊晓晖黄川姜艳华赖振屏黄企光茅乃权杨建林
- 关键词：肺肿瘤新城疫病毒凋亡调节蛋白质类
- 新城疫病毒7793株HN基因片段原核表达及功能鉴定被引量：1
- 2013年
- HN蛋白是新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的血凝素神经氨酸酶蛋白(hemagglutinin-neuraminidase,HN),是NDV识别宿主细胞的包膜蛋白。NDV-HN能与NK细胞的NKp46受体结合,活化NK细胞上调TNF-α和IFN-γ发挥抗瘤效应[1]。然而HN蛋白是否能直接活化NK细胞上调TNF相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)尚待阐明。因此对新城疫病毒7793株(NDV 7793)HN基因主要抗原表位区域进行克隆和原核表达,并对重组HN(recombinant HN,rHN)蛋白是否能活化NK细胞上调TRAIL进行研究。流式细胞分析表明rHN蛋白的纯化产物能与小鼠胸腺的NK细胞膜分子NKp46结合,并上调NK细胞TRAIL的表达。HN抗体阻断试验能部分抑制HN-NKp46结合及NK细胞TRAIL上调的效应。这一结果将为进一步研究NDV-HN直接活化NK细胞增强抗肿瘤效应的胞内信号传导提供依据。
- 梁莹刘金颖樊晓晖宋德志肖庆殷君冯安林杨利周丹旎赖振屏
- 关键词：新城疫病毒HN蛋白原核表达免疫机制
- 新城疫病毒对人NK细胞表达TRAIL的促进作用被引量：6
- 2012年
- 目的:研究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)刺激自然杀伤(natural killer,NK)细胞产生肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的作用机制。方法:采用免疫磁珠分选(magnetic activated cell sorting,MACS)法,分离得到高纯度的NK细胞;乳酸脱氢酶释放法检测NDV激活的NK细胞对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用;实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测NDV刺激NK细胞4h后对TRAILmRNA表达水平的影响;FCM检测NDV刺激NK细胞16h时TRAIL蛋白的表达情况;ELISA法检测NDV刺激NK细胞后对其分泌干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)的影响;最后采用抗IFN-γ抗体中和IFN-γ后,再采用FCM检测NDV刺激的NK细胞中TRAIL蛋白的表达情况。结果:FCM检测结果显示,分离得到的NK细胞的纯度达(90.60±1.15)%;NDV刺激NK细胞16h后,明显增强NK细胞的杀伤肿瘤作用,NDV效价为204.8HU刺激组的杀伤率达到(22.28±0.84)%;RFQ-PCR及FCM检测结果显示,不同效价的NDV刺激NK细胞后,NK细胞中TRAILmRNA及蛋白表达水平均明显升高;ELISA检测结果显示,NDV刺激NK细胞后IFN-γ的分泌水平明显增加,在NDV效价为25.6HU刺激16h时达到峰值(796.47±37.87)pg/mL;采用抗IFN-γ抗体中和IFN-γ后,NK细胞中TRAIL蛋白表达水平明显下降。结论:NDV刺激NK细胞后可增强IFN-γ的分泌水平,进而通过IFN-γ上调TRAIL的表达,此途径为NDV刺激NK细胞表达TRAIL的机制之一。此外,NDV直接刺激NK细胞表达TRAIL是另一条重要的途径。
- 殷君王立芳樊晓晖梁莹肖庆宋德志高灵茜赖振屏
- 关键词：新城疫病毒TNF相关凋亡诱导配体自然杀伤细胞
- 新城疫病毒7793株对人结肠癌细胞的杀伤作用被引量：8
- 2011年
- 目的:研究新城疫病毒NDV7793对人结肠癌细胞的体外杀伤作用,为结肠癌的生物疗法奠定基础。方法:通过蚀斑实验纯化病毒并测定纯化的NDV7793株的感染力;用乳酸脱氢酶微量释放法测定纯化病毒对人LoVo和Ls174t结肠癌细胞株的杀伤作用并且通过血凝实验测定病毒在不同细胞中的增殖力。结果:NDV7793在感染细胞96h后出现直径约为0.5mm左右的空斑,PFU为1.25×107个/ml,为弱毒株;NDV7793对LoVo和Ls174t人结肠癌细胞株有明显的杀伤作用,而且杀伤作用的强度与病毒作用的时间和病毒的浓度呈正相关的关系;NDV7793可以在肠癌细胞中生长复制,该病毒株在人结肠癌细胞株LoVo的复制能力强于Ls174t。结论:NDV7793具有较强的选择性杀伤人结肠癌细胞的作用,且为弱毒株,这株病毒具备肿瘤生物治疗的潜能。
- 宫金伶黄川宋德志姜艳华赖振屏高灵茜王立芳刘金颖潘文宝胜樊晓晖
- 关键词：人结肠癌细胞抗肿瘤效应
- NDV7793活化的NK细胞对人肝癌HepG2细胞的杀伤及其机制研究被引量：5
- 2012年
- 目的:研究NDV7793激活的NK细胞对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用,并探讨可能的相关机制。方法:用免疫磁珠分离法分离人NK细胞,用乳酸脱氢酶释放法(LDH法)检测不同血凝单位(25.6Hu,51.2Hu,102.4Hu,204.8Hu,512.0Hu)的NDV7793刺激NK细胞后对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用,分别用ELISA法和流式细胞术检测活化后的NK细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平及细胞膜表面的TRAIL蛋白表达水平。结果:人外周血NK细胞分离纯度达(90.6±1.15)%;NDV7793能提高NK细胞对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用,其杀伤效力(释放的LDH活力值)随着效靶细胞作用时间的增加及效靶细胞比的增大而增强;NDV7793能显著提高NK细胞TNF-α的分泌水平,其中204.8HuNDV7793刺激NK细胞12h后,TNF-α分泌水平达到高峰(0.184±0.01);102.4HuNDV7793刺激NK细胞16h后,NK细胞膜表面TRAIL表达达到高峰(22.77±1.8)%。结论:NDV7793能增强NK细胞对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用,杀伤机制可能是和提高NK细胞分泌的TNF-α及上调细胞膜表面TRAIL蛋白有关。
- 王立芳樊晓晖刘金颖潘文宝胜殷君宋德志梁莹肖庆赖振屏
- 关键词：新城疫病毒NK细胞TRAIL蛋白TNF-Α
- 新城疫病毒D817对裸小鼠人结肠癌移植瘤的抑制作用被引量：7
- 2009年
- 目的观察新城疫病毒DK／HK／817／1980（NDVD817）对裸小鼠人结肠癌移植瘤的抑制作用。方法采用LoVo细胞株建立裸小鼠人结肠癌移植瘤模型，分别给予裸小鼠尾静脉注射PBS、氟尿嘧啶（5-Fu）以及NDVD817高、中、低3个剂量，观察不同剂量NDVD817对移植瘤的抑制作用，病理学观察NDVD817对移植瘤和肝细胞的损伤程度，流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡和坏死情况，酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒检测荷瘤小鼠体内肿瘤坏死因子-Ⅱ（TNF—α）的含量，血凝实验检测荷瘤小鼠体内活病毒量。结果中剂量NDVD817可明显抑制移植瘤的生长，肿瘤抑制率达48．1％。NDVD817对荷瘤小鼠体重和肝脏的损伤较小，且具有诱导肿瘤细胞凋亡和诱导机体产生TNF—α的能力。荷瘤小鼠处死后只在瘤内检测到活病毒，而在血清和其他脏器中并没有检出活病毒。结论在对裸小鼠人结肠癌移植瘤的抑制过程中，NDVD817有明显的抑瘤效果，适当剂量的NDVD817更安全有效。
- 黄川樊晓晖姜艳华宋德志高灵茜黄企光赖振屏
- 关键词：新城疫病毒溶瘤病毒
- 新城疫病毒7793株抑制人结肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤的生长及其机制被引量：7
- 2011年
- 目的:观察新城疫病毒7793株(Newcastle disease virus 7793 strain,NDV 7793)对人结肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤生长的作用,并探讨其可能机制。方法:建立LoVo细胞裸鼠移植瘤模型,随机分成3组,分别静脉注射PBS、5-FU以及NDV 7793,观察各组裸鼠肿瘤的生长情况,流式细胞术检测移植瘤细胞的坏死率和凋亡率,免疫组织化学法检测移植瘤组织中Bax、Bcl-2蛋白的表达,细胞色素C试剂盒检测移植瘤组织中细胞色素C的含量,ELISA法检测移植瘤组织中TNF-α含量。结果:NDV 7793较5-FU更明显抑制LoVo细胞移植瘤的生长(抑制率50.14%vs 37.14%,P<0.05)。NDV 7793组移植瘤LoVo细胞凋亡率显著高于5-FU对照组[(28.7±1.5)%vs(1.46±0.3)%,P<0.01],且NDV 7793组诱导LoVo细胞的凋亡率和坏死率[(28.7±1.5)%vs(27.80±3.32)%]相当。NDV 7793能促进移植瘤组织中Bax蛋白的表达,对Bcl-2蛋白的表达无影响。NDV 7793可提高移植瘤组织中的细胞色素C含量[(2.28±0.68)vs(0.68±0.13)μg/μl]和TNF-α的水平[(489.6±5.2)vs(167.9±3.9)pg/ml]。结论:NDV 7793可抑制人结肠癌LoVo细胞移植瘤的生长,其机制可能与其上调Bax蛋白、细胞色素C和TNF-α的表达,以及促进肿瘤细胞凋亡有关。
- 肖庆黄川樊晓晖宋德志梁莹宫金伶王立芳刘金颖赖振屏
- 关键词：新城疫病毒结肠癌移植瘤凋亡坏死
- NDV7793体外激活的小鼠单核巨噬细胞(MΦ)对小鼠肝癌细胞的杀伤作用及其机制被引量：6
- 2012年
- 目的初步研究NDV7793激活的小鼠单核巨噬细胞(MΦ)对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤作用,并探讨其杀伤机制与TNF-α和TRAIL的关系。方法从腹腔分离6周龄BALB/C小鼠MΦ,用NDV7793于体外刺激小鼠MΦ,以ELISA分别测定NDV7793刺激小鼠MΦ后产生的TNF-α及TRAIL水平;NDV7793体外刺激MΦ后,与小鼠肝癌Novikoff细胞混合培养,以LDH微量释放法测定小鼠MΦ对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤效应。同时设立3组实验对照组:IFN-β阳性对照组、紫外线灭活NDV(UV-NDV)对照组以及空白对照组。结果与3个对照组相比,NDV7793在体外能提高MΦ分泌TNF-α、TRAIL的水平;NDV体外刺激后的小鼠MΦ能杀伤小鼠肝癌Novikoff细胞。结论NDV7793在体外能激活小鼠MΦ,小鼠MΦ被NDV7793刺激后,对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤作用增强,NDV激活后的小鼠MΦ对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤机制可能与TNF-α和TRAIL有关。
- 刘金颖宫金伶樊晓晖宋德志王立芳潘文宝胜殷君梁莹肖庆赖振屏
- 关键词：小鼠单核-巨噬细胞肝癌细胞
