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国家高技术研究发展计划(2007AA100503): 作品数：43 被引量：150H指数：8; 相关作者：李校堃李海燕刘秀明赵凌侠李洪志更多>>; 相关机构：吉林农业大学上海交通大学温州医学院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划高等学校科技创新工程重大项目吉林省科技发展计划基金更多>>; 相关领域：生物学农业科学医药卫生矿业工程更多>>

用无选择标记的转基因烟草表达胸腺素α1(Tα1): 2010年; 胸腺素α1(thymosin α1,Tα1)作为免疫调节剂在T细胞成熟、分化和功能发挥方面扮演着重要角色,临床主要被用于免疫缺陷、病毒感染和自身免疫性疾病(HBV、HCV、HIV和癌症等)的治疗。由于组织提取Tα1原料限制、化学合成价格昂贵和传统表达系统(原核或转基因动物)存在安全隐患,使Tα1临床应用受限。用烟草表达Tα1,首先按植物偏爱密码子设计合成tα1基因(124bp)并重组串联成4×tα1,构建植物双元表达载体p35s∷4×tα1(含twinT-DNAs),用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法转化烟草。PCR和Southern blot结果证实获得了14转基因烟草,并发现靶基因4×tα1与筛选基因nptII在转基因烟草T0代基因组中发生了分别整合。对177株T1代转基因烟草检测,获得了2株仅整合4×tα1而无筛选标记nptII的植株。ELISA结果显示,4×Tα1在转基因烟草叶片中的表达量介于180.46(81#)～756.87ng/g.fw(86#),Western blot证实植物源4×Tα1具有免疫活性。MTT实验结果显示,植物源的4×Tα1蛋白具有促进BALB/c鼠脾淋巴细胞增殖的功能,为用安全植物表达系统生产包括Tα1在内的药用蛋白提供重要参考。; 芦丽亚宋维游晓慧江婷赵凌侠; 关键词：胸腺素Α1 转基因烟草生物活性无选择标记

温度对东亚飞蝗精子发生过程中细胞周期变化的影响: 通过人工孵化东亚飞蝗(Locusta migratoria manilensis Meyen)成虫并进行不同温度下培养,应用流式细胞技术,对东亚飞蝗精子发生过程中不同倍体生精细胞和凋亡细胞DNA含量进行检测和分析。结果显...; 赵卓金立波李校堃周晓馥徐洪伟; 关键词：东亚飞蝗精子发生细胞周期温度

植物生物反应器研究现状、瓶颈及策略被引量：11: 2009年; 近10年,植物作为重组蛋白生产系统是生命科学中研究最活跃领域之一。植物系统具有低成本、安全和易规模化优势,其表达生物活性药用蛋白能力已被许多研究所证实;同时,植物药用蛋白产品还表现出潜在的市场和广阔应用前景。鉴于此,回顾了植物生物反应器兴起,介绍了植物表达系统和重组蛋白研究现状,综述了植物生物反应器面临瓶颈问题、解决对策和未来一段时间内研究热点;在展望植物生物反应器前景同时,对我国研究现状、与国外差距和未来发展应采取策略进行了讨论。; 金丽鑫赵凌侠; 关键词：植物生物反应器重组蛋白

利用烟草表达重组人胰岛素原的初步研究被引量：1: 2010年; 按植物偏爱密码子设计合成了228bp带his-tag(6×his)人胰岛素原基因(hmins),随后构建了植物双元表达载体p35S::hmins(骨架质粒是pCAMBIA2300),通过冻融法导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105制备工程菌,用农杆菌介导法转化烟草叶盘。经卡那霉素(50mg·L-1)筛选获得98株抗性植株,PCR和southern blotting分析确认获得了6株独立转基因烟草,hmins在转基因烟草基因组中的拷贝数介于2~4;RT-PCR和western blotting分析结果表明,hmins在转基因烟草中成功表达(转录和翻译水平);ELISA结果显示,hmins在转基因烟草叶片中表达量为0.5~1.1μg·g-1·FW。该研究为植物源胰岛素研制做了必要的前期准备。; 张昱张小平赵凌侠; 关键词：转基因烟草糖尿病

叶绿体表达系统的研究进展被引量：1: 2011年; 综述了叶绿体表达系统的特点及其转化方法,重点阐述了其研究现状及应用。针对本实验室的研究情况对其存在的问题进行了分析,并提出展望。; 杜美丽刘秀明江莺李巍朱海林李海燕李校堃; 关键词：重组蛋白

MicroRNAs的分子进化与调控机制被引量：9: 2010年; MicroRNAs(miRNAs)是一类专门调控基因表达的非编码小分子RNA,广泛参与生物发育、细胞分化、细胞凋亡等多种生命进程。miRNAs在不同种系间独立进化且在进化演变中普遍保守。文章综述了miRNAs起源、进化上的保守性及甲基化调控方面研究进展,另外在疾病和动植物应用方面的研究也作了较为详细的阐述。; 王天宇董园园李海燕李校堃; 关键词：小分子RNA 甲基化

农杆菌介导油菜油体基因与碱性成纤维细胞生长因子融合基因转化油菜研究被引量：7: 2009年; [目的]利用植物转基因技术,生产药用蛋白。[方法]以带柄子叶作为转化受体,利用根癌农杆菌介导法将油菜油体基因与bFGF的融合基因转入油菜中,在获得潮霉素(Hyg)抗性植株的同时,对油菜的再生条件进行优化,并对获得的抗性苗进行PCR和Southern检测。[结果]油菜最佳转化再生条件为外植体预培养2 d,共培养3 d,菌液浓度OD值为0.3,侵染时间5 min。[结论]该研究中,融合基因已成功整合到油菜基因组中,为以后转基因植物种子的蛋白提取、分离和纯化奠定了基础。; 徐岩肖艳双杜金霞汪洪郑伟李营庞实锋; 关键词：植物生物反应器根癌农杆菌油菜

丝状真菌的遗传工程研究进展被引量：8: 2010年; 丝状真菌在化学、医药和工业酶制剂等领域具有广泛的应用。提高丝状真菌的生产能力一直是真菌遗传改良的最终目标。随着现代分子生物学的发展,基于DNA水平和RNA水平的分子遗传操作技术被引入到真菌遗传改良之中,部分丝状真菌的生产能力得到了大幅度的提高,但是目前仍然无法对大量具有重要经济价值的真菌进行分子改良,主要原因之一是缺乏相应的转基因方法。本文综述了目前应用于真菌的转基因方法,以及利用这些方法在DNA水平和RNA水平上改良丝状真菌的最新研究进展。; 张田唐克轩; 关键词：丝状真菌代谢工程

东亚飞蝗不同发育时期酚氧化酶活性的动态变化: 为比较昆虫发育时期免疫防御能力的强弱,本研究对东亚飞蝗(Locusta migratoria manilensis Meyen)不同发育时期体外酚氧化酶活性动态变化进行测定和比较分析。结果显示:(1)东亚飞蝗发育过程中,...; 赵卓周晓馥徐洪伟金立波李校堃; 关键词：东亚飞蝗酚氧化酶发育

国家高技术研究发展计划(2007AA100503)