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重庆地区HCV基因亚型的分布状态被引量：30: 2005年; 目的:探讨重庆地区丙型肝炎病毒(HCV)流行的基因亚型分布状态.方法:在77份抗HCV抗体和HCVRNA均阳性的血清标本中,分别提取HCVRNA,通过逆转录巢式PCR(RTnestedPCR)扩增C基因的羧基端至E1基因的氨基端长度为474bp的片段,测定其核苷酸序列,与GenBank中已知的HCV序列进行系谱分析,确定HCV基因亚型.结果:77份HCV感染者血清标本通过RTnestedPCR检测均获得阳性条带,该方法特异性和敏感性均较好.序列与系谱分析显示1b29例(38%),2a10例(13%),3a12例(16%),3b11例(14%),6a15例(19%),未见1a和2b型.结论:重庆地区HCV流行的基因亚型有1b,2a,3a,3b,6a共5种,1b为流行的主要基因亚型.2a,3a,3b和6a型均占相当比例,初步说明重庆地区HCV流行的基因亚型呈现多样性.; 张帆王小红王宇明熊瑜琳陈嵩谭朝霞; 关键词：肝炎病毒基因型系谱分析

丙型肝炎病毒1b型5′端5223bp半基因组扩增被引量：1: 2006年; 目的:扩增丙型肝炎病毒(HCV)1b型5′端5223bp半基因组.方法:取5份HCV1b血清标本,采用3种RNA提取方法,比较几种逆转录酶及逆转录条件,选取不同Taq酶进行长链RTNestedPCR反应体系及循环条件的筛选和优化,利用最佳的模板提取方法及优化的RTPCR反应条件扩增出5′端长度为5223bp(5223bp)半基因组.结果:Trizol法可以获得完整的RNA模板,适合长链的扩增;应用ReverTraAceaTM酶和SuperScriptTMⅡ,反应条件为42℃10min后,42℃2min,48℃2min,30个循环,然后75℃,10min;可获得完整的cDNA模板;TaKaLaLATaqTM和PlatinumTaqDNApolymeraseHighFidelity采用两种扩增条件:①94℃变性2min,94℃30s,62℃30s,72℃4.5min,扩增30个循环;②94℃变性2min,94℃15s,68℃5min,扩增5个循环,然后94℃15s,68℃5min(每个循环延长10s),扩增20个循环,最后72℃延伸10min,均可获得HCV1b型5′端5223bp半基因组的阳性结果,TaKaLaLATaqTM扩增效果最好;PCR产物经核苷酸序列测定证实为HCV1b型.结论:通过各种条件的优化,成功地实现了5′端半基因组的扩增,为下一步全长质粒及复制子的构建打下了基础.; 王小红熊瑜琳李俊刚谭朝霞胡亚君; 关键词：丙型肝炎病毒

中国人HCV标本库的建立被引量：12: 2008年; 目的建立中国人HCV感染患者系列标本库。方法系列收集门诊及住院的HCV感染患者血液标本。所有血清标本进行基本的生化和病毒学检测。记录每一位患者的流行病学资料和临床与诊断检测结果。定期随访,不断扩充标本库。同时,对大部分HCVRNA阳性血清标本进行HCV基因型和亚型的确定。结果建立了中国人HCV标本库,收集605例HCV慢性感染患者的934份血清标本。完整记录了流行病学、临床及实验室资料,可提供研究所需的血清标本。对其中206份HCVRNA阳性感染者血清标本进行了基因型别的检测。序列与系谱分析结果显示1b87例(42.2%),2a26例(12.6%),3a32例(15.5%),3b30例(14.6%),6a31例(15.1%),未见1a和2b型。结论建立了中国人HCV标本库。为HCV的基础与临床研究奠定了良好的基础,也为其他疾病相关标本库的构建提供了参考。; 熊瑜琳张长江王小红潭朝霞胡亚君; 关键词：丙型肝炎病毒标本库基因型流行病学

丙型肝炎病毒基因组结构及功能被引量：6: 2008年; 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是单股正链的RNA病毒,全长为9.6kb,包括1个大的开放阅读框(ORF)和两侧的5′,3′非编码区(UTRs).核糖体通过进入HCV5′UTR端的内部核糖体进入位点(IRES),将HCV基因组翻译成1个聚蛋白前体.前体聚蛋白被宿主和病毒的蛋白酶共同切割成为若干个具有独立功能的HCV蛋白,根据功能的不同分别命名为C、E1、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B,它们不但在HCV的生活史中发挥着重要的作用,也影响着宿主细胞的信号传导、凋亡及物质代谢等一系列生化过程.近年来,随着HCV体外细胞摸型的不断发展,其病毒分子生物学方面的研究取得了很大的进展.本文从基因组结构及其编码的蛋白功能等方面阐述了HCV病毒的研究进展,为致病机理的研究及抗HCV药物的开发和疫苗研制等提供理论基础.; 熊瑜琳张长江王小红; 关键词：丙型肝炎病毒非编码区结构蛋白非结构蛋白

HCV的新型体外细胞模型:复制子系统被引量：1: 2005年; 自 198 9年丙型肝炎病毒 (HCV)被分子克隆后 ,其流行病学、基因组学的相关研究取得了一定的进展 ,然而由于缺乏有效的体外细胞复制模型 ,HCV的研究长期以来受到阻碍 .1999年Lohmann等在Science上首先报道了选择性双顺反子亚基因组HCVRNA复制子系统 ,其被公认为是HCVRNA体外复制模型研究获得突破进展的里程碑 .复制子在人肝癌细胞株Huh 7细胞株中能高水平的自主复制 .研究发现复制子在细胞中复制对宿主细胞生长和代谢无明显影响 ,高水平复制与病毒基因组的适应性突变和宿主细胞的容受性有关 .这些研究结果为选择性HCV全序列基因组复制子的研究奠定了基础 .复制子系统的建立对HCV致病机制、治疗药物筛选及疫苗方面的研究具有重要的意义 .; 张帆王小红; 关键词：丙型肝炎病毒复制子细胞

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