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江苏省属高校自然科学基础研究项目(08KJA230002): 作品数：38 被引量：182H指数：7; 相关作者：朱国强朱春红朱军郁磊姚丰华更多>>; 相关机构：扬州大学江苏农牧科技职业学院中国农业科学院家禽研究所更多>>; 发文基金：江苏省属高校自然科学基础研究项目国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

猪源牛病毒性腹泻病毒SH-28分离株的全基因组序列及遗传进化分析被引量：3: 2013年; 为了解猪源牛病毒性腹泻病毒(BVDV)与牛源BVDV在遗传特性上的差异,本试验对实验室分离保存的1株猪源BVDV(SH-28)进行了全基因组测序。利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分段扩增了SH-28分离株的18条cDNA片段,分别克隆于pGEM-T质粒载体并进行测序,用CLUSTX(1.8)和Lasergene软件进行序列的剪切和拼接,最终获得SH-28基因组序列全长为12 279个核苷酸(nt),开放阅读框(ORF)长11 685nt,编码3 895个氨基酸(aa),5′-UTR和3′-UTR分别长385nt和206nt。全基因组进化树结果表明,虽然SH-28与HLJ-10同处于一个分支上,但其与XJ-04的全基因组核苷酸同源性最高(92.3%),而与另外2株猪源BVDV-1(ZM-95、SD0806)的亲缘性较远(70.0%、70.1%)。5′-UTR进化树结果显示,SH-28分离株属于BVDV-2a2基因亚型,而HLJ-10和XJ-04株属于BVDV-2a1。由此,我们推测SH-28很有可能是由牛源BVDV-2进化而来的,但不同于已发表的BVDV-2分离株。; 陶洁王银廖金虎杨颖羊扬朱国强; 关键词：BVDV 同源性

细菌Ⅵ型分泌系统结构与调控的研究进展被引量：4: 2013年; VI型分泌系统(type VI secretion system,T6SS)具有转运效应蛋白分子到多种类型靶细胞的能力,广泛存在于革兰氏阴性菌,其结构复杂。当前T6SS结构模型表明其装置至少包含两个复合物:细胞膜跨膜相关装置和动态的噬菌体样结构。本文主要围绕T6SS分泌装置的结构、结构元件相互作用功能以及影响装置表达和活性的条件和信号来进行简要综述。; 姚丰华张钰朱国强

牛病毒性腹泻病毒基因2型代表株全基因组序列分析被引量：5: 2011年; 为了解我国牛病毒性腹泻(BVD)的分子流行病学情况,本研究对分离的3株牛病毒性腹泻病毒基因2型(BVDV-2)代表株全基因组进行序列分析,应用RT-PCR法分段扩增3株BVDV-2(XJ-04、SD-09和QH-09)的全基因组序列,共分为18个片段:A～Q以及5'-UTR和3'-UTR的部分序列。除5'-UTR和3'-UTR部分序列外,A～Q基因片段末端相互重叠。经序列拼接获得3株全基因组序列,全长均为12 284 bp。将测序结果与GenBank登录的瘟病毒科代表毒株序列、自我裂解酶(Npro)、结构蛋白(C、Erns、E1、E2)以及标准株BVDV-1 NADL和BVDV-2 890进行核苷酸以及氨基酸序列同源性分析。结果表明:XJ-04、SD-09和QH-09的全基因组序列同源性高于99.6%,3株BVDV-2分离株与890和NewYork93株亲缘关系最近,属于BVDV-2a亚型。在致细胞病变型的XJ-04、SD-09、QH-09株的NS2/3基因上无外源基因的插入。本研究分离的BVDV-2株为国内首次鉴定国内分离株全基因组序列,为我国BVD的分子流行病调查提供依据。; 林燕清朱礼倩陶洁孙宏进孟祥升王建业朱国强; 关键词：基因组测序系统进化分析

基于大肠杆菌受体菌DH5α △asd缺失株的构建及作为基因转化、表达操作系统的评估被引量：2: 2010年; 基于大肠杆菌(E.coli)染色体上asd基因的已知序列,利用λ噬菌体的Red同源重组系统一步法构建E.coliDH5α的asd基因缺失突变株DH5α△asd::cat,在二次重组中利用携带能够表达FLP位点特异性重组酶的质粒pCP20介导二次同源重组,以去除上述缺失突变株中氯霉素抗性筛选基因。结合PCR扩增和测序结果,证明DH5α△asd缺失突变株的正确构建。该缺失突变株失去了在普通LB培养基上生长的能力,只有添加DAP或导入表达asd基因的质粒(asd基因互补试验)才能在LB培养基上生长,与原型DH5α比较,其生长速度和生长对数期、接受不同拷贝数质粒的转化效率几乎相一致。基于该缺失突变株构建出以asd营养基因为标志的大肠杆菌染色体-质粒平衡致死系统。体外培养连续传代50代次,pnirBMisL-fedF-asd质粒不丢失,并功能性表达F18大肠杆菌黏附素FedF。; 原志伟朱晓芳朱春红朱军王建业朱国强; 关键词：受体菌 RED重组系统突变株

K88ac^+和K88ad^+产肠毒素大肠杆菌hlyA基因缺失株的构建及相关功能初步分析被引量：9: 2014年; 为研究产肠毒素大肠杆菌(ETEC)溶血素hlyA基因的相关生物学特性,本研究通过Red同源重组的方法构建了ETEC标准株K88ac+C83902和K88ad+C83903的hlyA基因缺失株。体外生长试验和酵解试验表明:缺失株C83902△hlyA和C83903△hlyA生长速度及生长周期各个阶段的特性与相应野生株相比无差异,其分解发酵糖类和氨基酸的能力也未发生改变。小鼠感染试验显示经野生株和回补株感染的小鼠致死率高,而缺失株不致死,表明hlyA基因可以增强ETEC对ICR小鼠的致病力。从感染小鼠的十二指肠、空肠、回肠分离感染的靶细菌,平板计数和PCR检测表明,ETEC在小鼠回肠的黏附能力强于在十二指肠和空肠,并且基因缺失株黏附能力比野生株显著降低。本研究首次对ETEC溶血素hlyA基因进行研究,为进一步阐释α-溶血素与机体相互作用的分子机制和ETEC的致病机制,以及预防ETEC感染提供了相关的实验依据。; 姜露聂佳佳杨样羊扬周明旭朱国强; 关键词：ETEC

产肠毒素大肠杆菌菌毛F4ac受体的研究进展被引量：4: 2014年; 仔猪腹泻是影响养猪业发展的一个重要疾病之一,其致死率占仔猪总死亡率的11.5%~29.5%。而产肠毒素大肠杆菌（ETEC）F4（或K88）是导致新生或断奶仔猪腹泻的重要病原菌,可引发仔猪黄痢、白痢、水肿病和断奶仔猪腹泻等多种疾病,并大肠杆菌F4致病性由两个因素决定。; 夏芃芃朱国强; 关键词：产肠毒素大肠杆菌断奶仔猪腹泻受体菌毛仔猪黄痢致死率

肠炎沙门氏菌SEF14菌毛单克隆抗体的制备及初步应用被引量：2: 2013年; 肠炎沙门氏菌现已成为全球性食品安全问题的主要病原之一。本试验基于肠炎沙门氏菌特异性SEF14菌毛,应用淋巴细胞杂交瘤技术成功制备了3株单克隆抗体杂交瘤细胞株,Western-blotting检测结果显示3株单克隆抗体均具有良好的特异性。同时,用制备的单抗建立了双抗体夹心间接ELISA方法,利用方阵滴定确定捕获抗体和SEF14蛋白的最佳工作浓度分别为8μg/ml和2μg/ml。用该方法检测100份鸡血清样本,59份为阳性,与肠炎沙门氏菌特异性基因片段sdfI的PCR符合率达93%。本试验建立的方法特异性强、灵敏性高,可用于临床诊断,在肠炎沙门氏菌特异性检测方面具有潜在的应用前景。; 段小丽董立伟张江英杨奕朱国强; 关键词：肠炎沙门氏菌单克隆抗体

肠炎沙门菌间接ELISA检测方法的建立被引量：3: 2010年; 本试验建立和优化了重组蛋白rSEFA介导的间接ELISA方法以特异性检测肠炎沙门菌感染血清。确定其抗原最佳包被量为7.5μg/mL,血清最适稀释度1∶100,作用时间为60 min;酶标二抗最适稀释度为1∶4 000,作用时间为60 min;判定标准为OD值≥0.346。基于rSEFA介导的间接ELISA有较好的特异性,能特异性识别肠炎沙门菌和都柏林沙门菌感染血清,不能识别相近的鸡白痢沙门菌感染血清,此方法与菌体凝集反应同时检测临床血清样品100份,二者阳性率分别为67%和54%,结果符合率为80.6%。这一方法的建立对肠炎沙门菌特异性抗体检测有潜在的应用前景。; 康孟佼朱春红蒋颖姚丰华吴娟段小丽朱国强; 关键词：肠炎沙门菌间接ELISA

细菌Ⅵ型分泌系统研究进展被引量：3: 2012年; 病原体在感染的过程中,不仅要努力寻找外在的基本营养物质,又要避免被宿主免疫系统清除。这些过程大多都依赖于某些特殊的蛋白质,这些蛋白质由细菌自身合成及释放,或存在于细菌表面,或释放到细菌的外环境中,或者是注入到宿主细胞内。; 周虹朱国强; 关键词：细菌分泌系统营养物质免疫系统病原体细胞内

细菌非编码小RNA研究进展被引量：2: 2014年; 细菌非编码小RNA（Small non-coding RNAs,sRNAs）是一类长度在40～500个核苷酸,通常位于细菌染色体基因间区转录但不编码蛋白的一类RNA分子.1967年,从大肠杆菌中分离出第一个sRNA-6SRNA,然而经历了30多年的时间才阐明其生物学功能.sRNAs广泛存在于生物界中,目前原核生物中以大肠杆菌和沙门菌中发现的sRNA数量最多,在霍乱弧菌、沙眼衣原体、产单核细胞李氏杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌以及产气荚膜梭菌中也均有发现.; 王勇祥孟霞孟宪臣聂佳佳朱国强; 关键词：小RNA 非编码金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌产气荚膜梭菌生物学功能

江苏省属高校自然科学基础研究项目(08KJA230002)

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