国家自然科学基金(30371659) 作品数:11 被引量:144 H指数:7 相关作者: 符立梧 梁永钜 丁岩 戴春岭 石智 更多>> 相关机构: 中山大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
三氧化二砷通过线粒体依赖性通路诱导喉癌细胞株及其耐药株细胞凋亡 被引量:17 2004年 背景与目的:三氧化二砷(arsenictrioxide,As2O3)已作为治疗实体瘤的新药应用于临床,但其作用机理仍不清楚。本研究拟探讨As2O3通过线粒体依赖性凋亡通路介导喉癌细胞及其耐药株细胞凋亡的作用。方法:采用MTT法测定As2O3对喉癌细胞KB及其耐药细胞KBv200的细胞毒作用;用AnnexinVFITC染色法检测凋亡早期细胞;细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)用DiOC6标记,流式细胞仪检测。结果:As2O3对KB及KBv200细胞的生长有明显的抑制作用,IC50分别为(0.22±0.02)μg/ml和(0.20±0.01)μg/ml。用AnnexinVFITC染色检测到As2O3呈时间依赖性介导细胞凋亡,2.5μg/mlAs2O3处理24h、48h,KB细胞凋亡率分别为(20.2±3.1)%和(52.2±11.0)%;KBv200细胞凋亡率分别为(15.8±1.3)%和(36.4±5.9)%。2.5μg/mlAs2O3作用于KB与KBv200细胞,ΔΨm降低呈时间依赖性。结论:ΔΨm降低在As2O3诱导喉癌细胞凋亡过程中起着重要的作用。 李艳芳 王旭东 梁永钜 陈黎明 丁岩 黄民 符立梧关键词:三氧化二砷 MTT 细胞凋亡 线粒体跨膜电位 大花紫玉盘素诱导肿瘤多药抗药性细胞凋亡及其机制 被引量:8 2006年 目的比较研究番荔枝内酯大花紫玉盘素(uvarigrin)诱导多药抗药性KBv200细胞及其亲本KB细胞凋亡及其机制。方法以MTT法进行细胞毒测定;用Annexin V FITC染色及流式细胞仪检测细胞凋亡。活性氧(ROS)测定以DCFH-DA标记,细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)测定用D iOC6标记,均以流式细胞仪检测。Caspase-9激活的测定用W estern b lotting法。结果大花紫玉盘素对KBv200细胞及其亲本KB细胞的生长均有明显的抑制作用;大花紫玉盘素不仅能介导KB细胞凋亡,而且也能介导KBv200细胞凋亡;大花紫玉盘素作用于KBv200细胞及其亲本KB细胞12,24和48 h,均引起ROS升高以及ΔΨm降低,而且呈时间依赖性。W estern b lotting方法分析显示Caspase-9被激活。结论大花紫玉盘素可能通过线粒体通路诱导细胞凋亡。 李艳芳 梁永钜 石智 陈黎明 丁岩 符立梧关键词:线粒体跨膜电位 多药抗药性 细胞凋亡 肿瘤多药耐药逆转剂的研究进展 被引量:58 2005年 肿瘤细胞产生的多药耐药(multidrugresistanceMDR)已成为当前影响肿瘤化学治疗疗效的主要障碍。尽管MDR产生机制复杂,但是由mdr1基因编码的P糖蛋白(PglycoproteinPgp)的过表达是产生MDR的主要原因。寻找低毒有效的MDR逆转剂是提高化疗疗效的一个重要方法,是化疗领域亟需解决的问题。 戴春岭 符立梧关键词:多药耐药 P-糖蛋白 逆转剂 肿瘤 荧光分光光度法检测裸鼠移植瘤组织中阿霉素浓度 被引量:4 2005年 目的建立裸鼠移植瘤组织中阿霉(Dox)素浓度的荧光分光光度法检测方法。方法建立KB、KBv200细胞裸鼠移植瘤模型,经鼠尾静脉给予不同剂量阿霉素,3h后,处死裸鼠,分离及匀浆肿瘤组织,用含0.3mol·L-1HCl的60%乙醇抽提,离心取上清液,用荧光分光光度计在λex/em为470/590nm测定其荧光值,通过标准曲线方程计算阿霉素浓度。结果样本扫描未见杂峰,日内精密度<6.4%,日间精密度小于5.7%,阿霉素于肿瘤组织匀浆中抽提回收率>75.9%,KB细胞移植瘤组织中阿霉素浓度为KBv200的2.53~4.54倍。结论本方法专属性高,快速、简便,结果准确可靠,适用于裸鼠移植瘤组织中Dox药代动力学研究。 梁永钜 吴兴平 石智 丁岩 陈黎明 王秀文 杨小平 符立梧关键词:荧光分光光度法 裸鼠移植瘤 阿霉素 凋亡抑制蛋白家族与肿瘤治疗的研究进展 被引量:9 2006年 王晓红 符立梧关键词:细胞凋亡 凋亡抑制蛋白家族 分子靶点 RNAi及其在肿瘤研究中的应用 被引量:19 2004年 RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)是指在生物体细胞内 ,外源性或内源性的双链RNA (double strandedRNA ,dsRNA)引起与其同源mRNA特异性的降解 ,因而抑制其相应的基因表达过程 .由于它能够高度特异性、高效性地抑制基因的表达 ,因此在研究基因功能及表达调控、信号传导通路、药物靶点的鉴定和基因药物开发等方面具有良好的应用前景 .主要介绍RNAi可能的分子机制、分子生物学特性。 石智 符立梧关键词:RNAI SIRNA 基因抑制 肿瘤 高效液相色谱法检测KB和KBv200细胞裸鼠移植瘤组织中阿霉素浓度 被引量:1 2008年 背景与目的:阿霉素是一种应用广泛的抗癌药物,肿瘤组织中阿霉素的浓度比血液浓度能更准确地反映其疗效。本研究采用肿瘤组织中阿霉素浓度的高效液相色谱检测法比较耐药KBv200细胞和敏感KB细胞裸鼠移植瘤组织中阿霉素的浓度。方法:建立KB、KBv200细胞裸鼠移植瘤模型,以高效液相色谱法检测肿瘤组织中阿霉素的浓度。色谱柱为反相BDSC18柱(250mm×4.6mm,ID5μm),流动相:乙腈/0.02mol/L磷酸二氢钾(1∶2.4,V/V,pH3.9);激发波长480nm,发射波长580nm;流速:1.0mL/min。结果:在所建立的色谱条件下,肿瘤组织中阿霉素的线性范围为29.3~7500ng/g,线性相关系数r=0.9998,最低检测浓度为14ng/g。在3750、468.8和117.2ng/g三个浓度的萃取回收率分别为(99.35±7.65)%、(99.79±5.73)%和(103.67±6.76)%,方法回收率分别为(91.89±7.03)%、(94.94±5.18)%、(100.83±5.32)%,日内及日间RSD均小于4.2%。在阿霉素注射后第1、3、5h,KBv200细胞裸鼠移植瘤组织中阿霉素的浓度分别为(139.32±54.68)、(260.00±126.11)和(173.26±13.88)ng/g,KB细胞裸鼠移植瘤组织中分别为(385.13±42.55)、(523.38±138.84)和(460.75±86.85)ng/g,在相同的时间点,KBv200细胞裸鼠移植瘤组织中阿霉素的浓度明显低于其敏感KB细胞株(P<0.05)。结论:采用高效液相色谱法测得耐药细胞肿瘤组织中抗癌药物的浓度低于相应的敏感细胞肿瘤组织。 邓文静 曾昭蕾 梁永钜 戴春岭 张建业 符立梧关键词:阿霉素 反相高效液相色谱 裸鼠移植瘤 反相高效液相色谱法检测小鼠血浆中FG020326方法的建立 被引量:5 2007年 目的建立测定多药耐药(multidrug resistance,MDR)逆转剂FG020326在KM小鼠血浆中血药浓度的方法。方法将KM小鼠(20.0~25.1)g随机分组,每组6只,♀♂各半,尾静脉注射,给药量为30mg·kg^-1,分时取血、处理。采用反相色谱柱,应用外标法测定FG020326在KM小鼠血浆中的血药浓度。结果在所建立的方法学下,FG020326的保留时间为7.9min;标准曲线为·↑Y=0.0144X-0.0285(r=0.9998),在162.5~41600μg·L^-1血浆浓度范围内呈良好的线性关系,最低检测浓度40μg·L^-1(S/N=3);在650、2600、20800μg·L^-1低、中、高3个浓度下的绝对回收率为68.66%~84.63%,相对回收率为92.58%~110.88%;日内及日间RSD均小于3.2%(n=5)。在室温及冷冻-解冻试验中,FG020326具有良好的稳定性,RSD分别小于1.3%和6.0%。尾静脉单次给药后,FG020326在体内过程符合二室模型,T1/2α为0.088h,T1/2β为5.33h,AUC0-∝。为14183h·μg·L^-1,Vd为0.37L。结论该方法快速、准确、简便,能够满足FG020326药代动力学研究要求。 戴春岭 李苏 梁永钜 廖海 邓文静 闫琳 符立梧关键词:药代动力学 反相高效液相色谱 多药耐药 叠氮甲基蒽醌衍生物诱导KB细胞及其耐药株细胞的凋亡 被引量:10 2005年 目的 研究大黄素的蒽醌衍生物 6 叠氮甲基 1 羟基 3, 8 二甲氧基 9, 10 蒽醌 (AMAD 10)抑制KB细胞及其耐药株KBv200的生长和诱导细胞凋亡的作用。方法 细胞毒用MTT法测定;细胞内活性氧(ROS)和线粒体跨膜电位(ΔΨm)分别用DCFH DA和DiOC6荧光探针标记,流式细胞仪检测;AnnexinV染色和DNA琼脂糖凝胶电泳检测AMAD诱导凋亡作用。结果 AMAD浓度依赖性抑制KB和KBv200细胞的生长和引起活性氧明显增加,并能引起两种细胞ΔΨm时间依赖性的降低,AMAD可浓度依赖性地诱导两种细胞凋亡。结论 AMAD体外显著抑制KB及其耐药株KBv200的生长,这可能与其引起细胞内ROS增加、使ΔΨm降低,从而诱导细胞凋亡有关。 丁岩 何丽容 曹卡加 陆豫 古练权 符立梧关键词:活性氧 线粒体跨膜电位 细胞凋亡 建立一种测定细胞色素P450 3A4活性的方法 被引量:5 2006年 目的 建立一种细胞色素P450 3A4(cytochrome P450 3A4,CYP3A4)活性定量的新方法.方法 将CYP3A4底物硝苯地平与人肝微粒体进行体外温孵,以高效液相色谱法测定硝苯地平及其氧化产物,以甲醇-水(64:36)为流动相,流速为0.5 mL·min^-1,检测波长为254 nm.结果 在所建立的HPLC条件下,硝苯地平及其氧化产物的出峰时间分别在8.44和6.15 min,能够完全分离,且无其他生物基质峰干扰;氧化硝苯地平在人肝微粒体的最低检测限为25μg·L-1(S/N=3),线性范围是0.25~32 mg·L^-1(r=0.999 4),符合检测要求;在0.5,4.0,20.0 mg·L^-1时的萃取率分别为(67.05±3.49)%,(66.63±3.60)%,(67.08±2.78)%(n=5);方法回收率分别为(100.17±6.97)%,(91.96±3.71)%,(96.55±3.98)%(n=5);日内及日间RSD均小于7%.结论 本实验所建立的HPLC能够准确、快速检测出硝苯地平及其在人肝微粒体中的氧化产物,能够对CYP 3A4活性进行快速评价,适合于体外药物代谢动力学研究和第三代多药抗药性逆转剂的筛选. 戴春岭 李苏 梁永钜 廖海 闫琳 符立梧关键词:细胞色素P4503A4 硝苯地平 高效液相色谱法 肝微粒体 代谢