国家自然科学基金(30371683)
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
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- 利用DNA重组技术构建产生多聚甘露糖醛酸的突变菌株被引量：1
- 2006年
- 本文旨在以海洋细菌Pseudomonas sp．QDA褐藻多糖（alginate）生物合成操纵元中的algG基因为靶点，利用DNA重组技术改建褐藻多糖的生物合成途径，以期获得产生甘露糖醛酸的突变菌株。首先，利用PCR克隆幽G基因两侧大小分别为1．7kb和1．8kb的DNA片段作为同源片段，用编码Gm抗性的aacCl基因替换algG基因，构建成打靶载体pEX100TUDG。将打靶载体转入QDA，利用Gm抗生素和蔗糖为选择压力进行培养，通过PCR和Southern杂交验证，获得了突变菌株。^1H—NMR、PAGE和GPC分析发现，突变菌株胞外产物为多聚甘露糖醛酸。该突变菌株的获得丰富了具有较高药物开发价值的甘露糖醛酸的来源，为褐藻多糖途径工程的进一步研究提供了理论依据和技术支持。
- 沈洪波韩峰林育姿韩文君于文功
- 关键词：假单胞菌
- 褐藻多糖高产菌株的构建
- 2006年
- Pseudomonassp.QDA是从海水中发现的产生褐藻多糖的细菌,无致病性。为提高QDA菌株褐藻多糖的产量,本文利用PCR克隆了粘性菌株P.aeruginosaFRD1的algT基因,连接入质粒pMF36-Kan,构建了重组表达载体pMF36-Kan-algT。利用三亲接合法将pMF36-Kan-algT转入菌株QDA中。糖醛酸含量测定结果表明,algT基因过量表达菌株的褐藻多糖产量比出发菌株QDA平均提高了3.3倍,其中菌株A25提高了4.5倍。通过培养条件的进一步优化,A25菌株的褐藻多糖产量与菌株QDA相比提高到8.18倍。
- 沈洪波韩峰林育姿王传宁于文功
- 关键词：假单胞菌
- 应用硫酸苯酚法建立一种甘露糖醛酸C-5差向异构酶活性检测方法的研究
- 2007年
- 建立了一种简便快捷的甘露糖醛酸C-5差向异构酶活性的测定方法。研究发现相同分子质量的聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸与苯酚硫酸试剂反应后显色程度不同,以此可以用来测定β-D-甘露糖醛酸/α-L-古罗糖醛酸(M/G)值的变化,从而计算甘露糖醛酸C-5差向异构酶的活性。利用本方法测定了已知结构的褐藻胶片断的M/G比,其结果与传统的1H-NMR测定值基本一致。
- 林育姿宫倩红张真庆韩峰于文功
- 富含古罗糖醛酸的褐藻多糖生产菌株的构建
- 2008年
- 为获得古罗糖醛酸(Guluronate)含量高的细菌胞外褐藻多糖,利用PCR从海洋细菌Pseudomonassp.QDA中克隆了其甘露糖醛酸C-5差向异构酶基因(algG),连接入质粒pMF 54Km,构建了重组表达载体pMF54 Km-algG。利用三亲接合法将pMF54 Km-algG转入菌株QDA中,获得algG过量表达重组菌株QDA-G1。H-NMR测定结果表明,QDA-G所产的褐藻多糖中β-D-甘露糖醛酸(M)与它的C-5差向异构体α-L-古罗糖醛酸(G)的比值为0.38,G的质量分数达到74.2%,比野生菌株QDA提高了26.4%。且重组菌株遗传稳定性良好,连续传代20代后,M/G的比值无明显变化。
- 胡斌韩峰林育姿宫倩红于文功
- 关键词：假单胞菌
