云南省社会发展科技计划(2009ZC189M)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：董俊段纲张利仙艾军叶玲玲更多>>
- 相关机构：云南出入境检验检疫局云南农业大学昆明理工大学更多>>
- 发文基金：云南省社会发展科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 猪流感H1N1亚型NP基因杆状病毒表达载体构建及其在昆虫细胞中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的获得研发A型猪流感病毒ELISA检测试剂盒和制备NP蛋白单克隆抗体的抗原物质。方法根据已报道的猪流感病毒H1N1亚型NP基因序列(GenBank登录号:GQ422386)人工合成NP基因,通过XbaⅠ和EcoRⅠ特异性酶切,将NP基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTB,经PCR、酶切、测序鉴定后,获得携带NP基因的重组质粒pFast-BacHTB-NP。该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,经抗生素、PCR筛选,获得转座的杆粒Bac-mid-NP。在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白。结果通过SDS-PAGE和Westernblotting分析表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物活性,大小约为57KD。结论实验结果表明已成功构建了携带NP基因的重组质粒pFastBacHTB-NP和转座的杆粒Bacmid-NP,转染后在sf9昆虫细胞上成功的表达。
- 段博芳张利仙段纲董俊叶玲玲周晓黎徐志斌艾军
- 关键词：H1N1NP基因昆虫细胞
