贵州省卫生厅科学技术基金(gzwkj2008-1-002)
- 作品数：4 被引量：17H指数：3
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- 亚砷酸钠对人皮肤角质形成细胞MGMT基因组蛋白乙酰化及转录与表达的影响被引量：4
- 2011年
- [目的]了解不同剂量亚砷酸钠(NaAsO_2)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)中O^6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)基因组蛋白乙酰化调控、mRNA转录及蛋白表达的影响。[方法]以25.00、12.50、6.25、3.13μmol/LNaAsO_2重复间隔处理HaCaT细胞72h(NaAsO_2处理24h,隔天再次用NaAsO_2进行相同的处理,重复处理3次)。定量染色质免疫沉淀技术(Q-ChIP)检测MGMT基因转录调控区(ChIP1、ChIP2区域)及MGMT基因编码区(ChIP3区域,对照区域)组蛋白乙酰化修饰水平;实时荧光定量PCR(Q-PCR)和免疫印迹分析分别检测MGMT基因的mRNA转录和蛋白表达。设不染毒的HaCaT细胞为空白对照(0.00μmol/L),人表皮鳞癌细胞株A431为阳性对照。[结果]0.00、3.13、6.25、12.50、25.00μmol/L NaAsO_2处理细胞中,MGMT基因转录调控区ChIP1区域的组蛋白H3K9乙酰化水平分别为176.68±8.50、175.71±18.14、161.26±16.28、146.23±24.00和82.64±33.87,差异有统计学意义(F=28.809,P<0.05);组蛋白H4乙酰化水平分别为183.59±11.98、180.84±24.10、166.52±5.48、156.87±10.64和103.42±7.04,差异有统计学意义(F=36.493,P<0.05)。ChIP2区域的组蛋白H3K9乙酰化水平分别为171.11±16.54、167.55±8.97、156.51±8.59、135.88±16.55和82.01±3.96,差异有统计学意义(F=49.626,P<0.05);组蛋白H4乙酰化水平分别为117.23±16.21、143.29±10.59、135.87±7.44、105.48±7.56和78.79±6.92,差异有统计学意义(F=25.438,P<0.05)。编码区ChIP3区域的组蛋白H3K9乙酰化水平分别为37.53±6.23、35.57±5.85、40.81±4.45、42.18±1.23和41.87±5.71,差异无统计学意义(F=2.341,P>0.05);组蛋白H4乙酰化水平分别为40.78±2.42、38.56±4.66、39.47±2.88、33.13±3.48和31.48±4.99,差异无统计学意义(F=3.027,P>0.05)。MGMT基因mRNA转录相对表达量分别为1.19829±0.15997、1.51831±0.18054、1.42522±0.18039、1.01454±0.09679和0.88772±0.02000,差异有统计学意义(F=37.359,P<0.05);MGMT蛋白相对表达量分别为1.066 19±0.06124、1.17447±0.
- 潘雪莉张爱华
- 关键词：MGMT基因组蛋白乙酰化MRNA转录HACAT细胞
- 亚砷酸钠对HaCaT细胞MGMT基因甲基化和mRNA及蛋白表达水平的影响被引量：7
- 2011年
- 目的 了解不同剂量亚砷酸钠（NaAsO2）处理的人皮肤角质形成细胞（HaCaT细胞）中MGMT基因甲基化特征,以及MGMT基因甲基化对其转录和表达的调控.方法 以3.13、6.25、12.50、25.00 μmol/L NaAsO2重复间隔处理HaCaT细胞72 h.硫化测序PCR（BSP）检测MGMT基因转录起始点-329～＋93甲基化热点区域,实时荧光定量PCR（Q-PCR）及免疫印迹分析（Westem blotting）检测MGMT基因的mRNA及蛋白表达.设不染毒的HaCaT细胞为空白对照,人表皮鳞癌细胞株A431为阳性对照.结果 3.13、6.25、12.50、25.00μmol/L NaAsO2处理组,MGMT基因启动子区DNA甲基化水平分别为0.63%（1/160）、6.25%（10/160）、10.63%（17/160）和18.75%（30/160）.且甲基化的CpG位点主要位于转录起始点-249～-146区域,空白对照组未检出甲基化,组间比较差异有统计学意义（x2=76.687,P〈0.05）;3.13、6.25、12.50、25.00 μmol/L NaAsO2处理组MGMT mRNA相对表达量分别为1.518 31±0.180 54、1.425 22±0.180 39、1.014 54 ±0.096 79、0.887 72 ±0.020 00,与空白对照组（1.198 29±0.159 97）比较,差异有统计学意义（F=37.359,P〈0.05）;3.13、6.25、12.50、25.00 μmol/L NaAsO2处理组MGMT蛋白相对表达量分别为1.174 47±0.064 75、0.848 83 ±0.057 01、0.471 63±0.023 34、0.240 34±0.014 43,与空白对照组（1.066 19±0.061 24）比较,差异有统计学意义（F=20.687,P〈0.05）.结论 砷通过导致MGMT基因启动子区CpG岛高甲基化.抑制MGMT基因mRNA转录及蛋白表达,是砷致皮肤损害的重要机制之一.
- 潘雪莉张爱华
- 关键词：基因蛋白质类
- 亚砷酸钠对HaCaT细胞中DNMT1、HDAC1基因mRNA转录及蛋白表达的影响被引量：6
- 2011年
- 目的了解不同剂量的亚砷酸钠(NaAsO2)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)中DNA甲基转移酶1(DNMT1)、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)基因mRNA转录和蛋白表达的影响。方法分别以0、3.13、6.25、12.5和25μmol/L NaAsO2溶液重复间隔处理HaCaT细胞72 h(NaAsO2处理24 h,隔天再次进行相同处理,共处理3次),以实时荧光定量PCR(Q-PCR)技术检测DNMT1及HDAC1基因的mRNA转录,以免疫印迹分析(western blotting)检测DNMT1及HDAC1蛋白表达。以人表皮鳞癌细胞株A431作为阳性对照。结果细胞经0、3.13、6.25、12.5和25μmol/L NaAsO2溶液处理后,DNMT1 mRNA转录相对表达量分别为0.650 90±0.174 05,0.930 53±0.145 56,0.752 93±0.244 62,0.558 11±0.051 02和0.370 17±0.088 4,差异有统计学意义(F=6.539,P<0.05);HDAC1 mRNA转录相对表达量分别为2.021 80±0.179 57,1.496 98±0.107 55,1.303 24±0.152 08,1.037 75±0.204 88和0.816 74±0.153 12,差异有统计学意义(F=17.914,P<0.05)。DNMT1蛋白相对表达量分别为0.000 87±0.000 10,0.026 04±0.002 63,0.283 19±0.072 62,0.842 61±0.082 39和1.579 87±0.200 83,差异有统计学意义(F=27.799,P<0.05);HDAC1蛋白相对表达量分别为0.034 65±0.012 03,0.273 65±0.012 02,0.634 90±0.239 76,0.775 03±0.126 51和1.126 16±0.167 52,差异有统计学意义(F=9.820,P<0.05)。结论 DNMT1和HDAC1蛋白的高表达是砷致皮肤损害的重要分子事件,这为进一步应用其抑制剂探索砷中毒的防治提供了可能。
- 潘雪莉张爱华
- 关键词：DNA甲基转移酶1组蛋白去乙酰化酶1MRNA转录蛋白表达HACAT细胞
- 5-氮杂-2'-脱氧胞苷和曲古抑酶素A对亚砷酸钠处理细胞中DNMT1和HDAC1基因转录及表达的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-AZA-dC)和曲古抑酶素A(TSA)对亚砷酸钠(NaAsO2)处理的人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)中DNA甲基转移酶1(DNMT1)、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)基因mRNA转录和蛋白表达的影响。方法以25μmol/L NaAsO2重复间隔染毒HaCaT细胞72 h(25μmol/L NaAsO2处理24 h,隔天再次进行相同处理,共处理3次),再分别以1.5、3.0、6.0μmol/L 5-AZA-dC作用于NaAsO2处理细胞72 h,125、250、500 nmol/L TSA作用于NaAsO2处理细胞48 h,以实时荧光定量PCR(Q-PCR)技术检测DNMT1及HDAC1基因的mRNA转录,以免疫印迹分析(western blotting)检测DNMT1及HDAC1蛋白表达。设不进行任何处理的细胞为空白对照,仅染砷的细胞为阳性对照。结果 1.5、3.0、6.0μmol/L 5-AZA-dC作用于NaAsO2处理细胞后,DNMT1及HDAC1 mRNA转录相对表达量与仅染砷的阳性对照比较,差异无统计学意义;DNMT1蛋白相对表达量降低,与仅染砷的阳性对照比较,差异有统计学意义(P<0.05);HDAC1蛋白相对表达量与仅染砷的阳性对照比较,差异无统计学意义。125、250、500 nmol/L TSA作用于NaAsO2处理细胞后,DNMT1及HDAC1 mRNA转录相对表达量与仅染砷的阳性对照比较,差异无统计学意义;DNMT1及HDAC1蛋白相对表达量降低,与仅染砷的阳性对照比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 5-AZA-dC能抑制砷所致的DNMT1蛋白高表达,TSA能抑制砷所致的DNMT1及HDAC1蛋白高表达,这为进一步探索砷中毒的表观遗传学治疗提供了科学依据。
- 潘雪莉张爱华
- 关键词：HACAT细胞
