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致密化相关基因在动物胚胎发育过程中的作用研究进展被引量：1: 2008年; 桑椹胚致密化是早期胚胎发育过程中的关键步骤,与胚胎质量密切相关。已有研究发现体内外发育的胚胎表现明显不同的致密化过程,缝隙连接蛋白、上皮钙调素蛋白基因的表达也有差异。本文针对致密化相关基因在胚胎早期发育过程中的作用及一些影响因素的研究进展进行综述。; 黄时海薛林涛黄华石德顺李湘萍

HPLC—ELSD法测定维生素D_3和光转化异构体被引量：2: 2010年; 为测定维生素D3及其它光转化异构体,研究确定了HPLC-ELSD测定的色谱分离条件：KromasilC18柱（4.6×250mm,5μm）,流动相为体积比90∶10甲醇一水溶液,流速1.2mL/min,蒸发光散射检测器漂移管温度为80℃,气体流量1.8L/min。在此条件下,各组分得到有效地分离,色谱峰面积的自然对数与浓度的自然对数呈良好的线性关系（r〉0.997）,精密度RSD为1.25%-2.01%,最低检测限为0.05-0.3μg,回收率测定值为98.3%-101.8%。; 黄时海汪晟康超夏小斌何鑫平李灿明李湘萍; 关键词：蒸发光散射检测器维生素D3

水牛缝隙连接蛋白43基因克隆及表达被引量：2: 2013年; 本研究克隆了水牛缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)基因序列,并运用生物信息学方法对其核苷酸序列的保守性和氨基酸的理化性质、蛋白质结构进行了系统分析,对Cx43基因在水牛不同组织和不同发育阶段卵泡中的表达差异进行了检测。结果表明,应用RT-PCR技术克隆获得了水牛Cx43基因序列,其中编码区全长1152 bp,编码383个氨基酸,蛋白质理论分子质量43.13 ku,等电点为8.88。多重序列比对结果显示,水牛Cx43核苷酸序列与牛、羊、猪、马和人相应序列的同源性分别为99%、98%、94%、93%和92%,系统进化树分析结果推测,Cx43基因在不同物种进化过程中具有高度保守性;对水牛Cx43蛋白的二级和三级结构分析发现,其具有缝隙连接蛋白的特有结构。定量RT-PCR结果显示,Cx43在水牛卵巢组织中相对表达量最高,睾丸、肾脏、心脏和皮肤次之,肝脏和大脑表达量较低。免疫组化结果发现,Cx43蛋白表达随卵泡发育时期的不同而变化,Cx43蛋白随卵泡发育表达逐渐增强。; 林浪龚云王梦屈春凤黄时海雷小灿石德顺李湘萍; 关键词：水牛克隆

荧光定量PCR分析水牛胚胎致密化相关基因表达方法的建立: 2010年; 胚胎致密化是哺乳动物早期胚胎发育过程中一个非常重要的环节,有研究发现致密化相关基因的表达水平与体外发育胚胎的质量之间存在着相互关联作用。为了分析水牛胚胎早期发育中致密化相关基因在mRNA水平上的表达并确定其定量分析方法,本研究根据黄牛有关基因序列设计了Cx43、Cx31、E-cad以及组蛋白基因(Histone H2A)引物序列,分析了黄牛和水牛致密化基因的同源性,并确定各目的基因在水牛胚胎的SYBR Green I实时定量PCR反应条件。; 黄时海薛林涛黄华石德顺李湘萍; 关键词：荧光定量PCR 水牛胚胎

HPLC—ELSD法测定麦角固醇和光化学异构体被引量：1: 2009年; 为测定麦角固醇和维生素D2及其他光化学异构体，研究确定了HPLC—ELSD测定的色谱分离条件：KromasilC18柱（4．6×250mm，5μm），流动相为体积比95：5甲醇-水溶液，流速1．3ml／min，蒸发光散射检测器漂移管温度为75℃，气体流量1．6L／min。在此条件下，各组分得到有效地分离，麦角固醇和维生素D2色谱峰面积的自然对数与浓度的自然对数呈良好的线性关系（r〉0．997），精密度RSD为1．89％～2．75％，最低检测限为0．05--0．1μg，回收率测定值为101．4％～102．8％。; 黄时海夏小斌汪晟李灿明吴孔阳陈桂光梁智群李湘萍; 关键词：蒸发光散射检测器麦角固醇维生素D2

水牛体外受精早期胚胎致密化基因mRNA表达水平分析: 胚胎致密化是哺乳动物早期胚胎发育过程中一个非常重要的环节,有研究发现致密化相关基因的表达水平与体外发育胚胎的质量之间存在着相互关联作用。为了研究致密化相关基因在水牛体外培养早期胚胎中的mRNA表达情况,首先根据黄牛有关基...; 黄时海孙洪亮康超陆凤花石德顺李湘萍; 文献传递

生物法合成7-脱氢胆固醇研究进展被引量：6: 2009年; 化学合成维生素D3工艺虽然成熟,但有着本身难以解决的问题。酶促生化反应具有专一性强、条件温和、反应速度快、效率高等特点。本文主要阐述以生物合成维生素D3的原体-7-脱氢胆固醇几种方法,一种是以角鲨烯、醋酸盐为底物,通过动物肝脏微粒体酶生物合成7-脱氢胆固醇;另一种是利用螃蟹许多器官的酶能将胆固醇转化成维生素D3的原体-7-脱氢胆固醇。同时还论述了7,8-胆固醇脱氢酶的克隆与表达,就有关的研究进展、重要基因的克隆表达、技术的应用前景进行了综述。; 夏小斌吴孔阳李湘萍陈桂光梁智群黄时海; 关键词：生物合成

水牛体外培养早期胚胎中致密化相关基因mRNA的表达分析被引量：1: 2010年; 为了研究致密化相关基因在水牛体外培养早期胚胎中的mRNA表达情况,采用Taqman探针法和SYBR GreenⅠ染料法分别分析了缝隙连结蛋白43和31(Cx43、Cx31)、上皮钙调素蛋白(E-cad)3个基因在水牛体外成熟卵母细胞及培养的早期胚胎中的mRNA表达。结果发现,Cx43基因在水牛成熟卵母细胞中表达量最高,显著高于后3个发育阶段(P<0.05);Cx31基因mRNA表达趋势与Cx43相反,成熟卵母细胞中表达量最低,囊胚期最高,随体外胚胎发育Cx31mRNA表达量逐渐增高;E-cad基因在体外培养的各阶段胚胎中mRNA表达无显著差异(P>0.05)。以上结果表明,3个致密化相关基因在水牛体外培养早期胚胎中均有表达,但是具有明显不同的mRNA表达方式。; 黄时海孙洪亮康超陆凤花石德顺李湘萍; 关键词：荧光定量PCR 水牛

转染方法对肌肉生长抑制素基因敲除载体转染效率的影响被引量：1: 2007年; 本研究主要探讨转染方法对不同细胞系的转染效果。实验采用电穿孔和脂质体转染方法,将线性化的绵羊肌肉生长抑制素基因(myostatin)药物正负筛选(PNS)打靶载体pLoxp-1.4K-4.3K DNA导入体外培养的绵羊胎儿和成年绵羊耳部成纤维细胞中,而后采用G418和GANC进行药物抗性细胞克隆筛选和培养。结果发现,脂质体法对myostatin基因敲除载体的转染效果明显优于电击法,但电穿孔法对细胞类型的依赖性较小;采用与载体基因型相同的细胞系,两种转染方法的转染效率均略高于对照成年绵羊成纤维细胞系。; 李湘萍黄时海石德顺李宁; 关键词：脂质体法电穿孔法肌肉生长抑制素基因基因敲除

链球菌分批发酵生产透明质酸及其动力学研究进展: 2010年; 透明质酸(HA)是一种具有特殊生理功能的高分子糖,在医药和化妆品工业中有着广泛的应用。本文综述了近年来透明质酸发酵研究的一些进展,并介绍了分批发酵中不同初糖浓度,pH,搅拌转速对菌体生长和产物形成过程的影响及透明质酸发酵动力学模型。; 康超杨洋李湘萍何鑫平黄时海; 关键词：兽疫链球菌 HA 动力学

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