国家自然科学基金(30660136)
- 作品数：6 被引量：16H指数：3
- 相关作者：马学恩周建华刘霄卉罗军荣余群英更多>>
- 相关机构：内蒙古农业大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所江西农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室开放课题基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学理学更多>>
- 羊Ⅱ型肺泡上皮细胞的分离培养及鉴定被引量：1
- 2009年
- 为改进羊肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离和培养技术,本研究采用IgG黏附法结合磁化树脂微粒法分离纯化了山羊肺泡Ⅱ型上皮细胞,碱性磷酸酶染色检查表明Ⅱ型细胞占90%以上,台盼蓝染色活细胞为95%以上。羊肺泡Ⅱ型上皮细胞分离纯化方法的建立,为今后体外分离培养绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的探索性工作奠定了基础,也为研究肺纤维化及肺癌发病机理等重大课题提供了重要的技术支持。
- 罗军荣余群英刘霄卉高华武志红周艳喜周建华马学恩
- 绵羊肺腺瘤病特异性PCR及套式PCR诊断方法的建立被引量：5
- 2009年
- 绵羊肺腺瘤是由外源性反转录病毒JSRV引起的接触性传染的肺肿瘤性疾病。感染羊没有针对JSRV的循环抗体,但在感染羊的肺肿瘤组织、淋巴网状系统及外周血单核细胞中可检测到外源性前病毒exJSRV及JSRV转录产物。健康羊基因组中存在15~20拷贝的内源性前病毒enJSRV,内外源性前病毒的结构基因高度相似,而在U3区存在差别,因而,设计了针对exJSRVU3区的特异性引物并在国内首次建立了一步法特异性PCR检测法及套式PCR检测法。以700ng健康羊基因组DNA为背景,梯度稀释阳性质粒pJSRV-LTR作为模板,比较两种方法的敏感性,结果表明套式法的敏感性是一步法的10倍以上,套式法也是目前可用于检测感染羊血液样品的唯一方法,可望在绵羊肺腺瘤病的流行病学调查及防控方面起重要作用。
- 罗军荣刘霄卉余群英张淑琴周建华马学恩
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒套式PCR
- 自然感染绵羊肺腺瘤病和绵羊进行性肺炎病例肺脏的病理组织学观察被引量：3
- 2011年
- 绵羊肺腺瘤病(ovine pulmonary adenomatosis,OPA)和绵羊进行性肺炎(ovine progressive pneumonia,OPP)是改良绵羊很容易发生的两种呼吸系统疾病,两者都可引起明显的肺脏病变。为了从病理组织学变化上对这两种疾病加以鉴别,分别描述了OPA和OPP自然病例肺脏的眼观病变,采集OPA和OPP病死羊的肺脏,制成石蜡切片,经HE染色后,在光学显微镜下观察、拍照,并记录病理形态学变化。
- 于立新敖双捷幺宏强马学恩
- 关键词：绵羊肺腺瘤病绵羊进行性肺炎病理组织学诊断
- 人工感染绵羊肺腺瘤病毒内蒙株羔羊的临床病理学研究被引量：2
- 2009年
- 试验旨在探讨试验性感染绵羊肺腺瘤病毒内蒙株(jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV-NM)对羊的淋巴细胞亚群、淋巴细胞凋亡、血气指标的影响。用含JSRV-NM株的病毒悬液1 mL气管内接种1日龄羔羊,对人工感染羊进行了临床症状观察、血液学检查、病理生理学的系统病理学研究。在不同时段用流式细胞仪检测外周血中淋巴细胞及其亚群的动态变化及淋巴细胞凋亡情况。同时,对血液做血气分析和血清酶的检测。人工感染羔羊均出现了一些轻微的绵羊肺腺瘤病(sheep pul-monary adenomatosis,SPA)临床症状。SPA攻毒组感染JSRV-NM株后前60 d,外周血中CD4+、CD8+T细胞保持较高水平;到感染后90 d呈现下降趋势。对淋巴细胞凋亡检测的结果显示,在感染JSRV-NM株前60 d,凋亡细胞都保持较高水平;而感染第90天后,晚期细胞凋亡显著低于对照组。血气分析结果显示,阴离子隙(AnGap)、细胞外液碱剩余(BE(ecf))、氯离子浓度(Cl-)、氧分压p(O2)、实际碳酸氢根(HCO3act)、标准碳酸氢根(HCO3std)、二氧化碳总量(TCO2)、氧饱和度(O2SAT)、氧含量(O2CT)9项在不同时期与对照组存在显著差异。接毒羔羊尚未发生SPA的典型症状,但试验羔羊的病情已经出现,处于SPA疾病的早期表现;病羊在感染JSRV-NM病毒株后,在一定时期内,血液中CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞的变化是SPA病羊在疾病过程中细胞免疫和淋巴细胞受损的重要表现之一;外周血淋巴细胞会呈现不同程度的凋亡,JSRV-NM株诱导机体免疫细胞凋亡是一种重要的临床表现;本试验结果初步证明,血气分析方法在临床诊断绵羊肺腺瘤病时有一定的参考价值。
- 武志红么宏强马学恩
- 关键词：绵羊肺腺瘤病血气分析流式细胞术
- JSRV衣壳蛋白单克隆抗体的制备及免疫学鉴定被引量：5
- 2009年
- 经纯化的JSRV-CA融合蛋白乳化后免疫Balb/c小鼠,四免后,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞经杂交瘤技术进行融合.最终获得了三株稳定分泌单克隆抗体的细胞系.同时,分段克隆绵羊肺腺瘤病毒ca基因并构建原核表达质粒,在E.coliBL21中诱导表达.以获得的三株抗JSRV-CA蛋白的单克隆细胞分泌的McAb为一抗,应用Western blot对分段表达的CA蛋白进行肽探针扫描,初步鉴定了三株单抗识别的线性表位,并应用非竞争性ELISA法测定了三株单抗的功能性亲和常数.为建立特异性的病原诊断方法、分析CA蛋白的功能及疫苗设计奠定了基础.
- 罗军荣斯日古楞刘霄卉周建华马学恩
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒表位衣壳蛋白抗体亲和力单克隆抗体
- 绵羊ras基因第一、二外显子的扩增及序列测定
- 2011年
- 对JSRV感染羊及健康绵羊H-ras、N-ras、K-ras基因第一、二外显子区克隆并测序,研究其变异状况。方法:本研究从JSRV感染羊及健康绵羊肺组织中提取基因组DNA,应用PCR技术扩增Hras、Nras、Kras基因第一、二外显子序列,并通过T-A克隆的方法将其克隆入pMD-18T载体中,鉴定为阳性的重组质粒进行序列测定分析。结果:与其他物种ras基因相比,所克隆的ras基因与其他物种之间的差异率较小,基本保守,且与牛的ras基因同源性最高。所克隆的H-ras、K-ras基因在第一、二外显子区域序列完全相同;N-ras第81位氨基酸A-V的不同;但试验中检测的2例JSRV感染羊与健康绵羊的ras无论是在核酸水平上,还是在氨基酸水平上均未发现突变。结论:克隆测序了绵羊ras基因第一、二外显子,为下一步实验奠定了基础。
- 刘霄卉于立新刘畅周建华马学恩
- 关键词：RAS基因克隆
