目的构建丙肝核心抗原-CD40L胞外段融合蛋白真核表达载体,并探讨其免疫原性。方法应用基因重组技术在原有载体的基础上构建真核表达载体pcDNA3.1-core-CD40L并加以鉴定。该表达质粒肌肉内注射免疫小鼠,ELISA法检测小鼠外周血中抗丙肝核心抗体,流式细胞仪检测小鼠外周血T淋巴细胞亚型,real time PCR法检测外周血单个核细胞内细胞因子,CTL杀伤实验检测小鼠脾淋巴细胞的杀伤活性。结果构建了真核表达载体pcD-NA3.1-core-CD40L,该载体能诱发小鼠产生高滴度的抗丙肝核心抗原的抗体,流式和real time结果证实该质粒能诱使小鼠T淋巴细胞由T0期向Th1和Th2转换,并以Th1为主,CTL杀伤结果显示该表达质粒能诱使小鼠产生高水平的细胞杀伤能力。结论成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-core-CD40L,该质粒能够在小鼠体内正确表达,并能诱发高水平的细胞杀伤活性。
目的研究甲状腺乳头状癌组织中ECRG4基因的表达水平,及ECRG4在甲状腺乳头状癌中的作用。方法收取甲状腺乳头状癌组织30例作为病例组,选取相对应的20例正常甲状腺组织作为对照组,通过实时荧光定量PCR法(QRT-PCR)以及免疫组织化学法,检测ECRG4基因及其蛋白在甲状腺组织中的表达情况。结果 QRT-PCR检测结果显示,ECRG4 m RNA在甲状腺乳头状癌中呈现高表达,其表达水平明显高于对照组(P<0.01);免疫组织化学结果也显示,甲状腺乳头状癌中ECRG4蛋白呈现出高表达,显著高于对照组(P<0.01)。结论甲状腺乳头状癌组织中ECRG4基因及其蛋白呈现高表达,ECRG4在甲状腺乳头状癌中可能为一个促癌基因,其在甲状腺癌的发生及发展过程中起着重要作用。
