国家自然科学基金(30660168)
- 作品数：21 被引量：44H指数：5
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- 亚洲带绦虫和牛带绦虫实验感染乳猪后肝脏细胞凋亡的研究被引量：2
- 2012年
- 目的观察亚洲带绦虫和牛带绦虫实验感染乳猪后不同时间囊尾蚴寄生处肝组织细胞凋亡的情况。方法分别驱虫获取贵州省都匀市和从江县的人源亚洲带绦虫和牛带绦虫,收集虫卵。20日龄三元杂交乳猪(Duroc-Yorkshire-Landrace株)19头,随机分为亚洲带绦虫实验组6头、牛带绦虫实验组8头和对照组5头,两实验组以定量虫卵15万个/头灌胃感染。于感染后第15、32、46和74天处死,取两实验组囊尾蚴寄生处的肝组织和对照组肝组织,常规病理切片,苏木素-伊红(HE)染色法观察组织病理变化,原位末端标记法(TUNEL法)检测肝细胞凋亡指数,透射电子显微镜观察凋亡细胞形态。结果两实验组乳猪的感染率均为100%,亚洲带绦虫实验组较牛带绦虫实验组肝脏上的囊尾蚴数量多且发育较好。HE染色结果显示,两实验组均出现相似的肝脏组织病理学改变,感染后第15和32天,肝细胞水肿,胞浆疏松化,甚至气球样变,并可见肝细胞点片状坏死,感染后第46天,部分肝细胞呈小灶性坏死,感染后第74天,以肉芽肿形成和局部性肝纤维化为特征。TUNEL结果显示,感染后第46和74天,亚洲带绦虫实验组[(15.07±3.42)%和(27.33±0.92)%]和牛带绦虫实验组肝组织细胞的凋亡指数[(17.13±1.62)%和(34.20±0.73)%]均明显高于对照组[(9.53±1.06)%和(13.60±2.26)%](P<0.05),且牛带绦虫实验组均高于亚洲带绦虫实验组(P<0.05)。透射电子显微镜观察发现,两实验组肝组织内均可见明显的肝实质细胞凋亡的形态特征,表现为细胞核体积缩小且皱缩变形,染色质凝结成块并聚集于胞核边缘,并可见典型的凋亡小体。结论 2种带绦虫囊尾蚴感染乳猪后中、晚期均可诱导明显的肝组织细胞凋亡。
- 牟荣包怀恩张科吴家红郎书源
- 关键词：亚洲带绦虫牛带绦虫乳猪肝脏
- 未成熟与成熟猪囊尾蚴蛋白双向电泳的图谱分析
- 2011年
- 为从蛋白质水平揭示猪带绦虫入侵中间宿主家猪的免疫逃避机制,应用双向电泳技术分析未成熟与成熟猪囊尾蚴蛋白质表达差异,进行双向电泳图像软件分析。结果表明:未成熟猪囊尾蚴与成熟猪囊尾蚴蛋白的双向电泳凝胶上分别有(217±13)个、(241±17)个蛋白斑点,未成熟猪囊尾蚴表达上调2倍以上的蛋白有6个,下调2倍以上的蛋白有2个。
- 方文肖靓靓包怀恩牟荣
- 关键词：猪带绦虫囊尾蚴双向电泳蛋白质组
- 猪带绦虫卵实验感染家猪后囊尾蚴在家猪体内发育的观察被引量：5
- 2008年
- 目的了解猪带绦虫卵实验感染中间宿主家猪后,囊尾蚴发育过程中在家猪体内各个器官的分布及其发育成熟所需的时间等。方法以猪带绦虫卵(4.2万个/头)实验感染20～30日龄的家猪15头,在感染后不同时间宰杀,肉眼观察囊尾蚴在家猪体内各个器官上分布、数量、初次出现以及发育成熟所需时间等。结果感染后的第10d剖杀仔猪,肉眼观察各部位及脏器内均未见到囊尾蚴生长。感染15～30d时只在肝脏组织内见到少量未成熟囊尾蚴。感染40～70d时在肝脏寄生的囊尾蚴数量增多,同时开始在前肢和后肢的肌肉、胸肌、颈肌、脑组织、肾脏、肺脏内逐步见到未成熟的囊尾蚴。感染80～100d时肝脏、前肢和后肢的肌肉、胸肌、颈肌、脑组织、肾脏、肺脏内部分囊尾蚴开始先后发育成熟,但各器官组织内囊尾蚴的成熟率不等,肝脏内囊尾蚴成熟率(82.00%)高于其他器官,各器官内囊尾蚴成熟率随感染时间增加而增高。感染110～130d时肝脏内囊尾蚴成熟率(98.97%)仍高于其他器官内囊尾蚴成熟率。实验的全过程中,各器官内未见到死亡和钙化的囊尾蚴,脾内未见囊尾蚴生长。结论猪囊尾蚴可以在猪的肝脏内寄生,而且在肝脏内初次出现和发育成熟的时间均比其在全身的肌肉、脑等更早。提示猪肝脏也是囊尾蚴寄生的主要部位,在防治和卫生宣教工作中应予重视。
- 李宝华包怀恩牟荣衣凤芸李林杰朱武军吴泽江
- 关键词：猪囊尾蚴
- 双向电泳结合蛋白质印迹技术分析猪囊尾蚴乳酸脱氢酶被引量：1
- 2011年
- 为了研究猪囊尾蚴乳酸脱氢酶(LDH)的表达,试验选择四川省雅江县呷拉乡猪带绦虫病患者,给其口服槟榔-南瓜子驱虫,收集、制备虫卵悬液(8万个/mL),再给3头20日龄三元杂交乳猪猪灌胃虫卵悬液,每头1 mL,40 d后收集、制备猪囊尾蚴蛋白,进行双向电泳(2-DE)分析,将凝胶蛋白斑点转移至聚偏氟乙烯膜(PVDF膜),用自制的大鼠抗猪带绦虫LDH血清作为一抗、健康大鼠血清作为阴性对照进行蛋白质印迹(Western-blotting)分析。结果表明:双向电泳凝胶共检测到(207±9)个蛋白质斑点,相对分子质量(Mr)为14 400～94 000,等电点(pI)为3.0～10.0;试验组特异性抗原抗体阳性杂交斑点为1个,阴性对照未见阳性杂交斑点;将Western-blotting检测的抗原抗体阳性杂交斑点与原双向电泳凝胶斑点进行比对,找到对应蛋白斑点,经ImageMaster 2D Platinum 5.0软件分析后初步确定该蛋白斑点的pI/Mr为7.03/35 368,与猪带绦虫LDH的pI/Mr理论推导值接近,说明猪囊尾蚴表达LDH。
- 方文包怀恩肖靓靓牟荣
- 关键词：猪带绦虫囊尾蚴乳酸脱氢酶双向电泳蛋白质印迹
- 亚洲带绦虫六钩蚴和囊尾蚴的光学显微镜和扫描电镜观察被引量：2
- 2010年
- 目的了解亚洲带绦虫六钩蚴和囊尾蚴的形态及其表面超微结构。方法以人工胃液和人工肠液孵化亚洲带绦虫虫卵,密度梯度离心法纯化六钩蚴,于倒置显微镜观察其形态;以及经戊二醛及四氧化锇固定,梯度乙醇脱水,醋酸异戊酯置换,进行临界点干燥,喷碳、喷金,扫描电镜观察其表面超微结构。将六钩蚴经皮下注射感染小鼠,55 d后剖检取囊尾蚴,经胆汁孵化翻出头节,于光学显微镜直接观察或经硼酸卡红染色后镜检。另将囊尾蚴经PBS洗3次,依次经戊二醛固定、四氧化锇固定,梯度乙醇脱水,干燥、喷碳、喷金,扫描电镜观察。结果六钩蚴呈卵形,大小为（10.7~14×14~18.7）μm,表面凹凸不平,形成脊状突起。囊尾蚴呈椭圆形,囊膜表面见疣状突起。头节顶部有吻状顶突,顶突周围及凹陷处均密布大量菜花样突起。吸盘表面不光滑,底部有3~4圈珊蝴样排列的指状突起。颈节表面分布较多大小为（1~3×3~5.5）μm近似球形的颗粒。结论亚洲带绦虫六钩蚴表面凹凸不平,囊尾蚴有明显的吻状顶突,顶突处无小钩,但却分布大量的菜花样突起。
- 陈峥宏吴晓娟包怀恩郎书源
- 关键词：亚洲带绦虫六钩蚴囊尾蚴扫描电镜
- 猪囊尾蚴基质金属蛋白酶-9在猪肌肉和脑组织的表达分布
- 2011年
- 应用免疫组化分析猪囊尾蚴基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。用猪带绦虫卵1 mL(8万个/mL)灌胃20 d龄健康乳猪6头,于感染后40、801、20 d分别宰杀2头猪并取含囊尾蚴的肌肉及脑组织制作4μm厚石蜡切片,采用Envision二步法,观察不同时期寄生在肌肉及脑组织的猪囊尾蚴基质金属蛋白酶-9的表达。结果显示,不同时期寄生在肌肉及脑组织的猪囊尾蚴均表达MMP-9,随着感染时间增加,各组织猪囊尾蚴MMP-9的表达均变化不大(P>0.05),寄生在脑组织的猪囊尾蚴MMP-9的表达要略高于同期寄生在肌肉组织的猪囊尾蚴MMP-9的表达(P<0.05)。感染部位组织学特征不同,猪囊尾蚴MMP-9的表达略有差异。
- 方文肖靓靓包怀恩牟荣
- 关键词：猪囊尾蚴基质金属蛋白酶-9免疫组化
- 云南、贵州两省38条人体带绦虫的分子鉴别被引量：10
- 2010年
- 目的对采自云南、贵州两省的38条人体带绦虫进行分子鉴别,了解当地猪带绦虫、牛带绦虫和亚洲带绦虫的分布状况。方法对云南大理和贵州都匀及从江地区有排节片史的病人以槟榔-南瓜子法驱虫,虫体经形态学初步鉴别后,以组织DNA提取试剂盒提取虫体基因组DNA,分别采用亚洲带绦虫、牛带绦虫和猪带绦虫线粒体细胞色素C氧化酶亚单位1基因(cox1)片段的特异性引物对各DNA样品进行常规PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测;PCR阴性样品采用带绦虫cox1片段PCR通用引物进行扩增,并选择1份亚洲带绦虫特异性PCR阳性的样品作为对照。从3种带绦虫PCR阳性的扩增产物中各选择1份进行核酸序列测定,并用NCBIBlast将各核酸序列与GenBank数据库中带绦虫的cox1进行比对分析。结果采自大理的4条带绦虫(DL1～4)的猪带绦虫cox1片段PCR为阳性,扩增产物约980bp;其余25条大理带绦虫(DL5～29)和5条都匀带绦虫(DY1～5)的亚洲带绦虫cox1片段PCR为阳性,扩增产物约260bp;各样品的牛带绦虫cox1片段PCR均为阴性。DL2PCR产物的核酸序列与GenBank中猪带绦虫cox1的同源性为99%～100%,DY1PCR产物的核酸序列与亚洲带绦虫cox1的同源性为100%。特异性PCR均阴性的4条从江带绦虫(CJ1～4)和亚洲带绦虫特异性PCR阳性的DL7以带绦虫cox1片段通用引物的PCR扩增出约1kb的产物。测序表明,CJ1片段的核酸序列与牛带绦虫cox1的同源性为99%,DL7与亚洲带绦虫cox1的同源性为99%～100%。结论cox1片段PCR扩增和核酸测序分析表明,采集的云南大理人体带绦虫为猪带绦虫和亚洲带绦虫,贵州都匀和从江人体带绦虫分别为亚洲带绦虫和牛带绦虫。
- 陈峥宏包怀恩牟荣吴晓娟郎书源杨廷秀胡兴竹
- 关键词：亚洲带绦虫猪带绦虫牛带绦虫分子鉴别
- 两种带绦虫感染家猪的病理学比较研究
- 2011年
- 为了探明亚洲带绦虫和牛带绦虫在家猪体内的发育规律及致病性,试验用两种带绦虫卵分别灌胃感染家猪,于不同时间剖检,观察两种带绦虫在家猪体内的发育情况,并取肝组织进行病理检查。结果表明:家猪对两种带绦虫卵均易感,是亚洲带绦虫的适宜中间宿主,牛带绦虫的非适宜中间宿主;亚洲带绦虫囊尾蚴寄生数量多,各期发育良好;而牛带绦虫囊尾蚴寄生数量少,囊尾蚴发育及存活时间短,体积小。两种带绦虫均可造成家猪不同程度的病理损害,以亚洲带绦虫造成的损害更严重。
- 令狐艳朱武军包怀恩陈艳李建华
- 关键词：亚洲带绦虫牛带绦虫家猪囊尾蚴病理学
- 头节小钩数目异常链状带绦虫的鉴定
- 2010年
- 目的对采自云南大理的3例寄生人体的3条小钩数目异常的疑似链状带绦虫进行虫种鉴定。方法肉眼观察虫体,镜下观察头节和孕节形态。提取3条带绦虫的孕节DNA,PCR扩增链状带绦虫细胞色素C氧化酶亚单位1基因(cox1)片段和全长基因,对其中1条的cox1全长基因的PCR产物测序。孵化虫卵,皮下注射感染9只小鼠,同时每只小鼠皮下注射地塞米松1mg/d×45d,感染60d后剖检,观察囊尾蚴形态。将虫卵喂食2只猕猴(2.5×105/只),47d后剖检,光镜和扫描电镜观察囊尾蚴形态,观察其肝脏的病理改变。结果3条疑似链状带绦虫头节顶突的小钩数目分别为0、4和10,孕节子宫单侧分支数为7～12。3条带绦虫cox1片段的链状带绦虫种特异性引物PCR结果均为阳性,cox1全长基因的测序结果表明,其与GenBank中多株链状带绦虫的cox1基因序列一致性为99.8%。小鼠皮下、猕猴肌肉和心脏均可检获囊尾蚴,经压片镜检可见头节上的4个吸盘和顶突,顶突上均有内外两圈共26～28个小钩。猕猴肝实质内见粟粒样病灶,组织切片显示,病灶周围纤维结缔组织增生,有嗜酸粒细胞浸润,部分囊腔内可见虫体结构。结论3条小钩数目异常的带绦虫为链状带绦虫,其幼虫可感染猕猴,引起肌肉型囊尾蚴病和肝囊尾蚴病。
- 陈峥宏包怀恩吴晓娟杨廷秀胡兴竹
- 关键词：囊尾蚴病猕猴分子鉴定
- 猪带绦虫囊尾蚴在实验感染家猪体内的分布及发育
- 2008年
- 目的:探讨猪带绦虫卵实验感染中间宿主家猪后,不同时期囊尾蚴在家猪体内各个器官的分布及发育情况。方法:以猪带绦虫卵实验感染20～30日龄的家猪4头,在感染后不同时间宰杀感染家猪,肉眼观察囊尾蚴在家猪体内各个器官上的分布数量及大小。结果:感染后第40天剖杀家猪,多数脏器和组织,如肝脏、心脏、脑、肺、舌、四肢及驱干肌肉内有未成熟囊尾蚴寄生;感染第80天时各器官及组织内囊尾蚴先后发育成熟,囊尾蚴随感染时间增加而逐渐增大;感染第120天或第150天时,除肝脏外各器官及组织内仍可见大量成熟囊尾蚴,且无死亡和钙化现象,而此时肝脏内囊尾蚴几乎全部死亡和钙化;在实验全过程中,肾脏和脾脏未见囊尾蚴寄生。结论:猪囊尾蚴除在四肢肌肉等主要寄生部位生长外,还可以在猪的肝脏内寄生,但是随感染时间增加会逐渐死亡和钙化,表明在当前生猪快速出栏养殖过程中,猪肝脏无囊尾蚴寄生时,其余主要寄生部位如四肢和驱干肌肉内仍有囊尾蚴寄生,提示在生猪检验检疫工作中应予以重视。
- 方文肖靓靓包怀恩牟荣
- 关键词：囊尾蚴心脏骨骼
