国家自然科学基金(81041075)
- 作品数：5 被引量：41H指数：3
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- C35基因诱饵表达载体的构建及活性检测
- 2011年
- 目的C35是一种新型的乳腺癌肿瘤标志基因,在乳腺癌细胞中存在普遍性高表达,可作为乳腺癌早期诊断的标志分子。为了进一步揭示C35基因在乳腺癌的发生和发展中对癌细胞的调控和信号转导机制,本研究拟构建C35基因的酵母双杂交诱饵表达载体,并进行自激活活性和诱饵蛋白毒性检测。方法采用RT-PCR自乳腺癌T47D细胞中克隆C35表达序列,合成3种C35基因片段,连接入诱饵表达载体pGBKT7,采用选择性培养皿和β-半乳糖苷酶(β-Galactosidase)分析检测重组质粒的自激活活性和细胞毒性。结果3种诱饵表达载体经鉴定全部克隆成功,其中C35全长基因的表达产物对酵母细胞具有生长抑制作用,两种截短体C35 1-153和C35 154-348不具有自激活活性和细胞毒性,无需3-AT抑制。结论C35全长基因的诱饵表达载体可能具有抑制酵母细胞自身蛋白表达系统的作用,两种截短体重组载体可应用于乳腺癌T47D cDNA文库双杂交筛选。
- 尹昆肖婷刘俏俏赵桂华朱嵩闫歌
- 关键词：乳腺癌酵母双杂交
- 青蒿琥酯联合头孢曲松钠对铜绿假单胞菌抗菌作用研究被引量：9
- 2015年
- 目的观察青蒿琥酯联用头孢曲松钠对铜绿假单胞菌的抗菌效果。方法分别采用纸片法和液体稀释法检测单独应用青蒿琥酯及与头孢曲松钠联用对铜绿假单胞菌标准株和临床分离株的抑菌活性,测定最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC);以铜绿假单胞菌标准株最小致死量(MLD)建立小鼠感染模型,分为对照组(0.9%NaCl溶液),菌液组,青蒿琥酯组,头孢曲松钠组,联合应用组一[菌液+15mg/(kg·d)+200mg/(kg·d)]及联合应用组二[菌液+30mg/(kg·d)+200mg/(kg·d)],分别给予相应药物治疗,检测受试小鼠的血液细菌清除情况及小鼠血清内毒素(LPS)和白细胞介素(IL)-17水平。结果体外实验结果显示单独应用青蒿琥酯对铜绿假单胞菌标准株及临床分离株均无抑杀作用,单独应用头孢曲松钠对铜绿假单胞菌标准株和分离株的MIC值分为156.25和312.5μg/ml,MBC值分别为312.5和625μg/ml;其中以3mg/ml青蒿琥酯联用1/8 MIC头孢曲松钠对临床分离株的协同作用最强,FIC指数达到0.125,以23.44μg/ml青蒿琥酯联用1/4MIC头孢曲松钠对铜绿假单胞菌标准株的FIC指数达到0.25;动物实验结果显示青蒿琥酯和头孢曲松钠联用组血液细菌数量分别为(180±20)CFU/ml和(163±25)CFU/ml,明显低于菌液组(960±53)CFU/ml(F=486.53,P<0.01)和头孢组(300±20)CFU/ml(F=34.907,P<0.01)。在观察期内,青蒿琥酯联合头孢曲松钠组小鼠血清IL-17含量24h时[(151.5±20.3)pg/ml,(197.8±12.8)pg/ml]达到最高峰,与菌液组(87.5±5.2)pg/ml和头孢治疗组(120.1±20.2)pg/ml比较差异均有统计学意义(F24h=45.831,P<0.01,F48h=12.183,P<0.01,F24h=14.003,P<0.01,F48h=8.378,P<0.05)。观察后期48h联合用药组小鼠血清LPS水平[(46.9±5.0)EU/L,(15.4±1.6)EU/L]与菌液组(57.2±3.4)EU/L比较差异有统计学意义(F=173.073,P<0.01),与头孢治疗组(37.4±14.3)EU/L比较差异有统计学意义(F=10.143,P<0.05)。各组LPS水平,IL-17水平,菌量水平基本一致。结论体内和体外联�
- 李琛琛尹昆李敏杨培培闫歌
- 关键词：青蒿琥酯头孢曲松钠铜绿假单胞菌内毒素白介素17
- C35蛋白在乳腺癌组织中的表达及临床意义被引量：5
- 2013年
- 目的通过检测C35蛋白在乳腺癌及正常乳腺组织中的表达,揭示C35蛋白在乳腺癌发生、发展、侵袭转移过程中的作用和意义。方法收集68例女性乳腺癌组织及20例乳腺正常组织,应用免疫组化技术检测分析C35蛋白在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌临床病理特征的关系;分析乳腺癌组织C35蛋白表达与ER、PR、HER-2蛋白表达的相关性及与肿瘤不同分子亚型的关系。结果 1)乳腺癌组织中C35蛋白的表达显著高于正常乳腺组织(P<0.05),而在正常乳腺组织C35蛋白呈现低表达或不表达。C35蛋白表达与乳腺癌组织临床病理学特点存在相关性,随着乳腺癌组织的临床TNM分期、病理组织学分级的增加,C35蛋白阳性率显著升高(P<0.05);2)乳腺癌组织C35蛋白表达与ER与PR的表达呈负相关(r分别为-0.035和-0.083),与HER-2蛋白的表达呈正相关(r=0.207);3)C35在乳腺癌不同分子亚型中的阳性率差异无统计学意义(P>0.05),有无淋巴结转移者C35蛋白阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。结论 C35蛋白在乳腺癌细胞中广泛存在,并与乳腺癌的发生、发展及预后有关,因而可作为乳腺癌诊断和治疗的标志物或新靶点。
- 巴再华朱嵩徐超尹昆闫歌
- 关键词：乳腺癌免疫组化技术
- 野生型和突变型乳腺癌标志基因C35蛋白的原核表达和纯化
- 2015年
- 目的构建野生型和C112S突变型乳腺癌标志基因C35的原核表达载体,使其在原核细胞中高效表达、纯化并予以鉴定。方法聚合酶链反应(PCR)法扩增野生型和突变型C35基因,将其分别插入原核表达载体p GLO1中,构建重组融合蛋白表达载体野生型p GLO1-C35和突变型p GLO1-C35,转化大肠杆菌E.coli BL21,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达C35融合蛋白,并对诱导条件进行优化,通过镍离子螯合亲和层析柱纯化野生型和突变型C35融合蛋白,经蛋白质印迹法验证纯化的重组蛋白特异性。结果成功构建了野生型和突变型C35基因的原核表达质粒,并将两种C35融合蛋白成功表达,最佳诱导表达条件为37℃,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导6 h,经纯化后获得高纯度的特异性重组蛋白,浓度达约1.5 mg/m L。结论在原核表达系统中成功表达、纯化了野生型和突变型C35融合蛋白,为进一步制备基于C35抗血清的乳腺癌早期筛查试剂盒奠定了基础。
- 尹昆赵桂华寇景轩李琛琛黄炳成魏庆宽闫歌
- 关键词：肿瘤原核表达纯化乳腺肿瘤
- 抗疟药青蒿素及其衍生物相关药理作用研究进展被引量：27
- 2016年
- 青蒿素是从药用植物的生物活性组分-倍半萜内酯化合物中提取到的一种抗疟特效药,鉴于其具有的高效、低毒、安全、快速杀灭疟原虫等药理特性而作为间日疟、恶性疟和抗氯喹疟疾治疗的首选药物。近年来,随着青蒿素及其衍生物药物研究的不断深入,相关报道已证实其除抗疟作用外亦具有抗菌、抗肿瘤、抗病毒、抗炎、抗纤维化等药理作用,通过挖掘青蒿素的潜在药用价值,对增加此类药物临床用途以及提高其利用效率迫在眉睫。本文对青蒿素及其衍生物除抗疟活性以外的其他药理作用的研究进展进行综述,为青蒿素类药物在临床方面的使用研究提供理论参考。
- 李琛琛尹昆闫歌
- 关键词：青蒿素青蒿素衍生物药理作用
