国家科技重大专项(2001BA804A20)
- 作品数：17 被引量：210H指数：10
- 相关作者：计融江涛于仁成周名江李爱峰更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心中国科学院中国海洋大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程生物学理学更多>>
- 抗伏马菌素B_1单克隆抗体的制备和特性被引量：3
- 2004年
- 目的 :建立敏感、特异和快速的针对伏马菌素B1(fumonisinB1,FB1)的酶联免疫吸附试验 (enzyme linkedimmunosorbentassay ,ELISA)检测方法 ,形成具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒。方法 :利用B细胞杂交瘤技术 ,建立能分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。结果 :用伏马菌素B1 牛血清白蛋白 (FB1 BSA)偶联物免疫 8～ 10周龄雌性BALB/c小鼠后 ,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2 / 0融合 ,经过 3～ 4次亚克隆建立了 1个稳定分泌抗伏马菌素B1毒素抗体的杂交瘤细胞株 ,命名为 5A9。将杂交瘤细胞打入BALB/c小鼠腹腔 ,获得含抗伏马菌素B1毒素单克隆抗体的腹水 ,并将腹水用饱和硫酸铵法进行纯化 ,得到单克隆抗体。该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,腹水中抗体的滴度分别为 2 .5 6× 10 6,参考工作浓度为 3.2× 10 5。纯化后抗体的IgG含量为 10 .4g/L ,亲和常数为 8.3× 10 -8mol/L。该抗体与其他结构类似物无交叉反应 ,具有较高的特异性。结论 :制备了具有高特异性和亲和力的抗伏马菌素B1单克隆抗体 ,初步形成了针对伏马菌素B1的ELISA检测试剂盒。
- 江涛王玉平韩春卉宫慧之计融
- 关键词：伏马菌素B1杂交瘤ELISA试剂盒
- 抗玉米赤霉烯酮单克隆杂交瘤细胞系的建立及单抗生产被引量：2
- 2005年
- 为快速检测食品中的玉米赤霉烯酮 (Zearalenone以下简称ZEN) ,建立了抗ZEN的单克隆杂交瘤细胞株。用ZEN BSA偶联物免疫 8～ 10周龄雌性BalB c小鼠后 ,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2 0融合 ,经过 4～ 5次亚克隆建立了稳定分泌抗ZEN抗体的杂交瘤细胞株 ,分别命名为Z2A4、Z8D6。将上述 2种杂交瘤细胞分别注入BalB c小鼠腹腔 ,获得含抗ZEN单克隆抗体的腹水。将腹水用饱和硫酸铵盐析法纯化 ,得到Z2A4、Z8D6单克隆抗体。经鉴定 ,其亚类为IgG1,抗体腹水效价Z2A4和Z8D6分别为 1∶1 6× 10 6和 1∶3 2× 10 6;分子量均为 15 0 0 4 0 (15 0kD) ;参考工作浓度分别为1∶4 0 0 0 0和 1∶10 0 0 0 0 ;纯化后抗体IgG含量分别为 34和 39mg ml ;抗体与其它霉菌毒素无交叉反应(交叉反应率 <1% ) ,具有较高特异性 ;抗体亲和力常数Z2A4和Z8D6分别为 5 5 2× 10 8和 4 6 8×10 9mol L。
- 王玉平计融江涛韩春卉宫慧之高秀芬
- 关键词：玉米赤霉烯酮杂交瘤细胞系
- 抗T-2毒素单克隆抗体的制备及特性被引量：6
- 2004年
- 目的 :建立敏感、特异和快速的针对T 2毒素的ELISA检测方法 ,形成具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒。方法 :利用B细胞杂交瘤技术 ,建立抗T 2毒素的单克隆杂交瘤细胞株。结果 :用T 2 羊免疫球蛋白 (T 2 GIgG)偶联物免疫 8～ 10周龄雌性BALB/c小鼠后 ,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2 /0融合 ,经过 3～ 4次亚克隆建立了 2个稳定分泌抗T 2毒素抗体的杂交瘤细胞株 ,分别命名为 2A7和 6E4。将上述 2株杂交瘤细胞分别注入BALB/c小鼠腹腔 ,获得含抗T 2毒素单克隆抗体的腹水 ,并将腹水用饱和硫酸铵法进行纯化 ,得到 2A7和 6E4单克隆抗体。两株单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,腹水中抗体的滴度分别为 6 .4× 10 6和 1.1× 10 7,参考工作浓度分别为1.0× 10 6和 3.2× 10 6。纯化后 2A7抗体的IgG含量为 16 .4g/L ,亲和常数为 8× 10 -8mol/L。 2A7抗体与其他结构类似物无交叉反应 ,具有较高的特异性。结论 :制备了具有高特异性和亲和力的抗T 2毒素单克隆抗体 ,初步建立了针对T 2毒素的ELISA检测方法。
- 江涛王环宇高秀芬王玉平宫慧之田静李凤琴计融
- 关键词：T-2毒素杂交瘤抗体单克隆
- 总黄曲霉毒素ELISA定量检测方法的研制被引量：13
- 2006年
- 为敏感、特异和快速地检测食品中总黄曲霉毒素的污染水平,在抗总黄曲霉毒素单克隆抗体的基础上,研制了间接竞争ELISA检测方法,包被抗原为AFB1-BSA,包被量为0.0625μgml,抗体工作浓度为1:1.6×106。该方法对黄曲霉毒素B+G标准品的最低检出浓度为0.13ngml,对样品的最低检出量为1.50μgkg。校正曲线的线性范围为0.26～20.00ngml,线性方程y=-0.4463x+0.3532(R2=0.9915);对黄曲霉毒素B+G50%的抑制浓度为2.08ngml;对玉米2个加标水平的平均回收率分别为94.56%和112.05%,对花生2个加标水平的平均回收率分别为87.50%和85.60%。该方法所用抗总黄曲霉毒素单克隆抗体对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的交叉反应率分别为100%、57.5%、104%和19%,与其它真菌毒素无交叉反应。
- 江涛柳桢郑佳李敏计融
- 关键词：黄曲霉毒素类抗体单克隆酶联免疫吸附测定
- 抗赭曲霉素A单克隆杂交瘤细胞系的建立及特性被引量：10
- 2004年
- 为快速检测食物中的赭曲霉素A ,建立了抗OchratoxinA的单克隆杂交瘤细胞株。用OA -匙孔嘁血蓝素 (OA KLH)偶联物免疫 8～ 10周龄雌性Balb c小鼠后 ,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2 0融合 ,经过 3～ 4次亚克隆建立了 3个稳定分泌抗赭曲霉素A抗体的杂交瘤细胞株 ,分别命名为 10G7、10G10和 5G11。将上述 3株杂交瘤细胞分别注入Balb c小鼠腹腔 ,获得含抗赭曲霉素A单克隆抗体的腹水。将腹水用饱和硫酸铵法纯化 ,得到 10G7、10G10和 5G11单克隆抗体。其中10G10、5G11单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,10G7单克隆抗体的Ig亚类为IgG2a。抗体腹水的稀释度为 1∶6 4× 10 6～ 1∶1 3× 10 8,参考工作浓度为 1∶1 0× 10 6～ 1∶3 2× 10 7。纯化后 10G7抗体的IgG含量为 16 4g L ,亲和常数为 9× 10 -8mol L。 10G7抗体与其它结构类似物无交叉反应 ,具有较高的特异性。
- 江涛王环宇高秀芬王玉平宫慧之田静李凤琴计融
- 关键词：赭曲霉素A单克隆抗体特异性抗体
- 应用黑褐新糠虾测试织纹螺毒性的初步研究被引量：2
- 2007年
- 尝试以黑褐新糠虾作为实验生物,研究了投喂不同毒性的织纹螺对糠虾存活的影响,并探讨了这一方法在织纹螺毒性测试中的应用。实验结果表明:有毒织纹螺能够导致黑褐新糠虾中毒死亡,糠虾的半致死时间与织纹螺的毒性之间有显著的相关性(R2=0.9943),在96 h内织纹螺对糠虾的半致死毒性为40.11 MU/g。利用黑褐新糠虾作为实验生物可以测试织纹螺样品毒性的高低,方法的检出限约为10.44 MU/g,与日本法定的河豚鱼食用安全标准(10 MU/g)相当。
- 李爱峰于仁成李钧王云峰颜天周名江
- 关键词：织纹螺黑褐新糠虾毒性测试
- 利用蛋白磷酸酶活力抑制法检测牡蛎体内的腹泻性贝毒被引量：20
- 2006年
- 基于腹泻性贝毒(Diarrhetic Shellfish Poison,DSP)中大田软海绵酸(Okadaic acid,OA)和鳍藻毒素(Dinophysis toxins,DTXs)能够抑制蛋白磷酸酶活力的特点,人们建立了一种利用碱性蛋白磷酸酶活力变化检测贝类中大田软海绵酸毒性当量的生物化学测试方法。本实验利用该方法对威海出入境检验检疫局采集的3个牡蛎样品进行分析,结果表明:3个牡蛎样品中不含有OA和DTXs毒素,但水解后可检出OA毒性,其中两个牡蛎水解样品的毒性当量分别为1.81和1.21μg OA eq./kg贝组织(湿重)。
- 李爱峰于仁成李钧唐祥海王云峰颜天周名江
- 关键词：蛋白磷酸酶腹泻性贝毒牡蛎
- 液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用分析河豚毒素被引量：25
- 2007年
- 应用C18反相色谱柱和HILIC亲水作用色谱柱,建立了河豚毒素（TTX）的液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用分析方法。应用反相色谱法,在选择离子监测（SIM）模式下,对TTX的分析具有良好的线性响应（r=0.9992）,方法检出限（S/N=3）为120pg,相对标准偏差（RSD）低于10%;应用亲水色谱法,在SIM和选择反应监测（SRM）模式下同样具有良好的线性响应（r=0.9996和r=0.9998）,检出限（S/N=3）分别为15pg和3.75pg,在SIM模式下RSD低于10%,在SRM模式下RSD处于10%~20%之间。亲水作用色谱柱大大提高了方法的灵敏度,由于SIM模式具有较高的精密度,建议应用HILIC色谱柱的SIM模式定量分析TTX。
- 李爱峰于仁成周名江
- 关键词：河豚毒素
- 抗黄曲霉毒素M_1抗体制备及检测方法建立被引量：14
- 2007年
- 目的制备针对黄曲霉毒素M1的单克隆抗体并建立针对黄曲霉毒素M1的间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。方法利用B细胞杂交瘤技术。建立能分泌抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，制备抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体，建立间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。结果研制出1株能特异性分泌抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为2F2。该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1，亲和常数为2．8×10^-11mol／L。该抗体与黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2和黄曲霉毒素M2等结构类似物有微弱的交叉反应，具有较高的特异性。在此基础上建立了间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。该方法的最低检出浓度为0．07ng／ml。校正曲线的线性范围为0．02～2ng／ml，线性方程y=-0．4364x＋0．2693（R^2=0．9949）。方法的加标回收率为72．5％～131．3％。结论制备了具有高特异性和亲和力的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体，并建立了快速、灵敏的针对黄曲霉毒素M1的酶联免疫吸附试验检测方法。
- 江涛俞琼李敏柳桢郑佳黄飚计融
- 关键词：黄曲霉毒素M1单克隆抗体酶联免疫吸附试验
- 采用噬菌体展示技术筛选黄曲霉毒素B_1模拟抗原表位被引量：12
- 2007年
- 目的从随机肽库中筛选黄曲霉毒素B1模拟抗原表位，以建立无需黄曲霉毒素B1偶联抗原的免疫学检测方法。方法利用噬菌体展示技术，以抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体为靶分子，从随机七肽库中进行生物亲和淘选，ELISA鉴定阳性克隆，通过DNA测序对每个阳性克隆进行定性分析。结果通过4轮结合，扩增循环，获得了能与抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体结合的肽，采用间接竞争ELISA，筛选到了4株能抑制黄曲霉毒素B1的阳性克隆子，经DNA测序得到HXXDPXH共有序列，其中X为任意氨基酸。以其中P10噬菌体阳性克隆建立竞争ELISA方法，线性范围为500～2000pg／ml，检测下限为50pg/ml。结论利用噬菌体展示技术筛选到了黄曲霉毒素B1模拟抗原表位，并以其代替黄曲霉毒素B1偶联抗原建立了免疫学检测方法。
- 邓省亮许杨刘仁荣
- 关键词：黄曲霉毒素B1单克隆抗体噬菌体展示肽库模拟表位
