国家自然科学基金(30973272)
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
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- 慢病毒载体介导PAX6沉默引起HLE-B3细胞凋亡
- 2013年
- 目的:观察PAX6基因沉默后人晶状体上皮细胞系(HLE-B3)增殖的改变。方法:分别将4组PAX6 shRNA慢病毒载体及对照组慢病毒(pGCL-GFP-shRP1,2,3,4,NC)感染B3细胞;感染96h后,利用Real-time PCR和Western-blot检测B3细胞PAX6表达以确定PAX6沉默;选取有效沉默PAX6基因的pGCL-GFP-shRP4感染B3细胞,MOI=10,观察细胞数量变化。感染48h后采用流式细胞仪检测B3细胞凋亡情况。结果:感染RNAi病毒组的B3细胞,随感染时间延长,细胞数量减少。流式细胞仪检测结果显示沉默PAX648h的B3细胞,G1/G0期前出现凋亡峰。结论:慢病毒介导的RNA干扰能有效沉默B3细胞的PAX6表达;PAX6基因沉默后B3细胞凋亡。
- 黄悦李志清马志伟孙慧敏
- 关键词：慢病毒PAX6细胞凋亡
- 人PAX6基因shRNA慢病毒载体的构建及鉴定
- 2012年
- 目的体外构建人PAX6基因的shRNA慢病毒载体并鉴定。方法实验研究。设计PAX6基因特异性siRNA靶点,构建PAX6 shRNA重组质粒,构建表达FLAG tag、PAX6以及红色荧光蛋白报告基因的融合蛋白表达质粒,经Western Blot加以验证,使用293T细胞进行有效靶点的外源筛选。构建慢病毒pGCL-GFP载体,在293T细胞中包装病毒,将shRNA重组病毒感染人晶状体上皮细胞系(HLE-B3),检测B3细胞PAX6蛋白表达情况,从而筛选有效靶点。根据PAX6基因的4个候选RNAi靶序列,构建shRNA重组质粒,并构建FLAG tag、PAX6、红色荧光蛋白融合蛋白的表达系统。结果经验证外源PAX6基因,发现3个候选靶点是有效的RNAi靶点,能使PAX6蛋白表达水平显著降低。在此基础上构建的PAX6 shRNA重组慢病毒载体,显著抑制了HLE-B3细胞PAX6蛋白的内源性表达。结论成功构建了人PAX6基因的shRNA慢病毒表达载体,在分子水平能够有效沉默靶基因,为后续探讨PAX6对晶状体上皮细胞的生物学作用奠定了基础。
- 黄悦李志清马志伟孙慧敏
- 关键词：PAX6RNA干扰慢病毒人晶状体上皮细胞
- PAX6基因在眼发育中的调控作用被引量：7
- 2013年
- PAX6基因在胚胎发育过程中起着重要的作用。它通过调节细胞增殖迁移、分化和黏附等活动,在不同的组织和细胞中发挥不同的功能。PAX6基因的异常表达是许多先天性疾病的原因,尤其在眼睛、神经系统、鼻、胰腺和内分泌腺等组织器官的先天性疾病。我们介绍PAX6基因的背景知识,并对其上下游基因和基因突变对眼发育的影响进行综述。
- 李志清黄悦孙慧敏
- 关键词：PAX6基因基因突变胚胎发育
