广东省自然科学基金(037050)
- 作品数：10 被引量：28H指数：3
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- ^(131)I-Rituximab对B细胞淋巴瘤细胞杀伤效应的实验研究
- 2009年
- 目的研究131I标记的Rituximab对CD20表达阳性的B细胞淋巴瘤细胞的特异性杀伤作用,为放射免疫导向治疗提供实验依据。方法应用IODO-GEN法对Rituximab进行131I标记,以MTT比色法测定131I-Rituximab、131I和Rituximab对Raji细胞的剂量效应曲线,并根据剂量效应曲线选取合适的剂量,以131I-Rituximab、131I及Rituximab作用于CD20阳性的RamosRA-1细胞、Raji细胞以及CD20阴性的Molt-4细胞,根据细胞存活率的变化,评价131I-Rituximab、131I及Rituximab对上述细胞的杀伤作用。Gimesa染色观察核分裂指数(MI值)等指标评价131I-Rituximab对Raji细胞的抗肿瘤活性。结果131I-Rituximab对Raji细胞的杀伤作用呈剂量依赖性;选取60μCi/ml作为疗效实验的作用剂量,131I-Rituximab组的细胞抑制率显著高于Rituximab组(P<0.05)。Raji细胞在131I-Rituximab、131I、Rituximab作用96h后的细胞抑制率,与同等条件下的Ramos(RA-1)细胞比较,无显著性差异(P>0.05);与同等条件下的Molt-4细胞比较,均显著增高(P<0.05)。④131I-Rituximab的MI值最低,与其他各组比较有显著性差异(P<0.001)。结论131I-Rituximab可特异性杀伤CD20表达阳性的肿瘤细胞,为放射免疫治疗CD20阳性的B细胞淋巴瘤提供可能性。
- 魏莉罗荣城张军一严晓吕成伟
- 关键词：放射免疫治疗B细胞淋巴瘤CD20
- HER2基因的克隆及其在MCF-7细胞中的表达被引量：1
- 2005年
- 目的克隆人表皮生长因子受体(HER2)基因,建立共表达HER2基因和雌激素受体(ER)基因的MCF-7细胞模型。方法从高表达HER2的人乳腺癌细胞株SKBR-3中,用RT-PCR技术克隆HER2基因全长cDNA,将其插入载体pcDNA3.1中构建重组真核表达载体pcDNA3.1-HER2。测序鉴定后,利用阳离子脂质体介导将其转染ER阳性的乳腺癌MCF-7细胞,经G418筛选阳性克隆。用免疫细胞化学、流式细胞术及Westernblotting等方法检测HER2基因在MCF-7细胞中的稳定表达情况。结果DNA测序证明,获得的HER2基因序列与GenBank中报道序列完全一致。将其转染MCF-7细胞,经流式细胞术、Westernblotting及免疫细胞化学等方法检测证实,转染细胞内有HER2基因高表达。结论成功克隆HER2基因并获得共表达HER2基因和ER基因的MCF-7细胞株。
- 李荣郑航罗荣城
- 关键词：人表皮生长因子受体雌激素受体克隆转染乳腺肿瘤MCF-7细胞
- ^131I-Herceptin在荷人乳腺癌裸鼠模型中的生物分布及抗肿瘤活性研究被引量：12
- 2009年
- 目的探讨^131I-Herceptin在荷人乳腺癌裸鼠模型中的生物分布及其对人表皮生长因子2（HER2）高表达乳腺癌的放射免疫治疗疗效。方法^131I-Herceptin采用Iodogen法制备。15只HER2高表达乳腺癌裸鼠模型分为3组：^131I-Herceptin组、Herceptin组与空白对照组，每组5只。以肌肉为参照，注射后第3，6，9天显像观察肿瘤等组织的放射性摄取并计算肿瘤／肌肉（T／M）比值。注射后1～9d，测量肿瘤大小并计算肿瘤抑制率。第9天处死裸鼠，剥离肿瘤，计算肿瘤的每克组织百分注射剂量率（％ID／g）值并以Western—Blot法、反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测肿瘤组织HER2及癌胚抗原（CEA）蛋白及基因表达水平的变化。肿瘤T／M比值与其他脏器的差别、HER2及CEA基因表达水平、蛋白表达水平在各治疗组间的差异采用One—way ANOVA检验；^131I-Herceptin组和Herceptin组肿瘤抑制率的差异采用t检验。结果^131I-Herceptin的放化纯为94％，比活度约为37kBq／μg，在注射后第9天，T／M比值达4．11，显著高于其他组织（F=12．370，P〈0．05）；肿瘤摄取分数为（16．1±1．7）％ID／g，高于其他组织、器官（F=166．150，P〈0．01）。至治疗后9d，^131I-Herceptin组抑瘤率显著高于Herceptin组[（42．0±6．9）％与（23．2±3．8）％，t=5．321，P〈0．001]。^131I-Herceptin组HER2蛋白表达（0．435±0．087与0．557±0．043，t=2．811，P〈0．05）与基因表达（0．256±0．073与0．350±0．029，t=2．678，P〈0．05）均显著低于Herceptin组。^131I-Herceptin组CEA蛋白表达（0．537±0．048与0．607±0．029，t=2．800，P〈0．05）与基因表达（0．362±0．048与0．607±0．079，t=5．932，P〈0．001）均显著低于Herceptin组。结论^131I-Herceptin对HER2高表达的乳腺癌具有很高的靶向特性，能比Herceptin更有效地抑制乳腺癌细胞分裂、增殖、分化、存活，控制肿瘤生长。
- 范义湘石卫民罗荣城高梅菊刘青竹李科斌吴继珍
- 关键词：放射免疫疗法表皮生长因子-尿抑胃素碘放射性同位素
- ^(131)I-Herceptin的血液存在方式及体内外稳定性研究被引量：1
- 2010年
- 目的探讨131I-Herceptin的稳定性与生物学特性。方法 131I-Herceptin采用Iodogen法制备,其基础放射化学纯度(RCP)为(94.9±2.7)%。4℃冰箱内放置3、24、48、72、96h,取各时间样品测RCP。取家兔5只,静脉注射131I-Herceptin后1h、3h、6h、24h、2d、3d、4d、5d取血,分离血清及血细胞,测血清131I-Herceptin的RCP,并测定血清或血细胞放射性计数百分比。各组样品RCP的差异分析采用One-way Anova检验。结果 4℃放置72h以内,RCP未见显著下降(F=15.985,P<0.001);72h后显著(t=9.971,P<0.001)下降至(82.6±2.8)%。注射后1～96h,131I-Herceptin主要存在于血清,其放射性所占比例稳定在81%～87%。注射体内后1h,血清内131I-Herceptin的RCP为(90.9±8.5)%,未见显著差异(t=1.753,P>0.05)。24h后为(75.4±3.9)%,提示开始显著降低(t=6.564,P<0.001)。结论采用Iodogen法标记的131I-Herceptin,体外放置72h内,放射化学纯度基本稳定,注入体内后主要存在于血清,24h以内放射化学纯度稳定,24h后降解明显。
- 范义湘石卫民黄凯龄刘青竹李科斌吴继珍罗荣城
- 关键词：碘放射性同位素HERCEPTIN代谢
- ^(131)I-Herceptin放射免疫显像用于Herceptin相关心脏毒性机制的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨Herceptin相关心脏毒性的机制。方法131I-Herceptin采用Iodogen法制备。取家兔5只,注射131I-Herceptin 3h～5d,以放射免疫显像观察Herceptin的分布,以肌肉为参照,计算并比较各组织、器官的计数与肌肉计数的比值(O/M)。于注射后第5天处死家兔,取心、肺等组织,称重并测定放射性计数,计算并比较每克组织摄取分数(%ID/g)。以免疫组化测定并比较家兔各脏器HER2表达。结果注射后3h心脏O/M比值显著高于肺(P=0.032)和肝(P=0.019),但24h后显著降低(P=0.001)。各组织器官的每克组织的摄取分数以血液最高,为12.6%ID/g;其次为肝,为8.6%ID/g;心肌、肺和脾的摄取分数相近;肌肉最低,为1.6%ID/g。血液的摄取分数与其它脏器比较,除肝脏外(P=0.098),其它均显著低于血液。心肌摄取仅高于肌肉(P=0.041)和小肠(P=0.034),数值上甚至低于肝、肾、脾。心肌、肺和脾的摄取分数相近。心肌HER2表达水平与肝、肺、肾等组织未见显著差异(H=3.236,P=0.172)。结论心肌属于HER2低表达组织,对Herceptin的摄取量并不高于其它组织器官。
- 范义湘罗荣城高梅菊刘青竹李科斌吴继珍石卫民
- 关键词：HERCEPTIN心脏毒性放射免疫显像免疫组织化学染色
- ^(131)I-Herceptin对乳腺癌细胞株的体外杀伤效应被引量：8
- 2005年
- 目的研究核素131I标记Herceptin对Her-2表达阳性乳腺癌细胞株的特异性杀伤作用。为放射免疫导向治疗奠定基础。方法应用IODO-GEN方法将131I标记于抗Her-2单克隆抗体Herceptin,用MTT法检测131I-Herceptin对SK-BR-3、MCF-7、A5493种细胞株体外生长的抑制作用。结果131I-Herceptin的免疫活性与Herceptin无差异;131I-Herceptin对Her-2表达阳性的肿瘤细胞株的杀伤作用较Herceptin、131I明显增强(P<0.05),对于Her-2表达阴性或弱阳性的肿瘤细胞株无明显杀伤作用。结论131I-Herceptin可特异性杀伤Her-2表达阳性的肿瘤细胞。
- 林菁罗荣城李爱民张军一吕成伟严晓
- 关键词：HER-2
- HER2基因转染MCF-7细胞及生物学特性观察被引量：1
- 2005年
- 目的:建立共表达HER2(HumanEpidermalGrowthFactorReceptor2)基因和ER(EstrogenReceptor)基因的细胞模型,并观察转染细胞的生物学活性。方法:构建真核表达载体pcDNA3.1-HER2,利用脂质体介导将其转染ER阳性的乳腺癌MCF-7细胞,经G418筛选阳性克隆。用RT-PCR、Westernblot及免疫细胞化学等方法检测HER2基因在MCF-7细胞中的稳定表达情况,并通过MTT法和肿瘤细胞侵袭实验,观察转染细胞的生物学活性。结果:在mRNA和蛋白水平证实,转染细胞内有HER2基因的高表达,转染后细胞的增殖能力和侵袭能力明显增强。结论:构建含HER2基因的重组载体,导入乳腺癌MCF-7细胞后,获得生物学活性稳定的HER2基因和ER基因高表达的细胞模型,为进一步研究奠定了基础。
- 李荣郑航郑大勇罗荣城
- 关键词：HER2基因MCF-7细胞转染基因表达
- ^(131)I-rituximab对B细胞淋巴瘤细胞生物学效应的实验研究被引量：1
- 2006年
- 目的研究131I标记的rituximab对CD20高表达的B细胞淋巴瘤细胞的生物学效应,为放射免疫导向治疗提供实验依据。方法 IODO-GEN法将131I标记于抗CD20单抗rituximab,用Annexin Ⅴ-FITC／PI双染法检测131I-rituximab对 Raji细胞的诱导凋亡作用,PI染色法检测细胞周期分布。结果 Annexin Ⅴ-FITC／PI双染法检测凋亡率:131I-rituximab组凋亡率为51．99％,131I组为42．71％,rituximab组为29．42％,对照组为26．17％。对照组和rituximab组凋亡率明显低于131I 组和131I-rituximab组(P<0．05)。PI染色法对比各组的凋亡率(亚二倍体峰):131I-rituximab组细胞凋亡率为4．32％,131I组为 1．47％,rituximab组为1．39％,对照组仅0．37％,131I-rituximab组凋亡率明显高于其他各组(P<0．05)。131I-rituximab组Raji细胞周期发生变化,细胞大部分被阻滞于G1／G2期。结论 131I-rituximab能够调控Raji细胞的细胞周期并诱导其凋亡,从而抑制Raji细胞增殖。
- 魏莉罗荣城张军一严晓方永鑫费丽华
- 关键词：B细胞淋巴瘤放射免疫治疗RITUXIMABRAJI细胞
- 角蛋白19致敏的DC/CTL对MCF-7体外抑瘤作用的实验研究被引量：6
- 2005年
- 目的探讨体外经角蛋白19(K19)致敏的树突状细胞(DC)诱导的细胞毒T细胞(CTL)对MCF-7细胞株的抑瘤作用。方法经抗原多肽K19体外致敏外周血来源的DC诱导特异性CTL,流式细胞仪检测DC表面标志及细胞因子分泌,3H-TdR掺入法检测DC诱导CTL增殖,51Cr释放法测定CTL对MCF-7细胞的杀伤活性。结果外周血单个核细胞经体外扩增培养出可见树突状形状的DC,流式细胞仪检测细胞表面CD83、CD40、CD80及CD86高表达,混合淋巴细胞反应观察经K19致敏的DC刺激的自体淋巴细胞增殖明显较对照组高(P<0.01)。在同一效靶比时,K19致敏的DC诱导的CTL对MCF-7细胞的杀伤率与对照组比较差异有显著性(P<0.01),且随着效靶比增加,杀伤作用增强(P<0.01)。结论DC在体外经K19抗原致敏后,可诱导产生对MCF-7细胞有特异性杀伤作用的效应细胞杀伤MCF-7细胞,且随效靶比增加,杀伤力增强。
- 李鸣芳罗荣城尤长宣涂小玉
- 关键词：角蛋白19细胞毒T细胞抑瘤作用MCF-7
- 不同干扰素-γ浓度上调乳腺癌细胞系Her2/neu表达的实验研究
- 2006年
- 背景与目的:Herceptin是目前治疗Her2/neu高表达晚期转移性乳腺癌的常用分子靶向药物。如将具有强烈细胞毒作用的放射性核素131I联结到Herceptin进行放免靶向治疗,可提高Herceptin的药效。放射免疫治疗的疗效主要取决于定位在瘤体的抗体量。而肿瘤摄取标记抗体的量与肿瘤细胞靶位分子的表达量密切相关。本研究探讨不同浓度IFN-γ对乳腺癌细胞系Her2/neu的诱导效应,以选择最适IFN-γ浓度对乳腺癌细胞系Her2/neu的表达以及131I-Herceptin结合率的影响。方法:取对数生长期乳腺癌细胞系MCF-7、SK-BR-3和BT-474,实验组以终浓度为10、100、500、1000U/m l的IFN-γ诱导培养48h,对照组加入等量不含IFN-γ的培养液。每组设置3个复管。各组三种细胞Her2/neu的表达率及平均荧光强度(MFI)采用流式细胞仪(FACS)检测。采用Iodogen法对Herceptin进行131I标记,以高压液相层析法(HPLC)测定131I-Herceptin的放射化学纯度(RCP),以非竞争性饱和结合法测定三种细胞诱导前后对131I-Herceptin的结合量(Ncpm)及结合率(BR)。诱导前后三种细胞Her2/neu表达率、MFI和BR的差异采用t检验。结果:MCF-7、SK-BR-3和BT-474细胞Her2/neu基础表达率分别为8.5%、97.8%和98.2%,IFN-γ浓度分别为10U/m l、100U/m l时,三种细胞Her2/neu表达率以及MFI均未见显著性增高(t值未列出,P>0.05)。IFN-γ为500U/m l以上时,MCF-7细胞Her2/neu表达率显著提高(t=3.892,P<0.02),其它两种细胞表达率无明显变化(t值未列出,P>0.05),但三种细胞MFI均显著提高(P<0.05)。而500U/m l和1000U/m l组间Her2/neu表达率、MFI比较未见显著性差异(P>0.05)。131I-Herceptin在MCF-7、SK-BR-3及BT-474细胞的基础结合率分别为(5.3±1.5)%、(34.8±4.9)%和(36.2±4.7)%。经IFN-γ诱导后三种细胞对131I-Her-ceptin的结合率均增高,当IFN-γ浓度在500U/m l以上以及SK-BR-3经IFN-γ浓度为1000U/m l诱导时,结合率均显著提高(t值未列出,P<0.05)。Ncpm均不同�
- 罗荣城范义湘方永鑫严晓吕成伟
- 关键词：HER2/NEU干扰素Γ^131碘放射免疫治疗
