浙江省自然科学基金(LY12H16005)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 相关作者：曾玲晖王继荣丁燕魏建国朱锋更多>>
- 相关机构：浙江大学城市学院北京市宣武中医医院台州市中心医院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省医学扶植重点建设学科计划绍兴市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- zeste基因增强子同源物2抑制剂GSK126对前列腺癌细胞的作用及机制被引量：1
- 2016年
- 目的：探究zeste基因增强子同源物2（ EZH2）抑制剂GSK126对前列腺癌细胞增殖、凋亡及迁移的作用及机制。方法：以磺酰罗丹明B实验考察GSK126对PC-3和DU145细胞增殖的影响，以Annexin V／PI双染法考察GSK126对细胞凋亡的影响，以Transwell实验和细胞划痕实验观察GSK126对细胞迁移和侵袭的影响，以荧光定量PCR检测GSK126对肿瘤相关基因mRNA表达的影响，以蛋白质印迹法检测相关蛋白水平的变化。结果：GSK126仅在50．0μmol／L的高浓度剂量时能有效抑制PC-3和DU145细胞增殖，并促进其凋亡。经GSK126小、中、大剂量（5．0、20．0、50．0μmol／L）处理后，PC-3细胞划痕间距分别为（247．2±24．4）μm、（347．2±19．2）μm、（410．5±18．1）μm，与对照组（171．3±17．8）μm比较差异均有统计学意义（均P＜0．05），且呈一定的量效关系。 Transwell实验结果显示，每视野下侵袭的PC-3细胞数对照组为322．0±17．9，而经GSK126小、中、大剂量处理后分别为198．3±15．4、82．7±6．2、30．2±4．1，与对照组比较差异均有统计学意义（均P＜0．05）。 GSK126处理前列腺癌细胞后，与上皮细胞间质转化相关的E-cadherin基因mRNA表达量上升，N-cadherin、Vimentin基因mRNA表达量下降，但Snail、Fibronectin、VEGF-A基因的mRNA表达无变化。同时，蛋白质印迹法检测结果提示，E-cadherin 的蛋白表达量增加，而 VEGF-A 蛋白表达量无明显改变。DU145细胞上述实验结果相似。结论：GSK126能有效抑制PC-3细胞和DU145细胞迁移和侵袭，其机制与抑制上皮细胞间质转化相关。 GSK126可作为潜在的前列腺癌临床治疗用药。
- 林伟仁陈亚天曾玲晖应荣彪朱锋
- 关键词：细胞运动
- 睾丸间质细胞瘤6例临床病理分析并文献复习被引量：2
- 2016年
- 目的探讨睾丸间质细胞瘤（leydig cell tumors,LCT）的临床病理特点及鉴别诊断。方法对6例LCT患者临床病理资料进行回顾性分析和随访,并复习相关文献。结果 6例患者均为男性,年龄45~79岁,平均59岁。常见症状为阴囊肿大。组织病理学表现为片状分布的大的多角形细胞,胞浆嗜酸性,细胞核呈圆形或者卵圆形,可见一个或多个核仁,未见Reinke结晶。免疫组化标记显示肿瘤细胞表达a-inhibin、Melan A、Calretinin等。6例患者中5例行根治性切除,另1例因前列腺增大行前列腺及睾丸切除术。4例患者随访至今未出现复发及转移。结论睾丸LCT是一种少见的肿瘤,以良性为主,诊断及鉴别诊断依赖镜下形态及免疫组化化学染色。治疗主要采取睾丸切除术。
- 徐欣华张冬梅魏建国杨幼萍
- 关键词：间质细胞瘤睾丸病理特征免疫组化
- 整合素连接激酶基因敲降和黑色素瘤分化相关基因过表达慢病毒载体构建和鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的：建立整合素相关激酶（ ILK）基因敲降和黑色素瘤分化相关基因（ mda7）过表达慢病毒包装表达系统。方法：针对人ILK基因序列，设计基因敲降靶点序列（A、B、C），通过限制性内切酶HpaⅠ和XhoⅠ双酶切、T4 DNA连接酶连接，将ILK插入慢病毒载体pSicoR-eGFP，构建siILK-pSicoR-eGFP重组质粒；根据人mda7基因序列，设计引物扩增mda7全长，并插入慢病毒载体pLVX-Puro，构建mda7-pLVX-Puro重组质粒。经双酶切及测序鉴定正确后通过脂质体将慢病毒四质粒系统共转染人胚肾细胞系293 T细胞，进行慢病毒包装并测定病毒滴度、观察感染效率。各组病毒载体转染PC-3细胞后，用定量PCR和蛋白质印迹法检测ILK基因和mda7 mRNA转录水平及蛋白表达水平。通过MTT法和Transwell实验考察ILK和mda7对PC-3细胞增殖和迁移的影响。结果：成功构建ILK基因敲降及mda7过表达的慢病毒载体，四质粒系统共转染293 T细胞后可见大量绿色荧光染色阳性细胞。浓缩病毒后293 T细胞的感染效率在90％以上，并能高效率感染PC-3前列腺癌细胞。 ILK-A-pSicoR-eGFP和ILK-B-pSicoR-eGFP组ILK干扰效果最佳（P＜0．05），mda7的表达水平远高于对照组（P＜0．05），且持续稳定表达至少1个月。 ILK和mda7对PC-3细胞的增殖在96 h内有明显抑制作用，并对其迁移亦有显著抑制（均P＜0．05）。结论：成功构建并鉴定人ILK 基因敲降和mda7过表达慢病毒载体，可为探讨ILK和mda7基因在肿瘤细胞中的生物学功能提供良好工具，也为探索安全、高效的肿瘤治疗途径奠定实验基础。
- 杨幼萍丁燕王继荣曾玲晖林红霞朱杨丽吴宏卫王若燕张建民应荣彪
- 关键词：整合素类前列腺肿瘤白细胞介素类慢病毒属
