国家自然科学基金(30470909)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 相关作者：徐晨胡燕琴王旻刘春萌石建莉更多>>
- 相关机构：上海交通大学上海第二医科大学安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 激光捕获显微切割技术及其在男科学研究中的应用被引量：1
- 2006年
- 激光捕获显微切割技术是近年发展起来的一种新技术。该技术可以在显微镜下快速地从由多细胞组成的组织中捕获感兴趣的单一同类细胞群甚至单个细胞。这一技术迅速地被运用到疾病发生的细胞和分子机制的研究之中。这将有利于提高疾病的诊断、治疗及预后判断的水平。本文就激光捕获显微切割技术目前在男科学研究中的应用作一综述。
- 王旻徐晨
- 关键词：激光捕获显微切割技术男科学
- 溶脲脲原体蛋白UreG抗体对小鼠体外受精的影响被引量：1
- 2006年
- 目的:探索与人精子膜存在交叉反应的溶脲脲原体蛋白UreG抗体对小鼠体外受精的影响。方法:提取溶脲脲原体总DNA,用自行设计的引物扩增UreG全序列,PCR产物经TA克隆后,用BamHⅠ和HindⅢ双酶切,克隆到表达载体pET-28a(+)中。在E.coliBL21中,异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下表达His融合蛋白。用亲和层析纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,获取多克隆抗体。观察该抗体对小鼠体外受精的影响。结果:对表达重组蛋白的质粒进行DNA测序以及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,证实获取了目的蛋白。ELISA检测证实,免疫小鼠产生了高效价的抗体。该抗体能够抑制小鼠精卵的融合。结论:与人精子膜存在交叉反应的溶脲脲原体蛋白UreG抗体,可导致小鼠精卵结合率降低。
- 石建莉王旻程国艳胡燕琴刘春萌徐晨
- 关键词：溶脲脲原体免疫不育多克隆抗体受精
- 人细胞核自身抗原精子蛋白的重组表达及多克隆抗体制备被引量：2
- 2006年
- 目的:获得纯化的人细胞核自身抗原精子蛋白(hNASP)及其多克隆抗体,为其功能研究做准备。方法:提取人睾丸组织总RNA,用自行设计的引物,PCR扩增hNASP的一段序列,PCR产物经TA克隆后,通过BamHⅠ和HindⅢ双酶切克隆到pET-28 a(+)中。在E.coliBL21中,用异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达H is融合蛋白。样品超声处理后,经镍离子亲和树脂进行亲和层析纯化。用纯化的重组蛋白免疫家兔获取多克隆抗体。结果:对表达重组蛋白的质粒进行DNA测序以及表达的重组蛋白经过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,证实获取了目的蛋白。ELISA证实免疫家兔后获得高效价的抗体。结论:用上述原核生物表达的方法可以得到纯化的hNASP蛋白,用纯化的蛋白免疫家兔也能获得高效价的抗体。
- 王旻石建莉程国艳胡燕琴刘春萌徐晨
- 关键词：基因克隆蛋白表达多克隆抗体
- 重组Zonadhesin蛋白D4结构域对小鼠体外受精的影响
- 2009年
- 目的:研究Zonadhesin蛋白D4domain在受精过程中的作用。方法:将小鼠Zonadhesin D4结构域分亚结构域(VWDsubdomain及余C-端片段)克隆,在E.coli诱导表达目的蛋白,将纯化重组蛋白片段为抗原,制备兔抗鼠D4结构域多克隆抗体,免疫印迹法、精子间接免疫荧光染色鉴定多克隆抗体的特异性及D4结构域在小鼠精子表达。用多抗处理获能小鼠精子,然后与小鼠超排卵子进行体外受精及精子-透明带结合实验。结果:D4亚结构域成功克隆表达,制备了能特异性识别精子天然Zonadhesin D4的多克隆抗体,多抗处理组精子与卵透明带结合数与对照组差异无统计学意义,卵子的受精率也无明显差异。结论:抗重组Zonadhesin D4结构域的多抗对小鼠体外受精无抑制作用。
- 吕正梅王旻胡燕琴郭强苏徐晨
- 关键词：多克隆抗体体外受精小鼠
