国家自然科学基金(30873018)
- 作品数：9 被引量：27H指数：4
- 相关作者：陈忠李龙承吴嘉叶章群胡嘏更多>>
- 相关机构：华中科技大学加利福尼亚大学军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划美国国立卫生研究院基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- p21基因的saRNA表达质粒的构建及功能研究被引量：2
- 2011年
- 目的构建可表达具有RNA激活功能的小激活RNA(saRNA)质粒表达载体,并对其激活前列腺癌细胞PC-3中p21WAF1/CIP1(p21)基因表达的功能进行相关研究。方法人工合成与p21基因启动子特定序列相应的DNA片段及同样长度的随机DNA序列,利用DNA重组技术将这些片段构建到真核小分子双链RNA(dsRNA)表达质粒pGenesil-1中,构建成能表达dsRNA片段的表达质粒载体(dsRNAp21-pGenesil-1)和随机对照dsRNA片段的表达质粒载体(dsRNACon-pGenesil-1)。采用脂质体介导方法,分别将dsRNAp21-pGenesil-1(实验组)、dsRNACon-pGenesil-1(随机对照组)及空白质粒pGenesil-1(空白对照组)转染到体外培养的PC-3细胞,通过荧光染色检测转染效率,采用RT-PCR和免疫组化技术检测各组细胞p21蛋白表达的差异。结果成功构建目的表达载体dsRNAp21-pGenesil-1及随机对照载体dsRNACon-pGenesil-1,将各组质粒转染到PC-3细胞后,实验组p21基因表达明显增强,而随机对照组和空白对照组无明显变化。结论本研究构建的dsRNA表达质粒载体能成功表达saRNA分子,并激活p21基因及蛋白的表达,为研究的激活效应提供有效工具。
- 龚化陈忠胡嘏吴嘉李龙承杨为民叶章群
- 关键词：前列腺肿瘤
- RNA激活研究进展被引量：4
- 2012年
- 近年的研究发现非编码RNA（ncRNA）分子能在多个水平参与基因表达的调控机制,其中小分子双链RNA（dsRNA）对相关蛋白表达的特异性抑制作用已经进行了广泛而深入的研究,如小干扰RNA（siRNA）能够诱导与其分子核糖核苷酸排列序列相一致的mRNA降解,
- 陈忠李龙承
- 关键词：RNA降解核糖核苷酸小分子基因表达蛋白表达特异性
- 凝血酶活化的富血小板血浆促进人骨髓间充质干细胞增殖被引量：2
- 2010年
- 目的探索凝血酶活化的富血小板血浆(Thrombin-activated platelet-rich plasma,tPRP)替代牛血清,进行人骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stme cells,MSC)分离及培养扩增的可行性。方法分别用MTT法和羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记细胞技术,观察人骨髓MSC在含有tPRP和胎牛血清培养体系中的增殖状态:利用流式细胞学技术检测细胞表面表型;细胞化学染色法分析不同培养体系所获细胞的成骨及成脂细胞分化能力。结果tPRP培养的人骨髓MSC呈典型的成纤维细胞样形态,且tPRP促MSC增殖能力优于筛选后的胎牛血清。tPRP培养的MSC均表达CD29、CD73、CD166和HLA-ABC,而不表达CD31、CD34、CD45和HLA-DR。体外分化实验显示,利用tPRP培养的MSC具有体外成骨和成脂能力。结论tPRP可以替代胎牛血清,用于人骨髓MSC的培养。
- 具星爱郭子宽靳继德李占全
- 关键词：凝血酶富血小板血浆骨髓间充质干细胞
- p21saRNA真核表达质粒的构建及其在泌尿系肿瘤细胞中的功能被引量：1
- 2012年
- 目的构建可表达具有RNA激活功能的小分子双链RNA（dsRNA）真核表达质粒，并探讨其调控前列腺癌细胞株PC。3和膀胱癌细胞株T一24中抑癌基因p21 WAFI/CIPI表达的功能。方法构建真核表达质粒dsRNAP21-pGenesil-1，并分别转染至PC-3和T-24细胞株，通过实时定量聚合酶链反应（Real—timeqPCR）和Westernblot检测p21mRNA转录水平和蛋白表达的变化。结果测序结果证实目的表达质粒dsRNAP21-pGenesil-1构建成功，将其转染入PC-3细胞和T-24细胞中，Real—timeqPCR检测p21基因分别被上调4．35倍和2．83倍，Westernblot进一步证明在两种细胞株中p21蛋白表达水平的增加与p21mRNA水平的上调一致，且与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论构建的dsRNAP21-pGenesil-1质粒具备在泌尿系肿瘤中上调抑癌基因p21表达的能力。
- 胡嘏陈忠龚化吴嘉张勇王骥徐华李龙承杨为民叶章群
- 关键词：RNA真核表达质粒P21泌尿系肿瘤
- saRNA在转录水平激活人膀胱癌细胞p21^(WAF1/CIP1)的表达研究被引量：5
- 2012年
- 目的探讨小激活RNA-dsP21-322上调人膀胱癌细胞系T24中抑癌基因p21WAF1/CIP1(p21)表达的效应。进一步分析dsP21-322是否还可上调p21前体mRNA的表达,以及增强RNA聚合酶Ⅱ蛋白与dsP21-322靶向的p21启动子区的联系。方法合成靶向p21启动子区的小激活RNA序列dsP21-322及阴性对照(dsControl),并分别转染至T24细胞,RT-qPCR和WesternBlot分别检测p21mRNA、前体mRNA和蛋白表达的变化。ChIP检测RNA聚合酶Ⅱ蛋白与dsP21-322靶向的p21启动子富集的改变。结果 RT-qPCR和WesternBlot结果显示,dsP21-322可以明显上调T24细胞系中p21成熟mRNA、前体mRNA及p21蛋白的表达,且与dsControl相比,差异均有统计学意义(P<0.001)。此外,dsP21-322的转染可以明显增强RNA聚合酶Ⅱ蛋白与dsP21-322靶向的p21启动子区的联系。结论 dsP21-322上调抑癌基因p21表达是发生在转录水平的基因调控过程,这一特征的发现为后续RNA激活机制的研究提供了部分理论依据。
- 胡嘏陈忠吴嘉张勇王骥郭小林徐华李龙承杨为民叶章群
- 小分子双链RNA对人类细胞中抑癌基因p21表达的上调作用被引量：1
- 2012年
- 目的筛选更多的对小分子双链RNA(dsP21-322)介导抑癌基因p21WAF1/CIP1激活起效应的人类细胞系,并初步研究该过程是否依赖p53的表达。方法选择4种表达不同类型p53蛋白的人类细胞系,p53野生型(p53wild type)的人骨肉瘤细胞系U2-OS、人肾上皮细胞系293T,p53突变型(p53mutant type)的人宫颈癌细胞系HeLa及p53缺失(p53null)的人肺腺癌细胞系NCI-H1299,转染dsControl(阴性对照)或dsP21-322至以上细胞,RT-qPCR和Westernblot分别检测p21、p53mRNA和蛋白表达的变化。结果 dsP21-322的转染未明显影响上述细胞系p53的表达;而在U2-OS、HeLa和293T细胞系中均能激活p21的表达,相比dsControl,分别上调p21mRNA的表达3.97倍、4.94倍和4.64倍,Western blot进一步证明在这3种细胞系中p21蛋白表达水平的增加与p21mRNA水平的上调相一致,且与dsControl组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。但是在p53缺失的NCI-H1299细胞系中,dsP21-322则不能上调p21的表达。结论 dsP21-322介导p21激活现象存在于人类细胞,而其未能上调p53缺失细胞系中p21的表达是否提示该过程可能依赖p53的表达尚有待进一步研究。
- 胡嘏陈忠吴嘉张勇徐华杨为民叶章群
- 关键词：P21P53人类细胞
- 人骨髓间充质干细胞经肝细胞生长因子基因修饰后的促进鸡胚血管新生被引量：6
- 2009年
- 本研究目的是评价人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMMSC)经肝细胞生长因子基因(hepatocyte growth factor,HGF)修饰后的促血管新生效应,并初步分析其机理。利用重组腺病毒HGF转染hBMMSC,将细胞接种于鸡胚绒毛膜尿囊膜,与α-MEM、同代hBMMSC及bFGF比较,3天后计算其血管数量。用RT-PCR检测hBMMSC表达bFGF、VEGF、血管生成素-1和血管生成素-2的水平。结果表明:4个组中hBMMSC/HGF促血管生成能力最强,hBMMSC和bFGF组相近,α-MEM组最低。RT-PCR检测显示,hBMMSC和hBMMSC/HGF均表达多种促血管生成相关细胞因子,而HGF转染后表达水平升高。结论:经HGF基因修饰的hBMMSC具有较强的促血管新生的功能,本研究为缺血性疾病的治疗提供了有益的信息。
- 刘滋康靳继德何梓铭秦宜德郭子宽
- 关键词：间充质干细胞血管新生基因转移
- 四种哺乳类动物骨实质中存在间充质干细胞被引量：4
- 2010年
- 人们对间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)的生物学特性,已经进行了广泛的体外研究。然而,由于MSC缺乏特异性的表面标志,这类细胞在体内存在的具体部位仍不清楚。既往的研究表明,人和小鼠骨实质中存在MSC。为观察此现象是否见于其他动物,收集Wistar大鼠、Beagle犬、C57小鼠及新西兰白兔股骨,用I型胶原酶将其骨片消化;去除消化细胞后,将消化后的骨碎片接种于人骨髓MSC培养体系中。结果表明,数天后可见成纤维细胞样细胞从骨片中迁移,并逐渐形成致密的贴壁层,可传代培养,且均一表达间充质细胞标志波形蛋白。分化实验表明,细胞具有明显的体外成骨和成脂肪能力。鉴于骨实质结构简单,本研究结果为MSC体内分布特性研究提供了有意义的数据。
- 边素艳郭子宽叶平盛莉肖铁卉祁莉萍
- 关键词：间充质干细胞细胞培养哺乳动物
- RNAa与肿瘤被引量：5
- 2009年
- 陈忠李龙承
- 关键词：小分子RNA基因表达调控DSRNA肿瘤RNA分子RNAI
